荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用

荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用

【Summary】目的：探究荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用效果。方法：选取我院2021年5月～2022年5月收治的100例住院患者作为研究对象，采集患者的临床标本，并对其进行荧光定量PCR技术检测，分析对微生物检测结果。结果：50份粪便标本中，检测出沙门氏菌有29例，占比58.00%。肠出血大肠杆菌有2例，占比4.00%，溶血性杆菌8例，占比16.00%;在脓液液标本的50份中，金黄色的葡萄杆菌有8例，占比16.00%。选取沙门氏菌、肠出血大肠杆菌、溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌阳性的各4株，检测特异性，结果为特异性100%，没有假阴性和假阳性检测。结论：在临床微生物检测中实施荧光定量PCR技术干预可提高检测结果准确性，具有较高的灵敏度与特异性，值得推广实施。【Keys】荧光定量PCR技术；临床微生物检测；应用荧光定量PCR技术不断发展，在临床微生物检测工作中发挥了重要作用，该技术是指在PCR扩增反应体系中将荧光基因加入其中，并对其进行扩增，使得每一个循环产物荧光信号得到实时的检测，并通过最终的标准曲线比较未知模板，并进行定量分析[1-2]。作为一种新型的核酸临床微生物检测技术，被临床中广泛应用，并且该技术具有多方面应用优势，其灵敏度高，特异性强，检测准确且快速，可应用在多种疾病的诊断中。本文研究以100例住院患者作为研究观察对象，意在分析荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用效果，具体报告下述。1.资料与方法1.1一般资料研究选取我院收治的住院患者共100例，收治时间（2021年5月～2022年5月），采集患者的临床标本，并对其进行荧光定量PCR技术检测。其中男性患者为55例，女性患者为45例，其年龄集中在23-81岁之间，均值（60.46±2.64）岁。其中包括15例泌尿系统感染患者，15例细菌性食物中毒患者，40例上呼吸道感染患者，15例流行性感冒患者，10例肾俞肾炎患者，5例慢性阻塞性肺病患者。本组患者的临床标本中，采集50份粪便样本与50份脓液样本。1.2方法对所有检查者进行荧光定量PCR技术检测，将样本增菌液滴入灭菌Epp中，样本量为1.5mg，将其充分混均匀并进行离心处理，保证离心干预时间为2min。等待上层清除彻底后需要将DNA提取液加入剩余沉淀中，并保证几率为100μl，将其充分混合完成后放置在沸水浴中，并保证时间为10min。后进行离心处理（T=5min）,离心后取上层清液，保证样本剂量为4μl，将上述操作完成后需要进行PCR反应。将PCR检测仪准备良好，并结合仪器有关操作流程按照说明书进行混合液制备，在此过程中需要保证仪器参数调整适宜，在操作完成后对结果进行判定，在此过程中需要严格按照试剂盒说明以及检测仪说明进行判定。当微生物菌分离后，分别选取5株菌株进行相关检测，若菌株的检测结果显示为阳性，则进行梯度稀释操作，（倍数=10倍），后依据试剂盒说明书对PCR进行扩增操作。1.3观察指标观察荧光定量PCR技术的检测结果，并对粪便标本以及脓液标本的病菌检出情况进行统计。1.4统计学分析研究所有数据行统计数据，计量资料(±s)表示、计数资料n（%）表示，组间对比t、检验，P＜0.05，统计意义标准，应用SPSS24.0软件统计分析。2.结果在检测的50份粪便标本中，检测出沙门氏菌有29例，占比58.00%。肠出血大肠杆菌有2例，占比4.00%，溶血性杆菌8例，占比16.00%;在脓液液标本的50份中，金黄色的葡萄杆菌有8例，占比16.00%。选取沙门氏菌、肠出血大肠杆菌、溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌阳性的各4株，检测特异性，结果为特异性100%，没有假阴性和假阳性检测。沙门氏菌、肠出血大肠杆菌、溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌进行10倍系列系数检测，来验证PCR的敏感程度，结果出现了核酸样本为最低核酸检测的程度。详见表1。表1荧光定量PCR技术检出情况[n（%）]样本病菌类型检出例数占比粪便样本沙门氏菌2929(58.00)出血性大肠杆菌22(4.00)溶血性弧菌88(16.00)脓液标本金黄色葡萄球菌88(16.00)3.讨论荧光定量PCR主要通过荧光染料或特异性探针（有荧光标记）对PCR产物标记跟踪，可以实时在线监控其反应过程，并在相应的软件联合作用下，可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度[3]。其中荧光定量PCR是采用荧光染料或者是荧光探针进行标记跟踪。也就是说荧光定量PCR可以采用染料法和探针法。染料法和探针法之间也有较大的区别，在选择时需要注意。同时，荧光定量PCR可以测定样本模板的初始浓度，也就是可以定量，这比普通PCR有较大优势[4-5]。结合此次实验研究，以100例住院患者作为研究对象，采集患者的临床标本，并对其进行荧光定量PCR技术检测，主要从患者的不同样本中检测出沙门氏菌、肠出血大肠杆菌、溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌，且特异性100%，灵敏度较高。该结果证实了荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的显著优势。综上所述，荧光定量PCR技术具有检测灵敏度高、定量能力强、检测结果稳定等特点，被广泛用于临床微生物检测中，为临床检验做出重要贡献。Reference：[1]孙佳,陆震鸣,张晓娟,等.实时荧光定量PCR检测金山醋酸乳杆菌的方法与应用[J].微生物学报,2021,61(10):3211-3221.[2]曾童,徐畅,贺文文,等.16SrRNA靶向测序联合荧光定量PCR对血流感染人型支原体的鉴定[J].中国病原生物学杂志,2021,16(4):478-481.[3]卢紫欣,陈刚新,张春蕊,等.实时荧光定量PCR法对不同A2/O工艺中硝化细菌丰度的研究[J].广东化工,2021,48(1):87-90,71.[4]牛培华,朱耀武,陆柔剑,等.一种新型冠状病毒荧光定量PCR快速检测方法的应