饲料中总磷的测定

水产动物

营养与饲料饲料中总磷的测定一、适用范围：本方法适用于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料和单一饲料（磷酸盐除外）。二、方法原理将试样中的有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3，在波长420nm下进行比色测定。三、试剂：本标准中所用试剂，除为特殊说明外，均为分析纯。实验室用水为蒸馏水或同等纯度的水。盐酸：1+1水溶液硝酸钒钼酸铵显色剂磷标准液：将磷酸二氢钾在105℃干燥1h，在干燥器中冷却后称取0.2195g溶解于水，定量转入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用稀释至刻度，摇匀，即为50µg/ml的磷标准液。四、仪器设备1.

实验室用样品粉碎机或研钵2.分样筛：孔径0.45mm（40目）3.分析天平：感量0.0001g4.分光光度计：有10mm比色池，可在420nm测定吸光度5.高温炉：可控温度在550℃±20℃6.瓷坩埚：50ml7.容量瓶：50ml、100ml、1000ml8.刻度移液管：1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、10ml9.可调温电炉：1000W分析天平:感量0.0001g分光光度计:有10mm比色池，可在420nm测定吸光度高温炉:可控温度在550℃±20℃可调温电炉瓷坩埚:50ml容量瓶移液管试样制备：取有代表性试样，粉碎至0.44mm（40目），用四分法将试样缩分至200g装入密封容器，防止试样成分变化或变质。五、测定步骤（一）坩埚的洗涤、烘干、冷却干法：[不适用含Ca(H2PO4)2的饲料]：坩埚的洗涤干净、烘干（温度1050C）1小时，冷却至室温。（二）试样的称取、炭化、灰化1.称取风干样品：（1）天平预热（20分钟）、水平、灵敏度和零点的调。（2）称量空坩埚质量，准确至0.0002g。记录空坩埚质量（m0）。1.称取风干样品：（3）样品约重：粗天平称取2克左右风干样品。（4）将2g左右风干样品于坩埚内，称量称准至0.0002g。记录坩埚风干样品重（m1）。计算风干样品重（m）＝（坩埚风干样品重）－空称样皿重=m1-m0

2.样品的炭化（1）将带有样品的坩埚置于电炉上，盖打开少许。

（2）调整电炉的温度为低温，小火加热（白烟）至无烟（禁止高温，忌有黑烟，），待烟冒完后，然后升温灼烧至样品无烟，即为炭化完毕

3.样品的灰化：（1）坩埚微开盖将其放入高温电炉中（2）调整高温电炉的温度550℃。（3）灰化550℃左右，进行灰化3-4小时，直至呈灰白色，无碳粒。（4）切断电源，关闭高温电炉，待温度降到2000C以下，借助坩埚钳取出，空气中冷却1分钟，干燥器冷却30分钟。（三）试样分解液制备容量瓶和漏斗洗涤干净、编号。玻棒洗涤干净。在盛灰分的坩埚中加入10ml盐酸溶液（10ml刻度吸管移取）。加数滴浓硝酸，在电炉上小火煮沸。将此溶液借助漏斗无损转移到250ml容量瓶中，用蒸馏水冲洗坩埚几次，洗液转入容量瓶中，冷却到室温，用蒸馏水定容，摇匀即为样品分解液。（四）磷标准曲线绘制：准确移取磷酸标准液0ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml、15.0ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色剂10ml，用水稀释至刻度，摇匀。（四）磷标准曲线绘制常温下放置10min以上，以0ml溶液为参比，用10mm比色池，在420nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。（五）试样的测定：准确称取试样分解液1~10ml（含磷量50~750µg）于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10ml，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，以0ml溶液为参比，用10mm比色池，在420nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。用标准曲线查得试样分解液的含磷量（X值）。测定结果的计算：样品中总磷的含量（P%）按下式计算：

XV1P=——————×——×100％

m×106V2式中：X—由标准曲线查得试样分解液总磷含量（µg）m——试样的质量（g）V1——试样分解液定容的体积（ml）V2——测定时移取的试样分解液体积（ml）★重复性：试样取两个平行样其算术平均值为结果总磷含量低于0.5%，允许相对偏差不超过10%总磷含量大于或等于0.5%，允许相对偏差不超过3%相对偏差=│测定值-平均值│/平均值磷测定记录表样品名称鱼粉样品号12坩埚号坩埚重（克）坩埚+样品重（克）样品重（M，克）试样分解