版食品微生物检验复习计划提纲一

圆满版食品微生物查验复习计划纲领一圆满版食品微生物查验复习计划纲领一/圆满版食品微生物查验复习计划纲领一第一章绪论一、概括1、微生物的基本特色：体积小，比表面积大；汲取多，转变快；生长旺，生殖快；适应强，易变异；散布广，种类多二、食品微生物查验1、见解：运用微生物的理论与技术，研究外界环境和食品中的微生物的种类、数目、性质、活动规律及其对人和动物健康的影响，成立食品微生物学查验方法，确立食品卫生的微生物学标准的一门应用性学科。“食品卫生”与“食品安全”：1986年，世界卫生组织在题为《食品安全在卫生和发展中的作用》的文件中，曾把“食品卫生”与“食品安全”作为同义词，定义为：“生产、加工、存储、制作食品过程中保证食品安全靠谱，有利于健康而且适合人开销的各样必需条件和举措”。2、意义（一）有害微生物对人类和生产的影响：1.惹起食品变质2.惹起食品中毒3.致令人体生病(二)食品微生物查验的意义1、是权衡食品卫生质量的重要指标，也是判断被检食品能否食用的科学依据。2、可以判断食品加工环境及食品卫生的状况，为卫生管理工作供给科学依据。3、可以有效地防备或减少食品中毒和人畜共生病的发生。4、保证产品的质量，防备不用要的损失3、研究特色1）研究对象以及研究范围广2）波及学科多3）适用性及应用型强4）采纳标准化4、研究范围1）生产环境（车间用水、空气、地面、墙壁等）；2）原辅料（食用的动、植物，增添剂等）；3）食品加工、存储、运输、销售等环节；4）成品食品。5、研究任务1）研究各样食品中微生物种类、散布及其特色；2）研究食品的微生物污染及其控制，提升食品的卫生质量；3）研究食品中致病性、中毒性、致腐性微生物；4）研究微生物与食品收藏的关系；5）研究各样食品中微生物的查验方法及标准。6、食品微生物查验的发展过程1）致病菌检测阶段2）指示菌检测阶段1指示菌：在常例安全卫生检测中，用以指示查验样品卫生状况及安全性的指示性微生物。2特色：在环境中存在的数目多，易于检出；检测手段与方法简单；拥有必然的代表性。（3）查验目的：以指示菌在查验样品中存在与否以及数目的多少为依据，依据检出的状况，判断样品被污染的程度，间接指示致病微生物有无存在的可能，以及对人群能否组成暗藏的威迫，比较国家标准，对检品的食用的安全性作出谈论。（4）种类谈论被检样品一般卫生质量、污染程度以及安全性指标：菌落总数、霉菌、酵母菌等；特指粪便污介入标：大肠菌群、肠球菌、亚硫酸盐复原梭菌等；其余指示菌：包含某些环境不可以检出的菌类。菌落总数：指必然数目或面积的食品样品，经过办理，在必然条件下培育，使每一个活菌只能形成一个肉眼可见的菌落，所得1g或1mL或1cm2检样中所含细菌菌落数目即为菌落总数，常用CFU（菌落形成单位，clonyformingunit）表示。大肠菌群：指一群需氧及兼性厌氧，在37℃能分解乳糖产酸、产气的革兰氏染色阴性无芽孢杆菌。这些细菌均来自人和温血动物的肠道。3）微生态制剂检测阶段以乳酸茵、双歧杆菌为主，以调理生态均衡为目的的各样微生态制剂，查验其菌株的特色和数目。4）现代基因工程菌和还没有培育菌的检测阶段5）快速检测阶段化学比色分析法、酶联免疫法（ELISA)、免疫胶体金试纸检测法。生物芯片、传感器、色谱质谱检测仪。特色：实验准备简化、试剂少；样品前办理简单；分析方法简单、正确、快速。第二章食品微生物查验技术第一节培育基在实验室中配制的适合微生物生长生殖或积累代谢产物的任何营养基质，都叫做培育基。一、培育基中的主要成分及其作用（一）营养物质：N源、C源、无机盐、生长因子、水。1、常用的N源物质：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏2、糖、醇类物质单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖多糖：淀粉、纤维素、菊糖醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油（二）水用蒸馏水，不可以用自来水。（三）凝结剂琼脂、明胶、血清等。要求：清一色、杂质少。（四）控制剂1、作用：判断细菌、控制杂菌的生长生殖，增添待检菌的检出率。2、种类：盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等。染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红。胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混淆胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐。抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素。（五）指示剂1、作用：用于指示鉴识细菌能否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。2、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。2、固体培育基二、培育基的种类因为各样微生物对营养的要求不一样样，培育目的和检测需要不一样样，因此培育基的种类好多。我们可依据某种标准，将种类众多的培育基区分为若干种类。（一）依据培育基的物理状态来区分1、液体培育基：主要用于增菌培育、鉴识性培育，大型生产、科研等。：用作微生物的分别、判断、查验杂菌、计数、收藏、生物测定等。3、半固体培育基：察看微生物的动力，菌种判断等。4、脱水培育基：含有除水格外的全部成分的商品培育基，使用时加水灭菌。（二）依据培育基的用途来区分1、增殖培育基：在一般培育基中加入一些某种微生物特别喜爱的营养物质，以增添这类微生物的生殖速度，渐渐裁汰其余微生物，这类培育基称为增殖培育基。2、选择培育基：在培育基中加入某种物质以杀死或控制不需要的菌种生长的培育基，称之为选择培育基。分别培育用的培育基名称用途SS琼脂培育基沙门氏菌和志贺氏菌属分别HE琼脂培育基志贺氏菌分别鉴识伊红美蓝琼脂培育基大肠杆菌、产气杆菌分别鉴识麦康凯琼脂培育基（MacC）肠道致病菌分别甘露醇高盐琼脂培育基绿脓杆菌分别鉴识XLD琼脂培育基志贺氏菌、沙门氏菌分别中国蓝琼脂培育基肠道菌分别鉴识碱性琼脂培育基霍乱弧菌分别高盐蔡氏琼脂培育基真菌、酵母菌分别3、鉴识培育基：在培育基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培育后表现出显然差异，因此有助于快速鉴识某种微生物。这样的培育基称之为鉴识培育基。名称用途蛋白胨水培育基靛基质和霍乱红试验乳糖胆盐发酵培育基大肠杆菌发酵乳糖试验0.5%乳糖发酵培育基肠道菌生化试验（复发酵）半固体培育基动力试验和菌种保留三糖铁琼脂培育基（TST）肠杆菌糖发酵及硫化氢反响氰化钾基础培育基沙门氏菌分别脱羧酶试验比较培育基细菌脱羧酶试验三、培育基制备的基本方法和注意事项1、培育基的制备记录每次制备培育基均应有记录，包含培育基名称，配方及其根源，和各样成份的牌号，最后pH值、消毒的温度和时间，制备的日期和制备者等。2、培育基成分的称取培育基的各样成分必然精准称取并要注意防备错杂，最好一次完成，不要中止。可将配方置于旁侧，每称完一种成分即在配方上边做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左边，每种称取完成后，即移放于右边。圆满称取完成后，还应进行一次检查。3、培育基各成份的混淆和熔解指示剂应在调理好pH值后再加入；煮溶后要补加足水份；不可以把培育基煮焦，焦化的不能使用。4、培育基pH的初步伐正灭菌后pH值会降落0.1～0.2，在做培育基校订pH值时，应比实质值高0.1～0.2；pH调整后，还应将培育基煮沸。5、培育基的过滤澄清液体培育基可用滤纸过滤法。琼脂培育基,可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。6、培育基的分装斜面：1/５管

半固体培育基：

1/3

管

高层斜面：

1/4～1/3

管

平板：13~15mL7、培育基的灭菌1）含糖类或明胶的培育基：113℃灭菌15分钟或115℃灭菌10分钟。2）无糖培育基：121℃灭菌15~20分钟。（3）血液、体液和抗生素等以无菌操作技术抽取后再加入冷却至约50℃左右的培育基中。（4）琼脂斜面培育基应在灭菌后冷至55℃-60℃时拿出，再摆置成适合斜面。8、培育基的质量测试（１）如发现破碎、水分浸入、色彩异样、棉塞被培育基沾染等,均应挑出弃去。并测定其最后pH。（２）将全部培育基放入36±1°C恒温箱培育留宿，如发现有菌生长，即弃去。（３）用相关的标准菌株接种1~2管或瓶培育基，培育24～48小时，如无菌生长或生长不好,应追究原由并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培育基即应弃去，不可以使用。9、培育基的保留（1）基础培育基不可以超出两周。（2）生化试验培育基不宜超出一周。（3）选择性或鉴识性培育最好当日使用，倾注的平板培育基不宜超出3天。培育基配制——器械：培育基、玻璃器皿、天平、药匙培育基配制——仪器：灭菌锅、无菌操作台培育基配制——装水：以量桶装取适合蒸馏水于玻璃容器中；于玻璃容器上标示培育基名称。培育基配制——称药：放上秤药纸并归零；以秤药匙舀出合适合培育基培育基配制——溶解培育基：倾倒培育基时当心不要沾到玻璃壁上注意事项——配药结束：清理配药桌面与天平；冲洗称药匙，擦干放回；药品放回药品柜培育基配制——分装：调整分注器刻度；分装试管；盖上试管盖培育基配制——灭菌：放入灭菌锅灭菌注意事项：拿灭菌后物件记得带耐热手套培育基的配制–平板培育基：灭过菌的固态培育鉴于无菌操作台內倒制平板培育基第二节微生物查验的基本操作技术一、无菌技术（一）什么是无菌技术？指在微生物实验工作中，控制或防备各样微生物的污染及其搅乱的一系列操作方法和相关举措。（二）无菌环境：无菌室、无菌柜、超净工作台1、无菌室1）无菌室的构造：换衣间、缓冲间、操作间。2）无菌室的消毒和防污染：每天（使用前）紫外线照耀（1~2小时）。每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）。每个月用新洁尔灭擦抹地面和墙壁一次。2、超净工作台超净台的使用与养护:1）风速保持在0.32-0.48米/秒;（2）使用前开启紫外灯照耀30分钟以上;3）让超净台预工作10－15分钟;4）使用完成后，用70%酒精将台面和台内周围擦抹干净。（三）无菌器械灭菌器械：玻璃器皿、培育基、无菌衣等。消毒器械：无菌室内的凳子、试管架、天平、工作台、手等。（四）无菌操作1、目的：1）是保证待检物件不被环境中微生物的污染；2）是防备被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。2、进入无菌室前的准备1）按期检查无菌环境的空气能否符合规定；2）用紫外线灭菌办理30~60分钟；3）检查无菌器械能否齐备；4）洗手消毒；5）手部消毒后，再穿着无菌工作服。3、查验操作过程的无菌操作要求1）在操作中不该有大幅度或快速的动作；2）使用玻璃器皿应轻取轻放；3）在火焰正上方操作；4）接种器具在使用前、后都必然灼烧灭菌；5）在接种培育物时，动作应轻、准；6）不可以用嘴直接吸吹吸管；（7）带有菌液的吸管、玻片等器械应实时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。无菌操作——取菌技巧(从斜面取菌）1.接种环前端铁丝部分以酒精灯烧红，后端铁棒部分过分。试管前端过分。翻开试管盖。试管倾斜，放入接种环。无菌操作——取菌技巧(从平板取菌）1.自平板上取单调菌落(方法一：盖子微开遮住培育基，防备空气中菌体掉入；方法二：平板反面拿起)。无菌操作——取菌技巧（从液体内取菌）调整移液枪刻度。插上灭过菌的枪头(使劲插紧)。按钮压至第一段(不可以压至最底)。深入液面下2-4mm。慢慢开释按钮，即可汲取液体。无菌操作——接菌技巧试管前端过分。翻开试管盖。方法一：以接种环沾菌，放入新的培育基中接菌。方法二：以安全吸球汲取菌液，放入新的培育基中，向下排出菌液。方法三：以移液枪汲取菌液，按钮压至最底排出菌液。无菌操作——错误示范试管直放，空气中菌体简单掉入。操作时距离火源远。移液枪倒放，菌液简单流入。注意事项——生物性荒弃物：放在正确地点以便灭菌。二、微生物的接种与分别技术（一）接种：将微生物接到适于它生长生殖的人工培育基上或活的生物体内的过程叫做接种。１、接种工具和方法接种和分别工具：接种针；接种环；接种钩；玻璃涂棒；接种圈；接种锄；小解剖刀常用的接种方法有以下几种：1）划线接种：在固体培育基表面作往返直线的挪动。2）三点接种：把少量微生物接种在平板表面上成等边三角形的三点，让他们各自独立形成菌落。3）穿刺接种：用接种针蘸取少量菌种，沿半固体培育基中心向管底作直线穿刺。4）浇混接种：将待接的微生物先放到培育皿中，此后倒入冷却好的培育基，快速轻轻摇匀，待平板凝结后，置于适合温度下培育。5）涂布接种：先倒好培育基，让其凝结后再将菌液倒入平板上边，快速用涂布棒在表面做左右涂布，让菌液平均散布。6）液体接种：从固体培育基中将菌洗下，倒入液体培育基中，或许从液体培育物中，用移液管将菌液接至液体培育基中，或从液体培育物中将菌液移至固体培育基中。7）注射接种：用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内。8）活体接种：用于培育病毒或其余病原微生物，因为病毒必然接种于活的生物体内才能生长生殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，比方猴肾等；也可以是发育的鸡胚。(二)分别纯化１、倾注平板法第一把微生物悬液经过一系列稀释，取必然量的稀释液与融化好的保持在40-50℃左右的营养琼脂培育基充分混淆，此后把这混淆液倾注到无菌的培育皿中，待凝结今后，把这平板倒置在恒温箱中培育。单调细胞经多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，即可获取纯培育物。２、涂布平板法第一把微生物悬液经过适合的稀释，取必然量的稀释液放在无菌的已经凝结的营养琼脂平板上，此后用无菌的玻璃涂棒把稀释液平均地涂布在培育基表面上，经恒温培育便可以获取单个菌落。３、平板划线法最简单的分别微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培育物少量在平板进步行划线。当接种环在培育基表面上今后挪动时，接种环上的菌液渐渐稀释，最后在所划的线上分别着单个细胞，经培育，每一个细胞长成一个菌落。三、微生物的培育方法（一）依据培育时能否需要氧气分好氧培育；厌氧培育：最重要的一点就是要除掉培育基中的氧气。（二）依据培育基的物理状态分固体培育；液体培育第三节微生物常例判断技术一、形态构造主要通染色，在微下其形状、大小、摆列方式、胞构（包含胞壁、胞膜、胞核、鞭毛、芽等）及染色特色行察，直地认识菌在形构上特色，依据不一样样微生物在形构上的不一样样达到区、定微生物的目的。二、培育特色：1）菌的培育特色：固体培育基：察菌落大小、形、色、光度、透明度、地、隆起形状、特色及迁徙性。液体培育基：表面生状况（能否有菌膜、菌出）、度怎样、能否有积淀出等。半固体培育基：察菌能否有运、散状况。2）酵母菌的培育特色：固体培育基：大部分酵母菌没有状体，在固体培育基上形成的菌落与菌很相像，但是比菌菌落大且厚。液体培育基：液体培育基也和菌相像，有平均生、积淀或在液面形成菌膜。3）霉菌培育特色：霉菌有分支的状体，菌粗，在适合条件的培育基里菌无量伸，沿培育基表面延伸。霉菌的基内菌、气生菌和子都常有不一样样的色，因此菌落和中心，正面和反面的色经常不一样样。三、生理特色1、适境特色：各样微生物生活的境均有不一样样的适性，些境要素的适性是微生物研究的基本内容，也常用来一些在形和其余方面不易区分的微生物。1）生温度：各样微生物行正常的新代均要有必然的生温度范，假如境温度超出个范，便会微生物生不利影响，惹起微生物生阻滞甚至大批死亡。方法：将微生物分接种于5、10、20、30、37、41、45、55℃培育箱中培育1-2d，察不一样样温度下各个微生物的生状况，确立生温度范和最适温度。同要做一个空白，即准一只未接种的培育基管在37℃下同培育，若空白管未异样，果有效。（2）耐：定生物在不一样样温度下的抵挡能力。一般微生物的养体在60-70℃可存活30min，在100℃几分即可死亡，而菌芽及真菌子等的抵挡力就很。方法：将培育物各取0.1mL，接种于一系列肉培育基中，分置于50、53、56、60、65、70、80、90℃等不一样样的高温水浴中，隔水加10min或30min后立刻浸入冷水中冷却，此后一同放入37℃培育箱中培育24h，拿出后察各管中微生物生状况。以判断致死最低温度和致死。空白：同生温度。（3）生pH：境酸碱度微生物生育有很大的影响，每一种微生物都有各自的生pH范，可区分最高、最适、最低生PH。大部分菌和放菌的最适生pH在7.2-7.6之，真菌大在3.0-6.5的范内生。方法：依据不一样样的菌种适合的液体培育基，用酸或碱整培育基的pH（5.4，5.6,5.8⋯⋯10.0等），此后将菌种分接种于上述培育基中于37℃培育1-2d，定察各个微生物的生状况。判断微生物的最高、最适、最低生的pH范。4）耐：察浸透微生物生影响。不一样样微生物的度要求不一样样，高的度所形成的高浸透会微生物造成不利影响。方法：将一般肉培育液成不一样样度的溶液（0、1、2、4、6%10%等）菌后分接种待菌种，此后在37℃培育，察微生物生状况。判断菌生的化度范围及最适合盐浓度。2、生化试验：指经过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴识细菌的种类、属种的试验。（一）生化试验的方法1）在培育物中加入某种底物与指示剂，经接种、培育后，察看培育基的

pH值变化。2）在培育物中加入试剂，察看它们同细菌代谢产物所生成的颜色反响。3）依据酶作用的反响特色，测定酶的存在。4）依据细菌对理化条件和药品的敏感性，察看细菌的生长状况。（二）生化试验的注意事项1）待检菌应是新鲜培育物。培育

18~24h。2）待检菌应是纯种培育物。3）恪守察看反响的时间。察看结果的时间，多为

24或

48小时。4）应做必需的比较试验。5）提升阳性检出率，最少挑取2~3个待检的疑似菌落分别进行试验。（三）生化试验的范围从食质量检的角度，主假如试验各样糖类能否作为碳源和能源被利用，关于氮源主要查验其对蛋白质、蛋白胨、氨基酸、铵盐及硝酸盐的利用能力。（四）生化试验1）糖醇类代谢试验①糖酵解试验（糖醇类发酵试验）原理：不一样样的细菌对各样糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不一样样，有的能分解多种糖醇，有的只好分解1~2种糖醇，有的分解糖醇能产酸产气，有的分解糖醇只产酸不产气，依据这些特色，可鉴识细菌。试验方法：用接种针或环移取纯培育物少量，接种于糖发酵管中，若为半固体培育基，则用接种针作穿刺接种。置36±1.0℃培育1~3天，每天察看结果。检视培育基颜色有无变化，小倒管中有无气泡。一般常用的指示剂为：酚红、溴甲酚紫、溴百里酚蓝（红变黄）（紫红变黄）（蓝变黄）。结果察看和记录：产酸不产气，阳性，以“+”表示产酸产气，阳性，以“⊕”表示不产酸不产气，阴性，以“-”表示②葡萄糖氧化发酵（O/F）试验原理：细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型。氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖，无氧的条件下不可以分解葡萄糖；发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。依据糖管的色彩变化可鉴识细菌。试验方法：取待检菌，以穿刺法接种于两管葡萄糖半固体培育基上，在此中一管加入一层（约1cm）灭菌的液体白腊以间隔空气，在37℃培育2~4天，每天察看结果。结果察看与记录：封油管未封油管发酵型产酸（黄色）产酸（黄色）氧化型不产酸（蓝色）产酸（黄色）产碱型不产酸（蓝色）不产酸（蓝色）③乙酰甲基甲醇试验（V-P试验）原理：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为双乙酰，在α-萘酚和肌酸的催化作用下，双乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P（+）反响。试验方法——奥梅拉法：将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培育基，于36±1℃培育48h，每1mL培育液加奥梅拉O’Meara试剂（加有0.3%肌酸或肌酸酐的40%氢氧化钠水溶液）0.1mL，摇动试管1~2min，静置于37℃恒温箱4h，或在48~50℃水浴搁置2h后判定结果。结果察看与记录：（1）发酵管出现红色者，为阳性，记V-P+2）发酵管为黄色或铜绿色者，为阴性，记V-P—甲基红试验（M.R试验）原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，因为代谢的门路不一样样，有的细菌可使丙酮酸转变生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大批酸性产物，使培育基pH值降落至pH4.5以下，使甲基红变红色，为甲基红试验阳性；有的细菌使丙酮酸脱羧后形成酮、醇类中性产物，培育液pH＞5.4，甲基红呈桔黄色，为甲基红试验阴性。试验方法：挑取新鲜的待试培育物少量，接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培育基，于36±1℃或30℃（以30℃较好）培育3~5天，从第48h起，每天取培育液1mL，加入甲基红指示剂1~2滴，立刻察看结果。结果察看与记录：（1）呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡红色为弱阳性，记MR+；（2）呈橘黄色或黄色为阴性，记MR-，迄至发现阴性并培育至第5天仍为阴性，即可判断结果。2）氮源代谢试验①靛基质（吲哚）试验原理：某些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚）。吲哚与对二甲氨基苯甲醛联合，可形成红色化合物，即玫瑰吲哚，以此鉴识细菌。试验方法：将待检菌小量接种于培育基中，于36±1℃培育24~48h时后，沿试管壁迟缓加入欧-波试剂约0.5mL覆盖液面，两液接触处表现玫瑰红色者，为阳性反响，无红色者为阴性反响。结果察看与记录：表现玫瑰红色，为阳性反响，记+；无红色者，为阴性反响，记—②尿素酶试验原理：某些细菌能产生尿素酶，将尿素分解产生氨，氨使培育基变为碱性，使培育基中的酚酞指示剂呈粉红色，培育基由黄色变为红色，为阳性。以此鉴识细菌。试验方法：挑取18~24h待试菌培育物大批接种于液体培育基管中，摇匀，于36±1℃培育10，60和120min，分别察看结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要抵达底部，留底部作变色比较。培育2，4和24h分别察看结果，如阴性应连续培育至4天，作最后判断，变为粉红色为阳性。结果察看与记录：培育基变为粉红色，为阳性，记+；培育基颜色不变，为阴性，记—③氨基酸脱羧酶试验原理：某些细菌能产生氨基酸脱羧酶,可使赖氨酸、鸟氨酸产生脱羧作用,生成胺类物质和CO2。胺类物质使培育基呈碱性变紫色，为阳性，如呈黄色为阴性，以此鉴识细菌。试验方法：取待检菌，分别接种于含有氨基酸的培育基内和不含氨基酸的比较培育基内，在36±1℃培育1~4天，每天察看结果。结果察看与记录：培育基变为红色，为阳性，记+；培育基变为黄色，为阴性，记—④硫化氢（H2S）试验原理：某些细菌可分解培育基中的含硫氨基酸或含硫化合物，产生硫化氢，硫化氢遇铅盐或亚铁盐可生成黑色积淀物PbS或FeS，以此鉴识细菌。试验方法与记录：挑取待检菌，用穿刺接种法接种于三糖铁培育基上，于36±1℃培育24~48h，察看结果。培育基底部呈黑色，为阳性，记+；培育基底部无黑色，为阴性，记-⑤苯丙氨酸脱氨酶试验原理：苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与氯化铁作用生成绿色化合物。试验方法：加氯化铁试剂结果记录：生擅长苯丙氨酸培育基上的菌苔出现绿色，记为+3）三糖铁(TSI)试验测定细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的分解、产气和产硫化氢状况。原理：假如细菌可利用葡萄糖、乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气，培育基全部变黄；假如只可以利用葡萄糖，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培育基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面最后为红色，底部因为是在厌氧状态下，酸类不被氧化，仍保持黄色。假如细菌能分解含硫化合物，产生硫化氢，培育基底部变黑。试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培育物，穿刺接种并涂布于三糖铁斜面，置36±1℃培育18~24h，察看结果。三糖铁琼脂成分：蛋白胨、牛肉膏、乳糖、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、硫代硫酸钠、硫酸亚铁铵、酚红、蒸馏水。记录：斜面：黄色为阳性，记为+；红色记为-底面：黄色为阳性，记为+；红色记为-产气：产气为阳性，记为+；不产气记为-产硫化氢：培育基