实验三食品中微生物菌落总数的测定

实验三食品中微生物菌落总数的测定第1页，共14页，2023年，2月20日，星期六一、实验目的学习并掌握标准平皿活菌计数（SPC）的基本原理和方法明确菌落总数测定对被检样品进行卫生学评价的意义第2页，共14页，2023年，2月20日，星期六二、实验原理菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培基基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。第3页，共14页，2023年，2月20日，星期六标准平皿活菌计数法（SPC法）是最常用的活菌计数法将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来。反映食品被细菌污染的程度由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验条件下不生长，故计数结果要比实际值低。第4页，共14页，2023年，2月20日，星期六三、实验器材（一）培养基平板计数琼脂培养基（二）实验材料市售饮料（三）其他

1、无菌培养皿7套

2、无菌吸管（1支10mL，5支1mL）

3、无菌生理盐水（225mL三角瓶1个，9mL试管5支）（四）仪器超净工作台第5页，共14页，2023年，2月20日，星期六四、实验步骤1、样品处理：以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面后，用无菌剪刀将包装剪破，量取检样25mL放入225mL灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成10-1稀释度样品2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4第6页，共14页，2023年，2月20日，星期六菌落总数操作流程图第7页，共14页，2023年，2月20日，星期六3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌移液管分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做2个平皿；同时，吸取1mL无菌生理盐水到1个平皿中作为空白对照4、熔化培养基5、及时将已冷却到46℃的培养基倾入到平皿中，并转动平皿使其混合均匀6、37℃倒置培养2天7、按照计数原则计数第8页，共14页，2023年，2月20日，星期六五、菌落计数方法有较大片状菌落生长者不宜采用，若片状小于平板一半时且余部均匀分布，则以半个平板菌落数2倍报告无明显界限链状菌落每条单链视为一个菌落选取菌落数在30~300cfu之间，无蔓延生长的平板计数低于30的记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计，每个稀释度采用2个平行的均数第9页，共14页，2023年，2月20日，星期六1、计数结果的表述若只有一个稀释度平板在30~300CFU，则计算两平行平板的均数，再乘以稀释倍数报告之若有连续两个稀释度符合计数要求则按下公式：例：10-2=232，24410-3=33，35菌落总数所有符合计数要求的平板菌落数之和较低稀释度有效平板数较高稀释度有效平板数较低稀释度N=(232+244+33+35)(2+2×0.1)×10-2=24727第10页，共14页，2023年，2月20日，星期六结果表述10-1均数10-2均数描述最终结果25536均在30~300间则按计数公式2.6×103多不可计345各平板均>300，取稀释度最高者报告，余计为多不可数3.5×104122均小于30则取稀释度最低者报告1.2×10233029所有平板均不在30~300CFU且一部分<30或>300者以最接近30或300者报告2.9×10300所有平板均无菌落则记为<1乘以最低稀释倍数报告<1×10即<10第11页，共14页，2023年，2月20日，星期六2、报告方式菌落数在100cfu内时按四舍五入修约，采用两位有效数字报告大于或等于100时，第三位数四舍五入修约，取前两位数字，例：205043210000or2.1×105所有平板均为蔓延菌落而无法计数者报告菌落蔓延若空白对照有菌落则此次检测结果无效固体样品以cfu/g，液体以cfu/mL为单位第12页，共14页，2023年，2月20日，星期六六、实验结果与分析

样品菌落总数N=cfu/mL

稀释倍数10-210-310-4菌落数(CFU)分析第13页，共14页，2023年，2月20日，星期六七、思考