帕金森动物模型专家讲座

大鼠帕金森动物模型ZeyunZhu0808帕金森动物模型专家讲座第1页帕金森及动物模型介绍帕金森动物模型制备模型效果评价目录帕金森动物模型专家讲座第2页帕金森及动物模型介绍帕金森动物模型制备模型效果评价目录第一部分介绍总体概况帕金森动物模型专家讲座第3页

帕金森

介绍调研方法第一部分

帕金森是继阿耳茨海默病（老年痴呆症）后第二大普遍老化大脑神经系统退行性病。18Jamesparkinson描述为震颤麻痹。引发该疾病运动症状主要是因为纹状体内多巴胺降低从而造成黑质密致部实质内多巴胺能神经元逐步衰退。帕金森动物模型专家讲座第4页

病理第一部分

PD症状是黑质密致部区域染色多巴胺分泌细胞降低继发分泌黑色素降低产生结果。PS：黑质:在大脑脚底与中脑被盖之间有一大灰质团块是黑质，见于中脑全长。黑质细胞富含黑色素，是脑内合成多巴胺主要核团。黑质主要与端脑新纹状体(尾状核和壳核)有往返纤维联络。因为一些原因使黑质细胞变性，多巴胺合成降低，是引发震颤麻痹(Parkinson病)主要病因。在正常生理状态下，黑质是调整运动主要中枢。帕金森动物模型专家讲座第5页

黑质

纹状体调研方法第一部分纹状体：壳核和尾状核经过大量条纹状细胞桥相互连接，所以得名纹状体。依据发生早晚可分为新、旧纹状体，新纹状体指豆状核壳和尾状核，旧纹状体指苍白球，纹状体属锥体外系结构，与骨骼肌活动相关。新纹状体：

在发生学上比较年轻，包含尾状核及壳核，它们起源于端脑。在这两个神经细胞团中，含有大量小细胞和较少大细胞。小细胞接收来自大脑皮层各部以及来自丘脑神经，所以，新纹状体直接收到大脑皮层影响，而且还间接地受到经过丘脑传来小脑以及其它锥体外系影响。大细胞发出传出纤维抵达同侧苍白球。当前已知，新纹状体与维持机体固定姿势相关。大量临床病理资料证实，尾状核头部变性、萎缩，可出现舞蹈样动作（如慢性进行性舞蹈病）；壳核病变则与临床所见手足徐动症、肝豆状核变性、扭转痉挛、舞蹈病等不自主运动相关。旧纹状体：系指苍白球。它起源于间脑，进化上比较古老，内含大细胞，除接收同侧新纹状体来纤维以外，还接收来自丘脑和从大脑皮层来纤维。由它发出纤维主要是苍白球丘－丘脑束，一部分纤维分别向下传到丘脑底核、黑质。旧纹状体被视为锥体外系中一个主要传出中间站。已经证实，苍白球功效与肢体肌张力姿势反射相关。帕金森病患者到了中晚期几乎都有苍白球变性。帕金森动物模型专家讲座第6页

症状调研方法第一部分

PD可见两种症状1、非运动症状情绪障碍认识障碍睡眠障碍感觉障碍2、运动症状震颤僵直运动过慢/运动不能姿势不稳定其它症状包含步态和姿势障碍拖着脚走慌张步态步态冻结（无法移动）语言和吞咽障碍发声过弱语言仓促流涎吞咽困难帕金森动物模型专家讲座第7页

帕金森

模型介绍调研方法第一部分

帕金森动物模型分类①鱼藤酮优点：1、发病原因与流行病学相符2、复制了PD患者大多数LB形成运动及病理特征

缺点：1、非特异性损伤及外周器官毒性2、存活率低

机制：氧化损伤

方法：大鼠颅内注射12ug/只（黑质）②MPTP

缺点：1、制剂依赖型可逆模型2、必须依赖左旋多巴存活

机制：MPTP在黒质细胞内脱氢生成MPP+离子，

这种离子抑制线粒体复合酶，使该细胞死亡③6-OHDA

机制：引发特异性几茶酚胺能神经元退行性变

方法：1、双侧注射：

优点：成功率高缺点：往往因吞咽障碍、缺乏渴感、运动不能而死亡2、单侧注射：成功率：16ug＞8ug&4ug组,注射速度1ug/min,留置5min

诱导剂：阿扑吗啡0.2~0.5mg/kg

判断依据：共统计30min，若转圈数＞7r/min或210r/30min则合格

帕金森动物模型专家讲座第8页第一部分介绍模型制备第二部分帕金森动物模型专家讲座第9页

模型制备

动物选择第二部分Wistar大鼠SD大鼠8周♂鼠290g帕金森动物模型专家讲座第10页

术前准备第二部分1、仪器准备大鼠脑立体定位仪微量注射器钻孔器2、手术器材：15%双氧水、戊巴比妥钠、75%乙醇、碘伏手术剪刀、镊子、手术缝合线、医用棉球、抗生素帕金森动物模型专家讲座第11页

开颅前第二部分1、↓麻醉：20mg/只（290g）

戊巴比妥钠麻醉2、↓头部剃毛3、固定头颅：先将一侧耳棒轻轻插入外耳道，碰到骨性外耳道底后固定耳棒，继之一样插入固定另一耳棒，检验大鼠头部固定是否稳定，松斜，两侧耳棒刻度是否对称，轻移耳棒使两侧刻度一致头位完全居中，再次固定耳棒；固定上颌：将大鼠上门牙塞进上齿固定板槽内，旋紧螺丝。从各方向推压动物头部，均不应出现移动。经过定位针测量调整前后囟在同一矢状线上，并使前囟(Bregma)和后囟(Lambda)尽可能处于同一水平面上，检验是否固定好标准主要有三个：鼻对正中、头部不动、提尾不掉帕金森动物模型专家讲座第12页

头部切口第二部分3、头部切口用手术刀片沿颅骨正中线切开，再以15%H2O2去除结缔组织（H2O2还能够起到止血作用），以清楚看到颅骨表面缝隙为宜。帕金森动物模型专家讲座第13页第二部分

定位图谱

确定注射位点冠状切面帕金森动物模型专家讲座第14页第二部分

定位图谱

确定注射位点矢状切面帕金森动物模型专家讲座第15页第二部分

定位图谱

确定注射位点水平切面帕金森动物模型专家讲座第16页第二部分

核团定位4、核团定位首先，在脑定位仪上读出Bregma坐标（AP,ML,DV）,再依据文件上寻找到目标靶核团坐标（这些坐标都是基于Bregma坐标为0,0,0），换算出此核团在颅骨表面实际坐标。帕金森动物模型专家讲座第17页

钻孔第二部分5.钻孔

1、利用定位仪，确保前囟(Bregma，X=0,Y=0,Z=0)和后囟(Lambda)处于同一水平面上(X、Z值相差皆小于0.1)；2、脑内核团定位，依据脑图谱，确定待注射脑区位置参数，包含离Bregma和Lambda点距离以及核团深度，比如（注：包新民图谱）内侧前额叶皮层(medialPrefrontalCortex,mPFC)位置是：门齿线（imcisorbar）向下2.4mm倾斜;Bregma向后3.7mm和4.4mm,中线往右1.7mm和1.2mm，Bregma向下7.5mm；3、利用定位仪找到要注射6-OHDA位置，用Marker笔或定位针在颅骨上做好标识；4、小心地用颅骨钻头（或牙科钻）在注射位点处轻磨颅骨，将颅骨慢慢打薄，当颅骨出现裂缝时候（至硬脑膜），用医用注射器针头小心挑破，预防损伤，假如在此过程中有出血，能够用很小医药棉球拉成长条形将血吸走，钻孔时一定要控制好，不然很轻易在钻通颅骨后一不小心钻头进入脑组织，造成严重损伤帕金森动物模型专家讲座第18页

6-OHDA

注射第二部分6.6-OHDA注射1)用PBS冲洗微量注射器(5μl规格)3-5次；2)4ug/ul6-OHDA溶解于0.2%Vc（必须当日配置），3)将微量注射泵，微量注射器组装好，置于钻好孔上方，针尖与颅骨平行(Z=0)，微调注射器位置使之与之前钻孔时位置相同；4)依据定好深度将注射针迟缓下降以0.05μl/min速度注射6-OHDA，每点注射3ul注射完成后，将注射针停留在注射位置5min待6-OHDA扩散，然后迟缓提针4mm，继续留针5min后迟缓退针7)用PBS清洗微量注射器5次备用；8)注意注射过程中若有出血立刻用棉签吸走，以免带出6-OHDA帕金森动物模型专家讲座第19页

缝合

抗感染第二部分7、缝合定位注射后缝合头皮，即可完成脑立体定位注射。8、术后抗感染先锋v50mg/kg肌肉注射或庆大霉素2ml，兑100ml盐水中，每只大鼠0.5m帕金森动物模型专家讲座第20页模型制作第二部分模型效果评价第三部分提议总结Proposals帕金森动物