PCR实验室报批细节、注意事项、常见问题问答

精品文档报批细节1、技术档案：技术人员简历表、培训档案、要求有实质性文件如每人的学历证书、上岗证、科研成果（课题技术文章、获奖证书等的复印件2、仪器档案：实验室所有仪器的购买、使用、校正、放置地点、出厂编号、说明书复印件等实验室所有仪器维护校正记录如：加样器、温度计、温湿度计需出具计量局校正报告文件（可每种只校正一套作为标准扩增仪需有仪器厂家专业技术人员维护校正报告，和校正后的参数。加样器的出厂编号、使用时间、校正记录。5700维护后验证记录—用同一公司或校准试剂或用自制质控血清并记录数值3、其他细节:垃圾处理：按生物污染性制品，交医院统一处理。仪器简单操作流程标记笔、枪头盒等一些小物品都要标明分区。仪器的申请、采购、使用、验证程序样本采集（针对临床医护人员输、收集程序样品的唯一编号原则—应区分开不同天、不同种类的标本标本的保存程序—包括处理前、刚处理后、报告发放后的原始标本（原则上至少保留一周）应有专人负责。检测结果的保存、备份记录、质控记录保存，除电脑记录外应有相应的手抄记录（类似于基因日检测统计表类型的抱怨记录—应有时间、事件（项目、接待人、处理方法、处理结果、处理人签字确认.

精品文档注意事项1、回答任何问题都应与自己写的SOP文件相一致"写你所做的,做你所写的".2、SOP文件不能写的太虚,法做到的东西不要写,比如公司版的SOP件里的加样器的校准一般实验室就做不到.模棱两可也不要写比如"消毒时间一到两小时"不能这样写,多少就是多少.3、处理标本要在生物安全柜内,而加样则在柜外4区门口要贴有各区的工作制度,限入标志.还要准备两个登记本,一个来记录紫外消毒,一个来记录工作人员出入.内还要有一个工作记录本用来记录各区每天的工作内容,便于监测每天的工作全过程.5把枪的用途要清楚,不能弄乱.比如稀释阳模的枪和处理标本的枪不可混用.6通离心机处理分泌物标本时应在离心后静置分钟才能开盖.(许斌这样认为)7、所有仪器、设备都要有档案卡.8、所有的清洁消毒要在实验结束后马上进,尤其是仪器、设备.像扩增仪，每天都要清洁，做完的反应管决对不能留在样品槽内。9、各区的拖把、抹布不得混用,标记清楚.10、生物防护意识要强手套要随时更换.生物防护安全的保证要从三个方面:制度、硬件、意识。11管如何处理:立即停止实验水浴里的水要倒掉,冲洗.所有可能污染的地方要用消毒液擦洗,紫外照射,通风排风.12、各区应有日常工作核查表,做为每天工作记录的补充13、各区要有泡有消毒液的生物污物桶,用来处理生物垃圾.14收组带来的标本要按平时对待临床标本一样处理要有接收记录,结果登记等.15、拒绝电话或代领等非正常方式发放报告单16、存放标本的冰箱要上锁,钥匙及电脑资料的密码要由本科室人员专人保管.17、报告单上要注明试剂的检测下限,不能写成参考范围除了有操作者,还要有核校者,且两者姓名除了电子打印还要用手.定量结果不能有阴阳性提示.

精品文档只能报数值.18、SOP文件中PE5700的温湿度要求应该为温度－30℃、湿度为80％。19、SOP中医院申报实验注意事专家组观验室回的题你们HCV,注呢？实验室次议的提HBV升+微升提取.

精品文档直接上1离心机！临床基因扩检验实验室术验收现场卷（口试和/笔试）一.现有一个患者向你提出在你们医院检测DNA为阳性，但在另一家医院检测为阴性，你们医院是怎么做的检测？时，你怎么办？（该题主要是考实验室人员是否知道并遵守所制定的抱怨处理程序）二现有一个临床大夫拿着几张HBVDNA量PCR检验报告单找到实验室，说你们的PCR结果到底准不准，我这个病人刚开始检测，HBVDNA是5×10

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拷贝数/ml，用了拉米呋啶治疗后二周，再检测结果为3×10

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拷贝数/ml，降了不少，但再过二周检测，又变成了

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拷贝数/ml，升高不少，这到底是怎么回事？果这个大夫刚好问的是你，你怎么办？并如何解释其提出的问题？(该题除了考实验室人员是否知道并遵守所制定的抱怨处理程序外，还要求其对特定PCR检验的批间变异有充分的认识回答思路：这两题分别对应患者和临床医生提出的抱怨点为你是否按照所制定的程序来处理无论患者是医生出抱怨，我都应该按照”程序记录抱怨人姓、抱怨内容，然后问题解决后录处理果等，最后录反馈见等。注意：般问题中出现“此时，你怎么办？其考核的重点均为“形式”而非“内容以题目中无论病人抱怨的是服务态度不好还是结果报告不准，.

精品文档医生抱怨的是检测结果和临床诊断不符还是报告发放不及时答的方向都应该是我们接待他们后，先在登记表上记录抱怨的什么什么相关信息，做相应处理，解决后记录处理结果，最后填反馈表，归档总结，跟着以后改进等等等等对各种具体问题的处理就按照实际情况来回答就行。如果题目中出现要你具“解释某某提出的问题时这时是具体考察某一“内容细节”了。第二题中看你对PCR检验的批间变异有否充分的认识：一般PCR检测试剂盒存在着一定的批间甚至批内差异而且检测前处理也存在着一定的误差分析软件相关参数的选择也会使定量结果发生变动这是方法学造成的不可避免的事实。同一操作人、同一仪器、同一批号试剂、同一份标本同时做多份平行管得到的结果都会不尽相同所以我们都会允许结果存在一定范围的偏差，一般为一个数量级的拷贝数5×10

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、3×10

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和6×10

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均在允许的误差范围内排除了各种影响因素后出现这种情况很正常这说明了该病人用药效果不佳。若定量结果有1～2个数量级甚至更大的变化才能反映用药疗效。三．现有一人打电话到科室，说我孩子在你们医院做了一项丙肝的PCR检测，名字叫，请你告诉我检测结果好吗？果是你刚好接了这个电话，你会怎样去做？（该题考的是实验室人员在患者要求以电子邮件、电话、传真等方式传递报告时，是否能按相应的程序去做）回答思路：也是考形式对于这种非正常的报告发放形式，我们按照程序，是这样这样处理的为各个医院实际情况不同，所以无论你怎样处理，只要程序中体现了对患者结果的保密原则，具体细节不会太要求。在程序中按以下几个方式写都是可以的：1、我们均不以任何非正常形式发放报告干脆！就是有点不近人情，不过对我们来说省事）2、实在有特殊情况，可以电话查结果，其它发放形式不行。但必须确认身份，包括核对其所查询的患者姓名别、年龄检测项目、送检医生、送检日期、病区床号等情况，并提供患者号。3、可以通过电话、图文传真、电子邮件等形式传送结果，和上面一样，需要核实身份最宽松了，不过麻烦了很多）要注意的是：这些情况均应明确告知查询者，这几种非正常形式发放的报告均仅为临床提供参考，实验的最终结果以正式检测报告单为准。特殊情况报告发放后需详细登记，签署报告人姓名，实验室负责人签字。“报告的正确发放”为考核重点，一般可能还会引申出“你们是如何发放检测结果报告？之类的问题按照程序中写的实际情况回答就行的了只要遵循保密原则就OK。最简单的无非把事情都推给医院：说门诊患者报告单送至服务台门诊报告发放处，由那里的医生确认身份后发放具体她们是怎么确认、确不确认这已经不关我们的事了若写病人到科室领报告也行，只是“我们怎么确认病人身份”要在程序中体现询问相关信息根据收费单或病历唯一条形（若医院采用计算机网络系.

精品文档统）确认等等。四．现有你科室同事，拿了一份血清标本给你，说这是我一个熟人的标本，他要做RNA检测，刚好他还做生化和免疫检测，我从生化标本分了一些出来，给你做HCVRNA觉得这样行吗？为什么？（该题主要是考实验室人员对有关标本的收集程序是否清楚并遵守）回答思路：问到了“为什么？”表示具体考到细节了。按照我们的收集程序，做PCR尤其是RNA项目需要独立取血不能从其它检测的标本中分出一些来做而且对RNA标本的采集、保存、运输都有严格的要求。一般验收组会对这类问题加以引申你每天标本在哪儿采集？采血的人员有否经过专门培训？采集的标本如何保存？还可以顺便问你结果发放后的标本如何保存存在哪儿？保存多久？甚至要你把这多久多久前的标本拿出来给他们看。五．某一天，你在做HBVDNA荧光定量PCR测（方法的定量测定范围为103～107贝数/ml）中，发现有1份标本的测定Ct值超出方法的测定上限，此时你怎么办？对于没有特异扩增曲线的标本你又怎么报告结果？回答思路：此为具体问题题目已经假设了方法的定量测定范围为

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～10

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拷贝数/ml，我们就按照这个假设来考虑先看是否为特异扩增的曲（即看曲线是否为标准的S形曲线为标准S形曲线表示的确为阳性标本Ct值超出检测上限，表示未知标本HBVDNA浓度过大，不在检测线性范围内，应该进行浓度梯度稀释（1/10、1/100…做实验，看哪个梯度处于线性范围内，得到原始浓度乘以相应稀释倍数即得。若不是特异扩增的曲（也就是常见的那种前面翘与阈值线有交点的阴性曲线，计算机不会具体分析，见有交点就Ct值，而Ct值还很小，小于测定上限的Cycle数阴性报。六在PCR检测的核酸提取离心中如发现有一管离心管出现破裂此时你怎么办？（该题是考实验室人员对于其制定的实验室及仪器设备消毒清洁程序是否知道并遵守）回答思路：按照离心机的消毒清洁程序必须先停止实验将破裂管密封放入生物垃圾桶，再用75%酒精擦拭离心室消毒，用移动紫外灯照射30～60分钟后才能开始实验。可以引申出：离心管破裂，可能质量有问题，为防止以后同类事情的发生，按照耗材质检程序进行离心管质检实验若不合格停止使用重新购买并进行质检，合格的耗材才能使用。.

精品文档七．有一个PCR实验室的荧定量PCR仪如ABI7000因某种原因搬动到了另一个实验台面，实验室只是将仪器外表面擦了擦，即用于常规扩增检测工作，你觉得该实验室做得对吗？为什么？（该题是考实验室人员对于其制定的仪校准程序是否知道并遵守）回答思路：考核实验室人员对于其制定的仪校准程序是否知道并遵守器移动应该按照程序进行校准后才能重新用于常规扩增检测工作，以保证实验结果。7000型核酸扩增荧光检测仪为复杂精密仪器，其校准工作需由专业工程师进行。实验室联系仪器厂家派技术