尿样中氧氟沙星的含量测定

尿样中氧氟沙星的含量测定第1页，共32页，2023年，2月20日，星期一实验目的：1.分析临床上广泛用于治疗泌尿系统，呼吸系统感染的药物氧氟沙星。2.比较LC-UV与LC-荧光分析氧氟沙星的区别。第2页，共32页，2023年，2月20日，星期一背景资料：

氧氟沙星是第三代喹诺酮类新型广谱抗菌药,并具分布广,吸收好,半衰期长等特点,临床广泛应用具有广谱抗菌作用。第3页，共32页，2023年，2月20日，星期一尿样采集：受试者空腹饮水200ml排尿,留取1h后尿样作空白,一次口服OFLX片600mg,收集1，2，3，4，5小时后的尿样，做好标记。第4页，共32页，2023年，2月20日，星期一LC-UV法分析尿样中氧氟沙星的含量一、实验条件：1.1实验仪器

Agilent高效液相色谱仪，G1314B-VWD紫外检测器，色谱柱，量瓶1.2实验试剂氧氟沙星片剂，甲醇(色谱纯)，尿样，空白尿样，HAc溶液第5页，共32页，2023年，2月20日，星期一1.3色谱条件色谱柱:C185μm(250mm×416mm)

流动相:甲醇/0.05%HAC=80：20

流速:1ml/min

进样量：20μl

柱温：室温检测波长：在250～400nm处扫描，选取有最大吸收度处作为检测波长。实际过程中选用294nm作为检测波长。第6页，共32页，2023年，2月20日，星期一二、实验方法2.1尿液的预处理取空白尿样和尿样，13000r/min离心10min，取上清液经0.45μm的水相滤膜过滤，保留滤液。第7页，共32页，2023年，2月20日，星期一2.2氧氟沙星标准液的配制精密称取氧氟沙星片剂200mg,置50ml容量瓶中,以流动相稀释至刻度,配成4.0mg/ml的储备液，用流动相稀释400倍，吸取20μl作为进样品。第8页，共32页，2023年，2月20日，星期一2.3标准曲线的制作

测定时，取标准液0.5，1，1.5，2，2.5ml,用流动相稀释于10ml量瓶，吸取20μl作为进样品，记录色谱图，以氧氟沙星标准浓度对峰面积进行回归，得到回归方程。第9页，共32页，2023年，2月20日，星期一2.4空白尿样的配制取空白尿液滤液1ml,用流动相稀释20倍，吸取20μl作为进样品。2.5尿样的配制取尿液滤液1ml,用流动相稀释20倍，吸取20μl作为进样品。第10页，共32页，2023年，2月20日，星期一2.6进样先进1针标准品观察流动相配置是否合适,合适后,进1针空白尿样观察有无杂质在测定波长处影响左氧氟沙星的吸收,然后进样标准品与待测样品,标准品进样5针来检验仪器精密度。第11页，共32页，2023年，2月20日，星期一2.7回收率实验取浓度为0.5，1，1.5μg/ml的氧氟沙星尿样，称取氧氟沙星标准品，配置为相同浓度，通过峰面积比值，测定回收率。第12页，共32页，2023年，2月20日，星期一2.8精密度实验取浓度为0.5～2.5μg/ml的氧氟沙星标准品，1d内重复测定5次,测得日内RSD，隔日测定5次,测得日间RSD。第13页，共32页，2023年，2月20日，星期一紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量，实验操作方法除检测器设定与荧光检测器不同外（检测波长：294nm），其余设置和操作均与荧光检测时相同。第14页，共32页，2023年，2月20日，星期一三、实验结果荧光法测定尿样中左氧氧氟沙星浓度标准曲线图第15页，共32页，2023年，2月20日，星期一紫外法测定尿样中左氧氟沙星浓度标准曲线图第16页，共32页，2023年，2月20日，星期一精密度日内、日间RSD测量荧光法日内RSD=2.6%

日间RSD=3.3%紫外法日内RSD=0.8%

日间RSD=2.9%第17页，共32页，2023年，2月20日，星期一回收率实验回收率荧光98.7%、101.4%、101.2%；紫外99.6%、98.4%、99.1%。第18页，共32页，2023年，2月20日，星期一荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星量（g）-时间曲线

第19页，共32页，2023年，2月20日，星期一紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星量（g）-时间曲线

第20页，共32页，2023年，2月20日，星期一荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量（g）-时间曲线

第21页，共32页，2023年，2月20日，星期一紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量（g）-时间曲线

第22页，共32页，2023年，2月20日，星期一讨论

1、采用LC-UV法与LC-荧光法分别测定尿样中氧氟沙星的含量，并且比较两种方法测量结果的不同，因此要求测量过程具有对照性：待测样品，标准品，空白样品的浓度两者均相同，流动相也相同，都采用外标法，但因为分析方法的不同，检测波长不同。第23页，共32页，2023年，2月20日，星期一

2、实验中所采用的尿液因为新鲜尿液，如果无法做到这点，因在尿液中加入二甲苯等防腐剂，避免尿液因细菌繁殖造成混浊，影响试验效果。而且尿样中的药物会分解，影响实验结果，因而最好是现取，实验过程中不使用时放入冰箱保存第24页，共32页，2023年，2月20日，星期一

3、由于没有标准品对照，在测定时以左氧氟沙星片作为标准品使用。而事前没有对其中左氧氟沙星的实际含量进行过标定，也不能排除片剂中的其他成分（如辅料中的抗氧化剂等）对实验结果的影响。第25页，共32页，2023年，2月20日，星期一

4、实验本来应该统计每次的尿液量，计算出每次排尿中含有的左氧氟沙星的含量，然后制的排出药物量-时间曲线，因为本次实验中没有精密的容器量尿液体积，只能大概估计尿液量，测算出尿液中药物的量。第26页，共32页，2023年，2月20日，星期一

5、实验中考虑到出峰时间和分离度以及实际操作的便利程度，最终选择的流动相甲醇：0.05%冰醋酸溶液=80：20，但是还是有脱尾现象，在荧光检测中特别明显。

6、从实验数据，我们可以认为荧光检测器作为检测装置，灵敏度、专属性好（没有杂质峰），较紫外检测器优。

第27页，共32页，2023年，2月20日，星期一标准品中左氧氟沙星出峰图

（紫外检测器检测）第28页，共32页，2023年，2月20日，星期一尿样中左氧氟沙星出峰