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文档简介

Leptin基因Micewithouttheleptingenearemorbidlyobese(right)comparedtonormalmice(left).

1994RockfellerLeptin以2000万美元转让给Amgen

Effectsofrecombinanthumanleptintreatmentinachildwithleptindeficiency.第四章

目的基因的分离克隆

第一节

基因文库技术分离目的基因

1基因文库的含义

文库（library）：是指一种全体的集合。基因文库（genelibrary）：是指某一生物全部基因的集合。2基因文库的分类

1）基因组文库和cDNA文库

基因组文库（genomicDNAlibrary）：是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的片段，然后连接到某种载体上转化受体细胞而形成的克隆的集合。cDNA文库（cDNAlibrary）：是指某生物某一发育时期、某一组织或某种环境条件下所转录的mRNA经逆转录形成的cDNA片段与载体连接转化受体细胞而形成的克隆的集合。2）克隆文库和表达文库

克隆文库由克隆载体构建。表达文库由表达克隆载体构建。3）不同载体的文库

（1）质粒文库（2）噬菌体文库（3）粘粒文库（4）人工染色体文库3基因文库的构建

1）基因组文库构建的基本步骤（1）基因组DNA的提取及片段化（2）载体的选择和制备（3）DNA片段与载体连接形成重组DNA（4）重组DNA转化宿主细胞基因组文库（genomicDNAlibrary）：是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的片段，然后连接到某种载体上转化受体细胞而形成的克隆的集合。cDNA文库（cDNAlibrary）：是指某生物某一发育时期、某一组织或某种环境条件下所转录的mRNA经逆转录形成的cDNA片段与载体连接转化受体细胞而形成的克隆的集合。基因文库（genelibrary）：是指某一生物全部基因的集合。噬菌斑菌落cDNA（complementaryDNA，互补DNA）：以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下形成的DNA。5基因文库的筛选

探针(probe)：一小段用同位素、生物素或荧光染料标标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在硝酸纤维素膜上的核苷酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。

探针的设计3）PCR筛选法1基因文库的含义是什么？2什么是基因组文库和cDNA文库？二者有哪两点主要区别？3根据所使用的载体的不同类型，基因文库分为哪四种？4举例说明基因组文库构

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