疟原虫培训课程

疟原虫培训课程第1页/共73页疟疾是我国五大寄生虫病之一世界十大热带病之一疟疾、血吸虫病、丝虫病、黑热病、锥虫病、麻风病、肺结核病、登革热、黄热病、埃博拉出血热第2页/共73页种类1、间日疟原虫（Plasmodiumvivax）(P.v.)2、三日疟原虫（P.malariae）(P.m.)3、恶性疟原虫(P.falciparum)(P.f.)4、卵形疟原虫(P.ovale)(P.o.)第3页/共73页Plasmodiumdiseasestatistics:

Fourhumaninfectivespecies

P.f.7%P.M.<1%

50%43%P.V.P.O.第4页/共73页分布100多个国家和地区流行疟疾2.4billionpeopleatrisk(40%world’spopulation)300-500millioncaseseachyear>1milliondeathseachyear第5页/共73页我国疟区分布：1、北纬33以北低疟区单纯流行p.v.2、北纬25－33中、低疟区p.v.（重）p.f.(存在)p.m.(少见)3、北纬25以南高疫区(山区)低疟区(平原)

p.f.(多见)p.v.(次之)第6页/共73页分布高传播地区：云南、海南疫情不稳定地区：湖北、安徽、河南、江苏等基本控制地区：第7页/共73页分布第8页/共73页分布全国有15个省、自治区近三亿人口的548个县仍受疟疾威胁，其中7个省的29个县年发病率超过1%。恶性疟疾仍在7个省、自治区部分县市流行，其中已知有31个县出现抗氯喹株。我省疟疾主要在襄樊、随州、孝感、荆门四市的18个县（市、区）流行第9页/共73页红细胞外期

人体疟原虫的红细胞外期（红外期）是指由雌蚊叮咬，子孢子进入人体后，在肝脏实质细胞内进行的裂体增殖，称红细胞前期（红前期）。红前期是指子孢子随按蚊叮咬侵入人体后，尚未进入红细胞内发育前，在肝实质细胞内进行裂体增殖的阶段。在肝实质细胞发育的裂殖体均称潜隐体。成熟的潜隐体分裂出来的裂殖子则称潜隐子。第10页/共73页红细胞外期

子孢子侵入人体后30分钟内存在于血液循环里，而随后即离开周围血液，这个阶段血液内无任何时期的疟原虫。恶性疟到第7天，间日疟到第9天，血液的感染性才恢复。红前期裂体增殖时间为：间日疟8天，恶性疟5.5～6天，蛋形疟9天，三日疟11～12天。第11页/共73页迟发性红细胞外期

间日疟、蛋型疟有迟发性红外期，且三日疟感染原可在5～8年原再发，最长者达30～40年。通常认为恶性疟原虫没有迟发性红外期。第12页/共73页红细胞内期潜隐子进入红细胞便开始在红细胞内进行裂体增殖，这个时期称为红细胞内期（红内期）。潜隐子进入红细胞后成为环状体，摄食红细胞内的血红蛋白及其他营养，渐渐发育长大，细胞浆呈阿米巴活动，称阿米巴样体或滋养体。疟原虫摄食血红蛋白后的代谢产物，积蓄在细胞浆内，成为疟色素。随着虫体发育，色素逐渐增多。虫体发育到一定程度，核开始分裂，经过反复分裂，即有一定数量的裂殖子。第13页/共73页成熟的裂殖体破裂，裂殖子选逸，一部分被吞噬细胞吞食，一部分进入正常红细胞进行第一次裂体增殖。经过数次裂体增殖后，部分进入红细胞的裂殖子在红细胞内不再进行无性分裂，而逐渐发育成为配子体。一般发病5～12天，成熟的配子体才在周围血液内出现。疟原虫在红细胞内完成裂体增殖周期所需的时间有所不同。间日疟、蛋形疟为48小时，恶性疟为36～48小时，三日疟为72小时。第14页/共73页第15页/共73页孢子生殖

雌按蚊叮咬疟疾患者，疟原虫随血液进入蚊胃内，其他各期原虫在蚊胃中均被破坏和消化，只剩下大小配子体（即雌雄配子体）继续在蚊胃内发育。配子、合子、动合子、卵囊，发育至这个阶段约需24～48小时。第16页/共73页随后，卵囊逐渐长大，呈瘤状向蚊胃壁外突起。在卵囊内，核和细胞浆进行孢子增殖，形成子孢子。一个囊内可有1千以至上万个子孢子。成熟的卵囊破裂后，子孢子通过蚊体的血腔到达唾液腺。第17页/共73页生活史在人体内

在蚊体内迟发型

速发型

子孢子裂殖体裂殖子子孢子裂殖子RBC外期（在肝细胞内）

RBC内期（在红细胞内）

环状体滋养体

裂殖子♀♂配子体裂殖体有性生殖无性生殖♀♂配子合子动合子囊合子裂殖体第18页/共73页第19页/共73页生活史1、终宿主：按蚊中间宿主：人2、感染期；子孢子

3、感染方式：

（1）人被含子孢子按蚊叮咬，子孢子注进人体。（2）输血感染。（3）胎传感染。4、在RBC内发育时间：p.v.和p.f.48hp.m.72h第20页/共73页生物学特征P.V.P.F.P.V.P.F.红外发育8d5d斑点薛氏茂氏休眠体有无疟色素棕黄色黑褐色红外裂殖子1000030000红内裂殖子12-248-26增殖周期48h36-48h配子体圆形新月蜡肠RBC胀大有无蚊内发育105/T-14.5111/T-16第21页/共73页形态疟原虫包括核、胞浆和色素。吉氏或瑞氏染色：核呈鲜红色或紫红色，胞浆呈兰色，色素呈黄褐色或深褐色。第22页/共73页形态以p.v.为例。吉氏或瑞氏染色。

胞质环状、蓝色。细胞核1个，红色。

1、环状体（早期滋养体）

2、滋养体

胞核增大，胞质增多。伪足、疟色素（棕黄色）、薛氏小点（淡黄色）、被寄生RBC胀大。第23页/共73页

圆形或椭圆形，疟色素分散，核增大，1个。胞质占满胀大RBC。♀配子体，♂配子体。

3、裂殖体核分裂、胞质也分裂，形成裂殖子。疟色素成堆。被寄生RBC胀大明显。

4、配子体第24页/共73页

P.V.、P.F.疟原虫形态区别

p.v.

p.f.

环状体

(早期滋养体)环较大，核1个,占RBC直径1/3，常见1个原虫。环纤细，核1个或2个，占RBC直径1/5.常见2个原虫。第25页/共73页

P.V.、P.F.疟原虫形态区别

p.v.

p.f.

滋养体

虫体变大，形状不规则，伪足、空泡、疟色素。RBC胀大外周血液难查到，疟色素黑褐色。第26页/共73页P.V.、P.F.疟原虫形态区别

p.v.

p.f.

未成熟裂殖体

较大，核分裂为2个以上，疟色素分布不均匀。RBC胀大。通常在外周血中看不到，核分裂为2个以上，疟色素集成团块状，黑褐色

第27页/共73页P.V.、P.F.疟原虫形态区别

p.v.

p.f.

成熟裂殖体

裂殖子12－24个,平均16个。疟色素成堆。RBC胀大。外周血液难查到，裂殖子8－36个，平均18－24个，疟色素集中。第28页/共73页P.V.、P.F.疟原虫形态区别

p.v.

p.f.

配子体圆形核1个，充满胀大RBC。疟色分散。腊肠形或新月形，核1个。疟色素分散。第29页/共73页P.V.、P.F.疟原虫形态区别

p.v.

p.f.

被寄生RBC除环状体，各期RBC均胀大、色浅。薛氏小点。

RBC大小正常或缩小、色浅。茂氏小点。第30页/共73页疟疾的实验诊断病原检查免疫诊断1、吉氏染色法：2、瑞氏染色法：外周血制成厚、薄血膜。3、荧光素吖啶橙染色

1.查抗原

可诊断现症病人和带虫者。血中有疟原虫时才能查出其抗原，一旦治愈，抗原在短期内即行消失。2.查抗体

适用于多次寒热发作又未查明原因者。原虫血症后1周可查出抗体，故没有早期诊断价值。3.查DNA

第31页/共73页第32页/共73页伊红美兰染剂的染色作用和原理

染色剂种类可分为水溶液和酒精溶液两类。水溶液包括罗氏染液，费氏染液和J．S.B染液等，酒精溶液包括吉氏染液，瑞氏染液等。这些染液的主要染料都含有美兰、伊红和美兰氧化后的天青。染色的原理是染料与被染料物的阴阳离子互相吸附而结合的一种化学作用。第33页/共73页伊红和带阳电的蛋白质(NH3+)相结合，伊红被吸附而成红色，美兰可和带阴电的蛋白质(COO-)相结合，美兰被吸附而成兰色。若蛋白质本身的阴阳电荷相等，既能与伊红结合，又能与美兰结合，则被染成兰红相混的紫红色。美兰和伊红都不能使核着色，由天青起染媒作用才能使其作色。疟原虫的核主要是天青和伊红合并染的，在染色血片时稀释染液的水要稍偏硷性(pH7.2)环状体的原浆才能清晰可见。第34页/共73页血片制作采血部位：无名指或耳垂末梢血液。小孩在足后根。采血时间：p.v.在发作数小时至10余小时内。 p.f.在发作开始时采血。血液涂片：第35页/共73页染色方法一、吉氏染色：用甲醇固定薄血膜，待干。将吉氏染液用水配成3%的稀释液，用滴管将此稀释液滴在厚、薄血膜上，染色25-30分钟后，用水沿玻片边缘轻轻冲洗，晾干。大批血片染色时可将玻片插入染色缸内染色。二、瑞氏染色：染色时，在厚、薄血膜间用蜡笔划一条横线，在厚血膜上加清水2~3滴溶去血红蛋白，在薄血膜上直接加约1ml瑞氏染液染色2分钟，然后在薄血膜上再加与染液等量的水、稀释，将染液引到厚血膜上，使厚、薄血膜同时再染色5~6分钟，水洗晾干。第36页/共73页疟原虫

计数1.半定量计数:厚血膜每个视野观察到疟原虫平均数估计疟原虫密度。少：厚血膜疟原虫数小于10个、平均每个视野小于1+：100个视野中平均每个视野1-5个++：100个视野中平均每个视野6-10个+++：100个视野中平均每个视野11-100个++++：100个视野中平均每个视野100以上第37页/共73页2、厚血膜疟原虫计数：疟原虫数/ul血=疟原虫数/白细胞数*白细胞数/ul血。计数200个以上白细胞，白细胞数/ul血：6000。3、薄血膜疟原虫计数：疟原虫数/ul血=

RBC疟原虫感染率*RBC数/ul血。检查1000个RBC，男：500万个/ul血，女：450万个/ul血第38页/共73页影响染色效果的因素血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片制作质量好坏等有关外，还受到以下几个因素的影响：（一）染料和溶剂的质量染料、甲醇和甘油如果不纯，常使配制的染液偏酸或偏碱而影响染色效果。因此必须用分析纯的甲醇和中性甘油，而且在配制时所用的器具必须干净而无水份。（二）染液的新旧新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力较弱且常呈偏碱性．染液存放时间越久，染色力越强，尤以吉氏染液更甚。通常在染液配制1~2周后才使用。盛装染液的瓶子应加塞盖密，以防吸潮而影响染液质量。第39页/共73页（三）染液稀释后的使用时间吉氏和瑞氏染液的主要成份是美蓝，伊红和美蓝氧化产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，必须在稀释染液当时使用，一般在半小时内染色力最强。（四）染液的稀释浓度染液的浓度高，其着色就快而深，从而疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度过低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点不明显或消失。（五）染色时间染色时间长染色效果好，反之较差。室温高则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。因此染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。第40页/共73页（六）染色用水染液的稀释用水和染色后冲洗用水应选择pH7.0-7.2的清洁水，通常是新鲜的蒸馏水或过滤的冷开水、以及自来水等。如果偏酸或偏碱，可用缓冲蒸馏水调整。染色后发现血膜颜色偏蓝（偏碱）或偏红（偏酸）时，可用与之相反的酸、碱度水冲洗血片予以纠正。（七）注意染色后不要直接将染液倒掉，应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。第41页/共73页镜下形态第42页/共73页大滋养体

第43页/共73页裂子体第44页/共73页

第45页/共73页第46页/共73页第47页/共73页厚血片形态小滋养体：呈环状或因空泡消失而变成各种形状，形状的改变因胞浆向核的一侧，或同时向二侧收缩，或围住核，或环中间有几处断裂开而决定。镜检时常见“！”、“，”、“飞鸟”、“V”形和“鸟眼”等。第48页/共73页大滋养体

间日疟大滋养体运动活泼，空泡大，故形态变化较大，呈阿米巴样或缩成各种形状，常见有些原虫的胞浆缩为圆形，核和色素均被包在中间，着色很深，只能看到深兰色的胞浆和黄褐色的色素折光，核模糊不洁，或仅于调节显微镜的亮光时，才隐约可见。有些胞浆皱缩断裂成几个团块，大小不一，互不连接，核位于胞浆之中或外边，色素分布不匀。有些则仅见胞浆和色素而核看不清楚。第49页/共73页裂殖体和配子体

除虫体略有缩小而着色较深外，几乎与薄血片一样。第50页/共73页被疟原虫寄生的红细胞

厚血片染色后，红细胞的血红蛋白溶解，其轮廓消失，但斑点却十分清楚。有时尚残有红细胞的模糊痕迹如“影子”，血片边缘部分较薄，更易发现。第51页/共73页厚血片形态第52页/共73页第53页/共73页第54页/共73页疟原虫与其它物体的鉴别

厚血膜可因染液的酸碱度影响，只看到小滋养体的核、只看到疟色素、或者只见胞浆断裂的残块。这样，它与涂片和染色过程所沾污的杂质包括来自空气的灰尘、真菌、孢子，来自取血时沾污的污垢、细菌，染料残渣，白细胞裂后散出之颗粒，碎片，网状红细胞的残骸中等，皆易混淆，误为疟原虫。一般来说，在血膜上疟原虫和其他物体两者之一具有一定数量时，不难区别。但是，当两者数量都很少又不典型时，则鉴别比较困难。这时应另外取血检查，不可轻易下结论。第55页/共73页1．疑似疟色素：血膜上的染料残渣及灰尘，有时可误为疟色素，此时可依据其颗粒大小，色泽及分布范围加以区别。转动微螺旋时，可见它浮于红细胞之上，与原虫不在一平面上。2．疑似疟原虫核；细菌尤其是球菌或白细胞破裂后散出的颗粒，皆为红色小点，与疟原虫的核相似，最易混淆。但球菌形体较大，边线光滑，常见许多个聚集一处，分布广。中性和酸性白细胞的颗粒，着色较淡，边缘整齐，附近常有白细胞的碎屑。3．疑似疟原虫胞浆；网状红细胞残骸和白细胞残骸通常为兰色，与疟原虫的胞浆相似，有时因与上述红点巧合一起，而容易误为疟原虫。鉴别时如形同大滋养体，可依据疟色素的特点加以区别；如形同小滋养体，可依据虫体大小、折光是否均匀以及核与胞浆是否在一个平面上加以区别。第56页/共73页厚、薄血膜涂片的优缺点

薄血涂片中疟原虫形态典型，易辨认，较易鉴别种类，但诊断时发现疟原虫较难，费时间。

厚血膜上发现疟原虫容易，省时间，但疟原虫形态不典型，不易辨认，难鉴别种类。第57页/共73页服药后疟原虫形态抗疟药物可以使疟原虫的形态发生各种变化。同一类型的药物对疟原虫的形态引起的变化大致相同。一般说，药物作用对大、小滋养体和裂殖体前期的形态变化较大，配子体的形态变化较小，最明显的变化有外观破碎、色素早期凝集和裂殖体缩小等。核疏松，核着色深，胞浆稀少或破碎，色素凝结，成粗大颗粒，裂殖体核常裂成碎块，大小不一等。第58页/共73页潜伏期间日疟Ⅰ型12-30dⅡ型12-30dⅢ型6-9个月恶性疟

9-14d平均12d卵形疟平均14d，三日疟平均30d，第59页/共73页致病发作表现：周期性的寒战、发热、出汗退热三个连续阶段。发热阈值：P.V.10-500个/ulP.F.500-1300个/ul整个典型发作全程约6～10小时，间歇期无症状。第60页/共73页寿命间日疟平均2年，可达10年恶性疟

平均1年，可达3年三日疟平均3年，可达50年第61页/共73页致病发作原因：（1）裂殖子（2）原虫代谢产物（3）残余、变性血红蛋白（4）RBC碎片发作周期：

p.v.p.f.48h发作一次p.m.72h发作一次第62页/共73页再燃急性患者发作停止后，残存于RBC内的原虫，重新大量繁殖，在无新的感染下，再次引起疟疾发作。四种疟原虫都可发生再燃。第63页/共73页复发血液中的原虫全部被消灭，在无重新感染的情况下，经一段时间，疟疾症状又重新出现。p.f.和p.m.无复发（无迟发型子孢子）p.v.p.o.有复发。复发原因：迟发型子孢子引起。第64页/共73页查治病人门诊发热血检：临床诊断病人、凝似病人、不明原因发热者目的：及时发现传染源和病人、及时治疗，作出早期预警、防止输入的传染源和当地残存病例引起传播，以控制暴发流行和减少传播。第65页/共73页查治病人查治病人、带虫者――消灭传染源是重要环节！治疗、预防药物：RBC外期――伯喹RBC内期――氯喹、青蒿素配子体――伯喹抗复发――乙胺嘧啶＋伯喹预防药物――氯喹 乙胺嘧啶＋磺胺多辛

对有溶血病史或红细胞缺乏G-6-PD的病人，忌用伯氨喹啉类药物。第66页/共73页病因治疗对氯喹敏感的疟疾发作治疗

1、氯喹：磷酸氯奎