食用菌制种技术

食用菌制种技术第1页，共66页，2023年，2月20日，星期四教学目标、重点、难点教学目的：熟练使用制种用品、用具、设备、设施进行制种生产。本节重点：食用菌制种条件，制种工具的使用。

第2页，共66页，2023年，2月20日，星期四一、食用菌菌种的概念与级别(一)、菌种的概念

菌种是指经人工培养并可供进一步繁殖或栽培使用的食用菌菌丝体，常常包括供菌丝体生长的基质在内，共同组成繁殖材料。菌种是食用菌生产的首要条件，菌种性状的优劣直接影响到生产的成败。常言道：“有收无收在于种（种子），多收少收在于种（栽培）”第3页，共66页，2023年，2月20日，星期四（二）菌种的级别1.一级种（母种）用分离法首次得到的

纯次生菌丝体

概念概况培养环境试管、斜面培养基用途再生母种扩大原种

保藏用种菌丝弱而少、不可直接栽培特点第4页，共66页，2023年，2月20日，星期四第5页，共66页，2023年，2月20日，星期四2.二级种（原种）将母种扩大至粗放培养基上

形成的菌种概念概况培养环境菌丝较多而壮、适应性较强特点用途扩大栽培种大口瓶、较粗放的

液体或固体培养基第6页，共66页，2023年，2月20日，星期四第7页，共66页，2023年，2月20日，星期四3.三级种（栽培种）将原种扩大至粗放培养基上

形成的菌种概念概况培养环境菌丝多而壮、适应性强特点用途栽培生产菌种袋、较粗放的

液体或固体培养基不可再扩第8页，共66页，2023年，2月20日，星期四第9页，共66页，2023年，2月20日，星期四母种、原种和栽培种第10页，共66页，2023年，2月20日，星期四二、制种常用的设备与用品（一）、灭菌设备1、手提式高压灭菌锅第11页，共66页，2023年，2月20日，星期四使用压力：1.5kg/c㎡灭菌时间：25—30min对象：玻璃器皿、母种培养基、无菌水等。可用高压饭锅替代，但灭菌时间延长至40min第12页，共66页，2023年，2月20日，星期四2、卧式高压灭菌锅第13页，共66页，2023年，2月20日，星期四使用压力：1.5kg/c㎡灭菌时间：1.5—2h对象：原种、栽培种培养基的灭菌使用方便，但造价高，一般菇农用常压灭菌灶。第14页，共66页，2023年，2月20日，星期四3、常压灭菌灶第15页，共66页，2023年，2月20日，星期四使用温度：100---105℃灭菌时间：维持8—10h对象：原种、栽培种培养基的灭菌第16页，共66页，2023年，2月20日，星期四（二）、制种容器第17页，共66页，2023年，2月20日，星期四（三）、接种设备与工具1、接种设备（1）、超净工作台（局部净化设备空，气过滤除菌）第18页，共66页，2023年，2月20日，星期四（2）、接种箱第19页，共66页，2023年，2月20日，星期四2、接种工具接种针、接种环、接种刀、接种铲、镊子等第20页，共66页，2023年，2月20日，星期四（四）、菌种培养设备放置接种后各级菌种，并提供适宜温度和通气条件，使菌丝生长良好的专用设备第21页，共66页，2023年，2月20日，星期四1、恒温培养箱根据需要使温度恒定在一定范围内,一般用于培养斜面试管和少部分原种。第22页，共66页，2023年，2月20日，星期四2、培养室培养架：以操作方便为宜,宽0.7~1.2米，层间40cm调温：电炉、红外线、暖气管、门窗、抽风机测温：干湿球温度计照明：避免使用蓝光灭菌：紫外灯第23页，共66页，2023年，2月20日，星期四第24页，共66页，2023年，2月20日，星期四三、菌种的制作(一)母种的制作1、母种培养基①PDA培养基：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000亳升，PH值自然。适合以一般母种的培养第25页，共66页，2023年，2月20日，星期四②.PDA加富培养基：去皮马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000亳升，PH值自然。适合母种的复壮培养。③.PDA综合培养基：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，维生素B15—10mg，水1000亳升，PH值自然。适合草菇、灵芝、猴头菇、茯苓母种的培养。④.母种保藏培养基：在PDA培养基中加10g蛋白胨。第26页，共66页，2023年，2月20日，星期四粉状条状属天然植物多糖

融点96℃以上

凝点40℃以下

冷水中不溶

透明度好、粘着力强

不被微生物分解利用特性第27页，共66页，2023年，2月20日，星期四2、母种培养基的制备PDA培养基：去皮马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂15-20g、水1000ml马铃薯去皮，切片，称取200克，沸水煮20-30分钟，过滤，取滤汁添水至1000ml，加葡萄糖或蔗糖20克、琼脂15-20克煮熔，pH自然，常规灭菌即可。第28页，共66页，2023年，2月20日，星期四准备工作第29页，共66页，2023年，2月20日，星期四

称量、材料预处理按配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、挖掉芽眼后称量200g，切成1cm见方的小块。琼脂剪碎后用水浸泡。第30页，共66页，2023年，2月20日，星期四熬煮将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中，煮至酥而不烂。第31页，共66页，2023年，2月20日，星期四过滤、加可溶药物用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中加入糖第32页，共66页，2023年，2月20日，星期四熬琼脂、定容在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止，定容至1000ml。第33页，共66页，2023年，2月20日，星期四母种培养基制作流程1.分装试管2.塞棉塞3.打捆4.灭菌5.摆斜面第34页，共66页，2023年，2月20日，星期四（1）、装管：18mm×180mm或20mm×200mm的玻璃试管，分装量掌握在试管长度的1/4-1/5，原则上是摆放成斜面后，斜面的长度为试管长度的1/2-2/3。（2）、灭菌：母种培养基灭菌时，需用1.05~1.1kg/cm2的压强，温度为121℃，灭菌（保持121℃）30min。（3）、斜面的摆置：趁热摆好斜面第35页，共66页，2023年，2月20日，星期四摆斜面灭菌结束后锅盖开1/5的小缝，用余热烘干报纸和棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2第36页，共66页，2023年，2月20日，星期四第37页，共66页，2023年，2月20日，星期四3、种菇的组织分离（1）种菇的选择：外观典型、大小适中、无任何污染、7--8成熟、第1~2茬的子实体。（2）接种箱与分离工具的消毒接种箱：科达气雾消毒粉2—3g或高锰酸钾5g，甲醛10ml混合气雾消毒30min.分离工具的消毒：用70--75﹪酒精擦拭后，再在酒精灯上反复灼烧。第38页，共66页，2023年，2月20日，星期四（3）种菇的解剖分离纵剖（撕）菇体

尖头镊取柄盖交界处绿豆粒大的组织

放入新斜面中部第39页，共66页，2023年，2月20日，星期四金针菇是横切菌盖上薄的菌肉或取未开伞的幼嫩子实体的菌褶片第40页，共66页，2023年，2月20日，星期四灵芝组织分离所取的部位是菌盖边缘的白色生长圈第41页，共66页，2023年，2月20日，星期四木耳等胶质菌类的菌肉薄，子实体经无菌水反复冲洗后，撕开子实体或用刀片将两层耳片切开，挑取一小块菌肉组织即可。第42页，共66页，2023年，2月20日，星期四（4）种菇分离后的观察培养

将分离好的试管放入23--25℃的温箱中培养，24—36h后开始萌发菌丝，2—3d后形成菌落，此时注意淘汰杂菌污染或菌丝生长希弱的试管，10d左右菌丝可长满试管，放入冰箱中储存。选择适宜的季节做出菇试验。第43页，共66页，2023年，2月20日，星期四4、母种的转管培养母种的接种必须在严格的无菌条件下进行。否则将会造成严重污染，给生产造成造成巨大损失。然后将所有试管及接种器具放入接种箱里进行消毒灭菌，力求灭菌彻底。在点燃酒精灯火焰上进行操作，将菌种试管和接种用斜面培养基放在火焰旁。拨去棉塞，把消毒灭菌的接种针伸入菌种试管内，挑小块菌种放入斜面培养基中，一支母种可移栽30—40支试管。原始母种可转管2—4代。第44页，共66页，2023年，2月20日，星期四图3-14斜面试管转管接种第45页，共66页，2023年，2月20日，星期四培养：将移接好的试管放入20--25℃的温箱中培养，同时注意反复观察，清杂去劣，经10d左右菌丝可长满试管。第46页，共66页，2023年，2月20日，星期四（二）原种的制作1、原种培养基配方与配制①木屑培养基：木屑78%，麸皮或谷粒20%，石膏1%，磷肥1%，水适量。适用于培养平菇、木耳、香菇、猴头。②棉子壳培养基：棉子壳78%，麸皮或谷粒20%，石膏1%，磷肥1%，水适量。水适量。适用于培养平菇、猴头、金针菇、鸡腿菇。第47页，共66页，2023年，2月20日，星期四③谷粒配方：稻谷98%，石膏粉2%④棉子壳谷粒配方：棉子壳50%，谷粒,49%，石膏粉1%第48页，共66页，2023年，2月20日，星期四培养料的配制

⑴木屑、棉籽壳培养料的拌料配制木屑、棉籽壳培养料按配方称量后，堆制混和，加水拌料，配方中的糖也可先溶于水中再拌入。拌料时要控制料的含水量在60﹪左右。第49页，共66页，2023年，2月20日，星期四⑵谷粒培养料的配制谷粒因其营养较丰富，制作的菌种具有菌丝萌发早、吃料快、抗衰老能力强、产量高等优点，在生产中应用较多。一般是采用浸泡法或煮熟法，也可用石灰水浸泡。注：煮熟至将开口为度第50页，共66页，2023年，2月20日，星期四2、装瓶

灭菌

将培养料拌匀装入菌种瓶（或袋）内、装料松紧适宜，上下一致，装料高度以齐瓶（袋）肩为宜。然后用手指在瓶的中央向下大一个小洞，以利接种定植，塞上棉塞。装好的料瓶（袋）要当天灭菌，以免培养料发霉变质。第51页，共66页，2023年，2月20日，星期四培养基的灭菌

通常采用高压蒸气灭菌法和常压蒸气灭菌法以达到灭菌的目的。高压灭菌2小时或常压灭菌于100℃维持8-10小时，灭菌后培养基最好放在适温下，空白培养5-7天，以检查培养基灭菌的效果。如在此期间没有出现任何杂菌，说明灭菌效果良好。待其冷却30℃以下可接种。也可高压灭菌（1.5—2h)第52页，共66页，2023年，2月20日，星期四3、原种的接种接原种用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中接种穴内，一支母种可4—6瓶原种。第53页，共66页，2023年，2月20日，星期四4、原种的培养培养室的大小和床架数量应根据生产规模来定。

注意：适温培养，对多数食用菌而言，可保持20~25℃，定期检查杂菌。时间25—40天。正常菌丝：洁白、粗壮。杂菌：有黄、绿、黑橘红等多种颜色，且生长速度快，稀疏无力。第54页，共66页，2023年，2月20日，星期四第55页，共66页，2023年，2月20日，星期四（三）、栽培种的制作基本上同原种，可参照执行。容器可用15cm30cm0.005cm聚丙烯朔料袋加套环替代。第56页，共66页，2023年，2月20日，星期四接栽培种用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上注意表面老菌丝及

老种块勿接入返回本节第57页，共66页，2023年，2月20日，星期四第58页，共66页，2023年，2月20日，星期四第59页，共66页，2023年，2月20日，星期四四、菌种的保藏（一）菌种的保藏的原理及设备1、菌种的保藏的原理：采用干燥、低温、隔氧等方法，尽可能地降低菌种的代谢活动，并保证原种的纯度。2、菌种的保藏的设备：普通冰箱或超低温冰箱、真空干燥器（机）第60页，共66页，2023年，2月20日，星期四特点简便

保藏时间短

易污染及退化

不适于草菇等菌类1.斜面低温法

斜面菌种置4~6℃冰箱中（3~4个月）返回本节（二）菌种常用的保藏方法第61页，共66页，2023年，2月20日，星期四返回本节第62页，共66页，2023年，2月20日，星期四2、矿油保藏法：将高温灭菌后的