真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读专家讲座

真菌药敏试验及真菌药敏判断标准解读真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第1页真菌药敏试验真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第2页微生物试验室检验进展直接涂片培养真菌抗原检测分子生物学技术真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第3页直接涂片1肠道和口咽部涂片念珠菌是正常人体胃肠道和咽部正常菌群，所以不能以这些部位涂片见到孢子或培养出念珠菌即作为真菌感染依据必须与临床表现相结合来确定诊疗。从支气管肺泡灌洗液检验卡氏肺孢子虫是确诊主要依据真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第4页直接涂片2痰和粪便涂片•粪便涂片念珠菌20-30/油镜或占50%以上•痰标本涂片或培养未见细菌，有大量菌丝及孢子。真菌数每油镜视野>20•口腔涂片未见细菌。真菌数>20－25/视野，有菌丝。培养：纯培养真菌•阴道：培养出白色念珠菌。涂片见到菌丝和孢子真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第5页微生物技术----直接涂片真菌直接镜检阳性所见

真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第6页直接涂片3

有意义涂片结果•机体内部标本如血液、腹水、C5F、脓肿穿刺液等•新鲜尿液见到大量菌丝及孢子•口腔、阴道、支气管灌洗液见到酵母样菌应作培养确定•组织真菌涂片真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第7页微生物培养技术有意义真菌培养标本非经口痰标本非插管尿标本血液或其它无菌体液(胆汁、胸腹水、脑脊液）真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第8页微生物培养技术和进展深部标本（痰、粪、尿、脓、体液、咽拭、尿道及阴道分泌物）标本接种于含氯霉素沙氏葡萄糖琼脂及科玛嘉念珠菌显色培养基分别置25°C及37°C培养48小时常见酵母在科玛嘉念珠菌显色培养基即可汇报，判定符合率在95％左右真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第9页微生物培养技术和进展念珠菌显色培养基（CHROMagarCandida）原理：几个常见念珠菌独特酶底物与显色基团化学结合用于判定95%以上-白念珠菌（绿、翠绿）-热带念珠菌（蓝）-克柔念珠菌（粉红，含糊有微毛）亦可用于判定85%光滑念珠菌（紫）其它念珠菌呈白色30－37℃培养48h后观察结果此方法经济,但不够准确真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第10页微生物培养技术和进展如为不显色酵母，纯化后作API20C或自动微生物判定仪YST卡判定如为霉菌，应种于察氏琼脂，其对青霉、曲霉及镰刀霉都具判定作用CSF和血液种于沙氏葡萄糖琼脂，分别置25°C及37°C，1周,或直接接于血培养瓶中，37°C，1周真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第11页微生物培养技术和进展无菌部位采集标本(如血,CSF、胸腹水、关节液等)中分离任何酵母都必须判定到种，都有诊疗意义。同一部位重复分离出同一菌种也具主要意义。从非无菌部位(粪、痰、咽拭等)分离到条件致病菌(如白念珠菌)，如直接镜检大量菌丝(+)，须结合临床认定具致病性真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第12页血培养注意事项血培养污染易污染微生物有时有致病作用吗？对两次不一样部位血培养生长出不一样微生物微生物反抗生素均敏感微生物快速生长上述情况下应考虑为感染临床试验室工作人员和医生之间应交流真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第13页血培养排名前10位临床致病菌真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第14页血培养标本留取注意事项严格皮肤消毒和瓶盖消毒用安尔碘消毒皮肤，1-2分钟自然干燥用75%酒精消毒瓶塞并风干，以免造成假阴性结果不提议使用真空针将患者静脉与血培养瓶直接相通，以防止培养肉汤返流入血，且难以控制采血量.2小时内送检，如不能可放室温，但要标识真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第15页血标本留取注意事项推荐使用两到三套血瓶(需氧+厌氧)送检，最少两套抽血时间:寒站时先后抽两套,间隔时间不超出15分钟，以免影响治疗时机真菌培养时间为5天，但双相真菌需2-4周，如马尔尼菲青菌，医生可注明真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第16页环境污染假阳性不容忽略4-6月和9-10月为医院和外界空气中真菌高密度时期相关分析发觉病房相对湿度和温度与病房真菌浓度高度相关，提醒病房湿度和温度控制主要性仅靠开窗通风更新空气，在真菌高度繁殖时期效果差真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第17页环境污染不容忽略使用新消毒装置，实现边消毒，边工作ICU病房空调出、入风口和水龙头表面真菌和曲霉污染最为严重水源也易污染，国外报道有烟曲霉和镰刀菌由水源传输造成免疫抑制患者侵袭性曲霉感染报道强调无菌操作真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第18页微生物培养技术---念珠菌《芽管试验》•鉴酵母接种于0.5cc血清中混匀•37℃2h后观察有没有芽管形成•须注意与芽孢间区分有芽管形成者即为白念珠菌。(98%)真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第19页微生物培养技术芽管试验阳性(高倍)真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第20页微生物培养技术《米粉小培养》将无菌载玻片放入无菌平皿(9cm规格)，溶解培养基后倒在玻片上，待凝固后划分或接种待鉴菌种，旁放一温棉球保温，盖上平皿，25℃,48h后取出小培养，加盖玻片后置显微镜下观察。配方：米粉10g，吐温8010ml，琼脂10－20g，蒸馏水1L真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第21页微生物培养技术白念在玉米吐温琼脂上形成厚膜孢子真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第22页微生物培养技术<API－20CAux>商品化酵母判定系统每条反应板含20个小孔，其中19个含脱水底物(糖)第一孔为空白对照，经过加入待鉴菌悬液，在48h后观察生长情况，判读反应后结果转为7位数生物型数码，经过查阅密码手册得出判定结果大多数酵母48h内可判定，新型隐球菌和毛孢子菌则需72h当前此试剂盒可判定16种念珠菌，6种隐球菌和3种毛孢子菌及其它酵母菌共42种真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第23页微生物检验技术真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第24页微生物学检验----小结1①合格痰液经直接镜检发觉菌丝，真菌培养2次阳性(包含曲霉属、镰刀霉属、接合菌)②支气管肺泡灌洗液经直接镜检发觉菌丝，真菌培养阳性③合格痰液或支气管肺泡灌洗液直接镜检或培养新生隐球菌阳性④支气管肺泡灌洗液或痰液中发觉肺孢子菌包囊，滋养体或囊内小体真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第25页微生物学检验：中华内科杂志编辑委员会标准合格痰液经直接镜检发觉菌丝，真菌培养2次阳性（包含曲霉属、镰刀霉属、接合菌）；支气管肺泡灌洗液经直接镜检发觉菌丝，真菌培养阳性；合格痰液或支气管肺泡灌洗液直接镜检或培养新生隐球菌阳性；支气管肺泡灌洗液或痰液中发觉肺孢子菌包囊、滋养体或囊内小体；血液标本曲霉菌半乳甘露聚糖抗原（简称GM）（ELISA）检测连续2次阳性；血液标本真菌细胞壁成份1,3-β-D葡聚糖（G试验）连续2次阳性；血液、胸液标本隐球菌抗原阳性。

血液标本真菌抗体测定作为疾病动态监测指标有临床意义，但不能用于早期诊疗。血液标本各种真菌PCR测定方法，包含二步法、巢式和实时PCR技术，即使灵敏度高，但轻易污染，其临床诊疗价值有待深入研究。真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第26页隐球菌检验现实状况—抗原检测当前检测方法少，检出率低死亡率高艾滋病人和移植病人感染率高抗原检测很主要真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第27页隐球菌检验技术和进展《隐球菌乳胶抗原凝集试验(商品化试剂盒)》以乳胶颗粒为载体，将新生隐球菌抗体球蛋白标识在其表面，制成致敏乳胶悬液，当与患者脑脊液或血清作用时，如标本中有新生隐球菌荚膜多糖抗原存在，可产生肉眼可见凝集反应在检测CSF标本时，因抗原量过高而出现假阴性，应做倍比稀释，如1:50,1:100真菌药敏试验和真菌药敏判断标准解读第28页微生物检验技术和进展检测新生隐球菌荚膜多糖抗原诊疗及推测隐球