金番止泻胶囊提取物不同比例药效对比研究

金番止泻胶囊提取物不同比例药效对比研究目录摘要 Ⅰ-Ⅱ1前言 1TOC\o"1-2"\h\u236591.1腹泻研究现状 前言1.1腹泻研究现状腹泻（diarrhea)是一种临床常见病、多发病，分急性和慢性两类。急性腹泻是由多种不同原因(如细菌感染、毒素作用、化学物质刺激等)引起的肠道急性弥漫性炎症。为常见急症之一,四季皆可发生,夏秋之际发病率较高,以大便次数增多,粪质清稀或如水样为其临床特征[1]。慢性腹泻指病程在两个月以上或间歇性在2~4周内的复发性腹泻，可见于肠道感染性疾病、肠道非感染性炎症、小肠吸收不良和运动性腹泻等[2]。目前治疗腹泻，一般医院首选抗生素进行治疗，许多腹泻患者也自行选择抗生素，由于滥用抗生素引起的二重感染增多,抗生素毒副作用也导致疾病的不断出现[3]，随着临床上抗生素的滥用，加速了肠道病原菌耐药性的产生，给临床治疗带来困难。吸附剂、或抑制肠蠕动的药物，同时采用补液疗法辅助，以防脱水，虽然可以减轻症状，对于肠道非感染炎症有好的疗效，但对于感染性腹泻患者疗效有待观察[4]，且治标不不治本。中医治疗腹泻可以在辨证基础上对症治疗，综合协同，对疾病实现早期干预，减轻患者症状，减弱病原体毒素对人体脏腑器官的损害，具有显著疗效，中药复方治疗腹泻以葛根黄芩黄连汤临床运用较为广泛[5]，另还有白头翁汤等，但组方都过于复杂，基本上含有八种以上，甚至十五种以上的药材，原料成本高、制备工艺复杂，不利于稳定性、质量的控制。总之，目前并无治疗腹泻的特效药可用。1.2金樱根、番石榴叶、茯苓概况金樱根为蔷薇科植物金樱子（RosalaevigataMichx）的根,性平,味酸涩,有固精涩肠作用,主治遗精、遗尿、痢疾泄泻、崩漏带下、子宫脱垂、痔疮、烫伤等[6]，临床报道其可治疗细菌性痢疾、小儿脱肛等，水煎剂对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌有很强的抑制作用，很强抗噬菌体作用[7]。番石榴（PsidiumguajavaLinn）为常绿灌木或小乔木，系桃金娘科植物[8]，番石榴叶为番石榴的干燥叶及带叶嫩枝，民间常用番石榴叶辅助降糖，治疗急慢性肠炎、痢疾等疾病。番石榴叶提取物通过琼脂平板抑菌实验[9]发现其对沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用。茯苓（Wolfiporiacocos(Schw.)Ryv.&Gibn）是一种真菌类中药，多寄生于松科植物赤松或马尾松等树根上。味甘、淡、平，归心、脾、肾经，具有利水渗湿、健脾和胃、宁心安神等功效。茯苓的主要化学分为多糖，三萜，脂肪酸等，100%水煎剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌等均有抑制作用[10]。1.3本论文研究的意义金番止泻胶囊选用了我国资源丰富的番石榴叶、金樱根、茯苓三种药材为原料，用水、乙醇提取番石榴叶、金樱根、茯苓，获得其多糖、鞣质、总黄酮等有效部位。方中药味数较少，制备工艺简单，原料成本较低，利于稳定性、质量的控制。2材料与仪器2.1材料金樱根药材（批号：20131015，广州致信中药饮片有限公司)、番石榴叶药材（批号：20131015，广州致信中药饮片有限公司）、茯苓药材（批号：20130702，广州康圣药业有限公司）、番泻叶药材（批号：20091101，广州致信中药饮片有限公司）经广东药学院高级检验师田素英鉴定；黄连小檗碱片（国药准字H37021111，\t"/product/_blank"青岛黄海制药有限责任公司）；注射用硫酸链霉素（国药准字H20054140，深圳华药南方制药有限公司）；戊巴比妥钠（批号：020919，北京化学试剂公司）阿司匹林（国药准字J20130078，拜尔医药保健有限公司）；乙醇（批号：20130110，CP，天津市富宇精细化工有限公司）；乙酸（批号：20130210，天津市富宇精细化工有限公司）；KM小鼠由广东省中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(粤)2014-1002。2.2仪器KQ-500型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV1102紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司)；SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂)；CP225D型电子天平（德国Sartorius公司上海恒平科学仪器有限公司）；AUY220型电子天平（广州仪通仪器仪表有限公司）；JA2003电子天平（上海恒平科学仪器有限公司）；电热鼓风恒温干燥箱（上海讯能电热设备有限公司）；DFY-400摇摆式高速中药粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；HWS26型电热恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司，HWS26型）。3方法3.1药物制备金樱根乙醇、水提取物制备：金樱根适量，2次煎煮，每次用8倍水煎煮1h，过滤，合并滤液，浓缩得稠浸膏，再用乙醇（95%）热回流提取，过滤，浓缩、回收乙醇至稠浸膏，合并水、乙醇所提稠浸膏（记为A）。番石榴叶乙醇水提取物制备：方法同金樱根,得稠浸膏（记B)；番石榴叶挥发油制备：番石榴叶适量，水蒸气蒸馏法提取挥发油（记C)。茯苓水提物制备：茯苓适量（粉碎），加水煎煮2次，每次10倍量、煎煮一小时，过滤，合并滤液，浓缩成稠浸膏(记D）。将各提取物稠浸膏按甲比例（A:B:C:D=4:3:0.2:2）、乙比例（A:B:C:D=5:4:0.2:2）、丙比例（A:B:C:D=4:4:0.2:4）混合用蒸馏水配置成适宜浓度。3.2止泻实验3.2.1预防番泻叶所致腹泻取18～22g小鼠50只，随机分成5组,每组10只,雌雄各半。即:空白对照组、甲比例药物组（A:B:C:D=4:3:0.2:2）、乙比例药物组（A:B:C:D=5:4:0.2:2）、丙比例药物组（A:B:C:D=4:4:0.2:4）盐酸黄连素组。将以上各组动物称重标记后,各比例药物组和盐酸黄连素组以0.2mL/10g灌胃药液，对照灌胃生理盐水,灌胃后正常饮食，连续7d,末次给药后30min后，分别灌胃番泻叶2g•kg-1,(1mL相当于0.3g生药材),然后将小鼠单个放在垫有吸水纸的鼠笼内,每隔1h换垫纸,从灌胃番泻叶水浸液时开始计时，记录1～4h内小鼠排稀粪点数,比较组间不同时间累积腹泻次数(稀粪点数)及腹泻指数。3.2.2治疗番泻叶所致腹泻取18～22g小鼠50只，随机分成5组,每组10只,如上分组，连续灌胃小鼠6d,第7d，各组小鼠分别灌胃番泻叶2g•kg-1,(1mL相当于0.3g生药材),然后将小鼠单个放在垫有吸水纸的鼠笼内,1h后各组灌胃给药，每隔1h换垫纸,从灌胃番泻叶水浸液时开始计时,并记录1～4h内小鼠排稀粪点数,比较组间不同时间累积腹泻次数(稀粪点数)及腹泻指数。观察指标[11]:稀便率:每只动物所排的稀便数与总便数之比稀便级:表示稀便的程度）级数：1234污迹直径(cm)：<11～1.92～3>3统计时先逐个统个每一堆稀便的级数,，然后将该鼠所有稀便级数相加除以稀便次数得稀便的平均级数,简称稀便级。腹泻指数：稀便率与稀便级的乘积。3.3抗炎实验3.3.1腹腔通透性取体重18-22g的健康小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，如上分组，连续灌胃给药8天，每天一次。于末次给药后30min，尾静注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1mL/10g，随即腹腔注射0.8%冰醋酸生理盐水0.1mL/10g,20min后脱颈椎处死，（轻轻揉揉小鼠腹部）剪开腹部皮肤肌肉，用6mL生理盐水分数次洗涤（用注射器分次吸取生理盐水洗涤）腹腔，用吸管吸出洗涤液，合并后加入生理盐水至10mL，3000rpm离心15min，取上清液于590nm比色测定吸收度。3.3.2棉球肉芽肿取50只小鼠，雌雄各半随机分为5组，每组10只，各组小鼠在腹腔注射戊巴比妥钠（85mg•kg-1)麻醉下在腋下皮肤切口，在每只小鼠的腋下处先用碘酒消毒，后用75%酒精棉球脱碘后，各切开腋下皮肤约2mm左右长的纵切口，用眼科镊将1个灭菌棉球（每个10mg高压灭菌，50℃烘箱烤干，然后浸泡青链霉素）植入小鼠腋下，随即缝合皮肤。当天各给药组按剂量灌胃给药，每天1次，连续8天，末次给药后1h，处死小鼠，仔细剥离并取出棉球肉芽组织，置于干燥箱中60℃恒温干燥6h后称干重，所得重量减去原棉球重，即得肉芽肿的干重。数据处理方法：采用SPSS16.0统计软件包中多个样本率比较的方法进行统计学分析，计量数据用±s表示，P<0.05代表差异有显著性。3.4抑菌实验平板培养基的制备：在普通营养肉汤培养液中加入1.5%-2.5%琼脂粉，置于三角烧瓶中，按（2:100）加水，搅拌使营养肉汤琼脂粉完全溶解，配制成固体培养基。用PH试纸测试并用NaOH调整PH，盖橡胶塞，用牛皮纸包扎。置于条件为103.42kpa，121℃高压蒸汽灭菌20min。灭菌完毕后，从灭菌器内取出培养基，等培养基冷至50~60℃时，在超净工作台内，无菌操作将培养基倾注到无菌空平皿内，直径90mm平皿倾注约20mL，直径75mm平皿倾注15mL凝固后即成平板培养基。液体培养基的制备：称取一定量的普通肉汤粉末，加适量蒸馏水中溶解，冷却至室温，用PH试纸测试并用NaOH调整培养液PH，过滤分装后放于手提式电热高压蒸汽灭菌器内，升压至103.43kPa，温度121.3℃，保持20min。细菌液的制备：取5支种斜面细菌管和5支肉汤培养基管，左手握持，菌种管斜面朝上位于左侧，肉汤培养基管位于右侧，右手持接种环，经火焰灭菌。试管口迅速通过火焰灭菌；将已灭菌的接种环伸入菌种试管中，挑取斜面上的菌苔少许，取出接种环后迅速将菌种移种到肉汤培养基管；先将接种环的菌种挨着液面的试管壁上轻轻研磨，后直立试管，菌种即混合于肉汤中；取出接种环并在火焰上烧灼灭菌后放回原处，火焰灭菌两试管口后，把棉塞分别塞于原试管，在肉汤培养基试管上记上“菌名，接种时间”的标记。将培养基置于37℃恒温箱培养16h。含药纸片制作：取3支经灭菌后的试管，分别加入经灭菌的20张圆滤纸片和甲比例组、乙比例组、丙比例组、黄连小檗碱药液各10mL，浸泡4h直至药液被完全吸收，纸片直径4mm，每张纸片吸取药液500μL。纸片扩散琼脂法：无菌操作环境下，用无菌微量加样器吸取100μL细菌液到固体培养基上，用涂布棒涂抹均匀。镊子灭菌冷却后分别夹取经灭菌后吸取有不同药液的圆滤纸片（直径4mm，每片吸取各比例组药液500μL）贴于MH琼脂平板表面。各纸片中心相距不小于24mm，纸片距边缘不小于15mm，各纸片间距离相等。在平皿背面相应的纸片后做好标记，记录好各标记所代表的溶液名称。倒置并送37℃恒温箱内培养18～24h。培养完成后用游标卡尺测量抑菌圈直径（精确到0.1mm），记录实验结果。试管稀释法:取10支无菌小试管，编号排于试管架上。无菌操作下往1～10号管各加入2mLMH肉汤。1号管加入药液2mL混合均匀后吸移取2mL加入2号管,依次稀释至8号管，吸取2mL弃去，10号管为肉汤无菌生长对照管，9号管为细菌生长对照管（见表1）。除10号管，用无菌加样器在其余各管中加入菌液100μL，置于37℃恒温箱内培养16h。凡澄清透明的的管判定为无菌生长，以无菌生长的最高药物稀释度为该药液对细菌的MIC。从上述无菌生长的试管中挑取培养液，划线接种于MH肉汤琼脂平板上，37℃恒温箱培养24h。平板上无菌落生长说明对应管中细菌全被杀死，以无菌生长的最高药物稀释度为该药对细菌的MBC.表1试管稀释法试管号12345678910培养液（mL）2222222222药液（mL）移取22222222移去浓度（mg•mL-1）菌液（mL）0.10.10.10.10.10.10.10.10.13.5药物安全性评价小鼠急性毒性MTD值测定：取试验前禁食12h小鼠，按体重和性别随机分为43组，甲比例药物组、乙比例组药物、丙比例药物组，每组10只。药物组按25mL•kg-1小鼠体重灌胃给药1次，进行LD50值的测定。难以测出LD50值，按20mL•kg-1小鼠体重1天多次灌胃给药进行MTD和MLD值的测定。根据各分组小鼠给药剂量，计算各组分MTD值。观察及体重变化情况。小鼠最大耐受倍数[12]=×（公式1）4结果4.1抗腹泻作用比较4.1.1预防腹泻效果比较金番止泻胶囊甲、乙、丙比例药物组1h内腹泻指数与空白对照组对比，腹泻程度较浅，但无显著性差异，2h后番泻叶引起较为强烈腹泻，各比例组药物小鼠腹泻指数大幅度提升，3h丙比例组小鼠腹泻指数(0.600±0.938)，与空白对照组腹泻指数(2.500±0.548)比较有显著性差异（p<0.05);甲、乙组药物腹泻指数分别为(1.733±0.985)，(1.560±0.823)，腹泻程度较生理盐水组浅，但无显著性差异，结果见表2。表2各组对番泻叶所致腹泻预防作用腹泻指数的比较组别剂量g•kg-1腹泻指数1h2h3h4h甲比例药物组0.80.367±0.5722.283±1.1831.733±0.9851.167±.408乙比例药物组0.760.500±0.5482.833±0.4081.560±0.8230.833±0.983丙比例药物组0.560.500±0.8362.667±0.8170.600±0.938*0.500±0.837*黄连小檗碱组0.1130.526±0.4332.000±0.0000.000±0.000*0.000±0.000**生理盐水组—1.333±0.5161.883±1.0212.500±0.5481.667±1.366注：与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01。4.1.2治疗腹泻效果比较金番止泻胶囊甲、乙、丙比例药物组1h内腹泻指数与空白对照组对比，腹泻程度较浅，但无显著性差异，2h番泻叶引起较为强烈腹泻，各比例组药物小鼠腹泻指数大幅度提升，其中丙比例组小鼠腹泻指数(1.758±0.917）与阳性组(2.000±0.000)比较腹泻程度浅，有较好止泻效果，3h丙比例组小鼠腹泻指数(1.000±1.095)与空白对照组腹泻指数(2.167±0.753)有显著性差异（p<0.05);甲、乙组药物腹泻指数分别为(1.567±0.794)、(1.500±0.548)，腹泻程度较生理盐水组浅，但无显著性差异，结果见表3。表3各组对番泻叶所致腹泻治疗作用腹泻指数的比较组别剂量g•kg-1腹泻指数1h2h3h4h甲比例药物组0.80.5167±0.5742.350±0.7841.567±0.7941.000±0.632乙比例药物组0.760.67±0.8162.667±0.5161.500±0.5480.500±0.548丙比例药物组0.560.267±0.6531.758±0.9171.000±1.095*0.667±0.816黄连小檗碱组0.1130.883±0.2862.00±0.0000.167±0.408*0.000±0.000*生理盐水组—1.167±0.7532.217±0.4022.167±0.7531.333±1.367注：与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01。4.2抗炎作用比较4.2.1腹腔通透性金番止泻胶囊甲、乙、丙比例组有效部位药物小鼠吸光度值（0.045±0.05）、(0.044±0.011)、(0.050±0.012)与生理盐水组（0.105±0.106）相比较，甲、乙、丙组均有显著性差异（P<0.01），丙比例抗炎作用强于阳性组（0.088±0.013）。结果见表4。表4各组对醋酸提高腹腔通透性抗炎作用的比较组别甲比例药物乙比例药物丙比例药物阿司匹林生理盐水剂量(g•kg-1)0.80.560.760.2_吸光度值0.045±0.05**0.044±0.011**0.050±0.012**0.088±0.013**0.105±0.106注：与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01。4.2.2棉球肉芽肿金番止泻胶囊甲、乙、丙比例组药物小鼠棉球净重（6.100±1.5950mg、(7.000±0.667)mg、(5.000±0.667)mg与生理盐水组（9.000±1.808）mg相比较，甲、丙组有显著性差异（P<0.05），丙比例抗炎作用强于阳性组（6.500±0.707）mg。结果见表5。表5各组棉球肉芽肿抗炎作用的比较（慢性）组别甲比例药物乙比例药物丙比例药物阿司匹林生理盐水剂量(g•kg-1)0.80.560.760.2_棉球肉芽肿重量(mg)6.100±1.595*7.000±0.6675.000±0.667**6.500±0.707*9.000±1.808注：与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01。4.3抗菌作用比较4.3.1抑菌效果通过统计学软件统计各组抑菌圈直径，甲、乙、丙比例有效部位组对于枯草杆菌（7.78±0.35）mm、（9.42±0.67)mm、（7.70±0.82）mm与生理盐水(0.00)mm比较对具有显著性差异（P<0.01)。对于金黄色葡萄球菌抑菌直径甲组（7.40±0.83）mm、乙组（7.52±0.83)mm、丙组(6.22±0.98）mm与生理盐水组（0.00）mm比较有显著性差异（P<0.01)。对于大肠杆菌、伤寒杆菌无结果。结果见表6，图1、图2。表6各组纸片扩散法抑菌结果菌株浓度（g•mL-1)直径（mm)大肠杆菌枯草杆菌伤寒杆菌金黄色葡萄球菌甲比例药物0.102—7.78±0.35**—7.40±0.83**乙比例药物0.122—9.42±0.67**—7.52±0.83**丙比例药物0.132—7.70±0.82**—6.22±0.98**黄连小檗碱0.08—9.67±0.33**—8.57±0.14**生理盐水——0.00±0.00—0.00±0.00注:-细菌未生长图2枯草杆菌纸片扩散法实验结果图1金黄色葡萄球菌纸片扩散法实验结果图2枯草杆菌纸片扩散法实验结果图1金黄色葡萄球菌纸片扩散法实验结果4.3.2MIC测定比较各比例药物组与空白组对照均有抑制金黄色葡萄球菌、枯草杆菌生长的作用，甲比例组对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌MIC分别为0.0128g•mL-1、0.0064g•mL-1；乙比例组为0.0076g•mL-1、0.0153g•ml-1；丙比例组为0.0082g•mL-1、0.0082g•mL-1。结果见表7-1、7-2、7-3，图3、4、5、6、7、8。菌株稀释浓度(g•mL-1)对照0.10200.05100.02550.01280.0060.00320.0016阴阳金黄色葡萄球菌－－－－++++－枯草杆菌－－－－－+++－表7-1甲比例组药物试管稀释法抑菌结果注:-细菌未生长表7-2乙比例组药物试管稀释法抑菌结果菌株稀释浓度(g•mL-1)对照0.12200.06100.03050.01530.00760.00380.0019阴阳金黄色葡萄球菌－－－－－+++－枯草杆菌－－－－++++－注:-细菌未生长表7-3丙比例组药物试管稀释法抑菌结果菌株稀释浓度（g•mL-1）对照0.13200.06600.03300.01650.00820.00410.0021阴阳金黄色葡萄球菌－－－－－+++－枯草杆菌－－－－－+++－注:-细菌未生长图3甲比例组对金黄色葡萄球菌MIC结果图3甲比例组对金黄色葡萄球菌MIC结果图4乙比例组对金黄色葡萄球菌MIC结果图4乙比例组对金黄色葡萄球菌MIC结果图5丙比例组对金黄色葡萄球菌MIC结果图5丙比例组对金黄色葡萄球菌MIC结果图6甲比例组对枯草杆菌菌MIC结果图6甲比例组对枯草杆菌菌MIC结果图7乙比例组对枯草杆菌菌MIC结果图7乙比例组对枯草杆菌菌MIC结果图8丙比例组对枯草杆菌菌MIC结果图8丙比例组对枯草杆菌菌MIC结果4.3.3MBC测定比较对金黄色葡萄球菌的MBC值，甲比例组为0.0255g•mL-1，乙比例组0.0305g•mL-1，丙比例组0.0330g•mL-1。对枯草杆菌的MBC值，甲比例组为0.0660g•mL-1，乙比例组0.0510g•mL-1，丙比例组0.0330g•mL-1。结果见表8。表8各比例组药物对金黄色葡萄球菌及枯草杆菌的最低杀菌浓度菌株MBC最小杀菌浓度（g•ml-1)甲比例组乙比例组丙比例组金黄色葡萄球菌0.02550.03050.0330枯草杆菌0.06600.05100.03304.4急性毒性根据所做的预实验来看，金番止泻胶囊毒性较低，测不出LD50，以实验小鼠能接受的最大浓度和最大体积给予试药测定最大耐受量，,各比例组小鼠服用7天对应药物，体重增长趋势趋于正常，给药后连续观察7天，各组小鼠均无耸毛、卧、耳壳苍白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、抽搐、大小便失禁等症状产生。经最大耐受量试验考察，以上三种比例混合药物均可得到MTD，分别为甲42.4g•kg-1•d-1，乙35g•kg-1•d-1，丙33g•kg-1•d-1，根据2010年版中华人民共和国药典一部收载[13]茯苓人日常最大用量15g,《南宁市\o"医学百科：药物"药物志》可查番石榴叶日常最大用量人为7.5g,金樱根查《江西民间草药验方》人日常最大用量为100g。经计算得出各比例组人日常最大用量分别为甲15.7g•kg-1•d-1，乙16.5g•kg-1•d-1,丙12.5g•kg-1•d-1。根据公式1计算各组小鼠耐受量倍数分别为甲组844倍、乙组660倍、丙组823倍，均大于100倍，说明金番止泻胶囊毒性小，安全性高。根据根据各组小鼠体重增长趋势结果见表9，图9。表9番樱止泻胶囊不同药物比例对小鼠急性毒性MTD试验体重变化的影响(χ±s，n=1）给药组别体重(g)甲比例组乙比例组丙比例组D122.250±1.00622.350±1.05521.800±1.274D223.150±1.41524.200±0.97823.400±1.468D324.389±2.42125.100±2.27124.000±1.748D424.500±2.90525.650±2.28623.600±2.132D524.220±3.27025.520±1.98623.944±2.169D625.463±2.24326.060±1.97923.811±2.204D725.138±2.04926.600±2.73023.811±2.436图9小鼠体重增长趋势图9小鼠体重增长趋势5讨论5.1止泻、抗炎结果分析本课题对金番止泻胶囊各比例混合药物的止泻、抗炎实验，操作环境温度在28~23℃，湿度在35%~65%，在动物最适宜的环境范围，本人在小鼠身上反复实践，操作技巧达到了一定熟练程度，阳性药物以各个试剂的浓度，做过多次预实验，浓度可靠、准确。各药物组剂量也进行了多次计算、校对。所得各比例组混合药物均有止泻、抗炎药效的结果真实、准确、误差较小。5.2体外抑菌实验结果分析影响体外抑菌结果判定的因素有很多，如药物的浓度、药物对试验菌的敏感程度、培养时间、培养温度、菌种的生长活力、菌液浓度等。诸多因素中，菌种影响比较大，本次实验中，大肠杆菌在培养6h观察，发现药物组滤纸片存在抑菌圈，到18h再次观察，滤纸片周围长满菌种，无抑菌圈，而伤寒杆菌在培养18小时后，琼脂培养基呈现透明光滑现象，无明显菌群。不同细菌培养物在18～24h后大多进入稳定期或衰亡期，该两种菌种培养环境与金黄色葡萄球菌、枯草杆菌完全相同。大肠杆菌经稀释后，反复进行实验，结果均不理想，无法判断药效，伤寒杆菌重新接种，重复实验，实验结果然与首次相同，推断大肠杆菌的活力太强而伤寒杆菌活力太弱。金番止泻胶囊有效部位不同比例混合药物对金黄色葡萄球菌与枯草杆菌有明显的抑菌作用，抑菌圈边缘清晰，与黄连小檗碱进行对照，效果不及黄连小檗碱，但无明显差异。稀释法可定量测定中药对细菌、真菌的MIC、小杀菌浓度（MBC），测出抗菌中药的最基本的效学数据，用以评价该药的抑菌性能，直接在液体中反应，不存在吸收和挥发的问题，因而能比较正确地反映样品实际的使用效果，实验结果准确，可靠。6结论实验结果表明，金番止泻胶囊有效部位不同比例混合药物甲比例（A:B:C:D=4:3:0.2:2）、乙比例（A:B:C:D=5:4:0.2:2）、丙比例（A:B:C:D=4:4:0.2:4）对于番泻叶所致的腹泻均有预防和治疗作用，丙比例呈现出较好的止泻作用；通过抗炎实验观察，三种比例的药物均有较强的抗炎作用，丙比例效果更显著；通过急性毒性实验连续7天观察，小鼠无明显毒副作用反应，且体重增长趋势正常，甲、乙、丙比例耐受倍数为人所耐受的844、660、823倍，该药物具有较高的安全性。体外抑菌观察可得，同一浓度下，乙比例抑菌效果较明显，抑菌能力较强，而丙比例杀菌杀菌力最强。综合以上可认为甲乙丙三种比例有效部位均有较高的安全性和抗腹泻、抗炎、抗菌的作用，且经比较丙比例（A:B:C:D=4:4:0.2:4）为最佳比例。参考文献[1]谭洁，尹进．急性腹泻中医药治疗研究概况[J].湖南中医学院学报，2005,25(5):60-64.[2]常冰，黄丙元．腹泻的药物治疗进展[J]．现代医药卫生，2007,23（8）：1172-1173.[3]LembcekB，KistM，LentzeMJ，etal．Antibiotic-associateddiarrhea:therapeuticaspectsandpracticalguidelines-aninter-disciplinaryapproachtoacommonproblem[J].SchweizRundschMedPrax，2003，92(17)：809-816．[4]徐敬．蒙脱石散在儿童感染性腹泻中的疗效[J]．中国初级卫生保健，2010，24(6)：98．[5]徐劲松，徐文冲，霍志毅．加味葛根芩连汤治疗湿热型急性腹泻疗效观［J］．黑龙江中医药，2009，(2)：14-15．[6]谭年秀，郭巧玲，田素英．金樱根的药用历史及现代研究概况[J]．亚太传统医药，2010，6（12）：167-169．[7]赖岳晓,严寒静,田素英等.金樱根提取物体外抑菌活性的实验研究[J].今日药学，2012，22（9）：531-433．[8]陈国宝，陈宝田．番石榴叶提取物体外抗轮状病毒实验研究[J]．中国医药学报，2002，17（8）：502-504．[9]王芳，王力，董乐等．

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