体液蛋白质检验

生物化学检验技术体液蛋白质检验BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE2本章要点血浆蛋白的功能及分类主要血浆蛋白的测定及临床意义疾病时的血浆蛋白及急性时相反应蛋白重要血浆蛋白的测定方法常见相关疾病蛋白质水平的典型变化特征血浆蛋白质功能及分类第一节1血浆蛋白质功能及分类（一）血浆蛋白质的功能可概括为：①营养作用，修补组织蛋白；②维持血浆胶体渗透压；③作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、药物等的载体；④作为pH缓冲系统的一部分；⑤抑制组织蛋白酶；⑥一些酶在血浆中起催化作用；⑦代谢调控作用；⑧参与凝血与纤维蛋白溶解；⑨作为免疫球蛋白与补体等免疫分子，组成体液免疫防御系统。血浆蛋白质的功能和分类1血浆蛋白质功能及分类血浆蛋白质的功能和分类白蛋白（40－60％）α1-球蛋白（α1-抗胰蛋白酶、血清类粘蛋白、α1-酸性糖蛋白、甲胎蛋白）α2-球蛋白（α-脂蛋白、触珠蛋白、铜蓝蛋白、α2-巨球蛋白）β-球蛋白（转铁蛋白、血红素结合蛋白、β微球蛋白、纤维蛋白原、

β脂蛋白、补体）

γ-球蛋白（各种免疫球蛋白主要位置及C-反应蛋白）（二）血浆蛋白质的分类1.电泳法分类1血浆蛋白质功能及分类血浆蛋白质的功能和分类（二）血浆蛋白质的分类

2.功能法分类功能分类

功能特征

运输载体类血浆脂蛋白：包括CM、VLDL、LDL、HDL等前清蛋白与清蛋白甲状腺素结合球蛋白皮质素结合球蛋白类固醇激素结合球蛋白视黄醛结合蛋白转铁蛋白结合珠蛋白血色素结合蛋白铜蓝蛋白补体蛋白类包括C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4、C5、C6、

C7、C8、C9、B因子、D因子、备解素等凝血蛋白类除Ⅵ因子（Ca2+）外的13种凝血蛋白免疫球蛋白包括IgG、A、M、D、E

蛋白酶抑制物包括α1-抗胰蛋白酶、α1-抗糜蛋白酶、

α2-巨球蛋白等6种以上血清酶类血浆固有酶如LCAT等组织细胞少量释放的细胞内酶由于细胞破裂而进入血循环的细胞内酶蛋白类激素胰岛素、胰高血糖素、生长激素等运载、营养等运输胆固醇、甘油三酯、磷脂及脂肪酸运输游离脂肪酸、某些激素、胆红素、多种药物等特异高亲和力结合甲状腺激素特异高亲和力结合皮质醇特异高亲和力结合类固醇激素结合视黄醛运输铁结合血红蛋白结合血红素结合铜参与机体的防御效应和自身稳定血液凝固作用排除外来抗原抑制蛋白酶作用在血浆中具有重要的调节代谢作用在血浆中无生理作用在血浆中无生理作用多种代谢调节作用

个别血浆蛋白质第二节2个别血浆蛋白质（一）前血蛋白（pueallumunPA）分子量5.4万，由肝细胞合成，电脉时移速较白蛋白快，位于其前方面得名，半寿期短12h，PA是一类运载蛋白，一种能与甲状腺素结合，称为甲状腺结合蛋白，一种能与VitA结合，称为VitA结合蛋白，常用测定方法是免疫化学方法，

【参考范围】0.2～0.4g/L,

【临床意义】急性炎症，恶性肿瘤，肝硬化或肾炎时下降。2个别血浆蛋白质

（二）白蛋白（allumim,ALb）分子量66458，由肝实质细胞合成，半寿期15～19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占40％～60％，主要功能，维持血浆胶体渗透性，缓冲作用，运输作用，营养作用，调节某些激素或药物活性。白蛋白可微量地通过肾小球，约0.04％，但大部分被血小管重吸收。白蛋白的测定方法目前主要是溴甲酚绿（BCG）法。2个别血浆蛋白质

【参考范围】35～55g/L【临床意义】血浆白蛋白增高临床少见，主要见于严重失水引起血液浓缩。血浆白蛋白降低临床常见。①合成障碍急、慢性肝炎。②丢失过多，肾病综合症、慢性肾小球、肾炎、糖尿病、系统性斑狼疮等。③分解过多，营养不良，慢性胃肠道疾病。2个别血浆蛋白质

（三）α1-抗胰蛋白酶（α1AT或AAT），分子量5.5万，pI4.8，含糖10％～12％，电泳时位于α1区带，占90％左右，由肝细胞合成，能抑制多种酶活性，尤其是蛋白酶，占血清中抑制蛋白酶活力的90％左右，抑制作用有明显的pH依赖性，在中性和弱碱性中活力最大。

AAT也是一种急性时相反应蛋白，主要功能是对抗多形核蛋白细胞吞噬作用时释放的溶酶体蛋白水解酶。2个别血浆蛋白质

AAT测定方法目前主要采用免疫化学法。

【参考范围】成人0.83～2.0g/L，

【临床意义】AAT下降见于胎儿呼吸窘迫症，AAT缺陷所致的肺气肿、肝硬化等。AAT上升见于急性炎症、外科手术后，长期服用可的松药物，妊娠及服用避孕药物。2个别血浆蛋白质

（四）α1-酸性糖蛋白（α-AG或AAG）分子量约4万，含糖约45％，pI2.7～3.5，主要由肝细胞合成，某些肿瘤组织也可合成。AAG是主要的急性相反应蛋白，急性炎症时上升，与免疫防御功能有关。

AAG测定方法使用AAG抗体，进行免疫散法或免疫比浊法检测，

【参考范围】0.25～2.0g/L

【临床意义】主要作为急必时相反应的指标，风湿病、恶性肿瘤、心肌梗塞患者上升，营养不良、严重肝病下降。2个别血浆蛋白质

（五）甲胎蛋白（AFP）分子量6.5～7万，pI4.75，含糖量4％，主要在胎儿肝合成，妊娠13～15周血清AFP含量最高，以后逐渐下降，出生时仅为高峰期的1％，周岁时接近成人水平，仅10～30μg/L，功能不详。

AFP测定方法火箭电泳放射自显影；放射免疫法（RIA）；酶联免疫吸附法（ELISA）灵敏度接近放免，且操作简便，无放射污染，便于推广。2个别血浆蛋白质

【参考范围】10～30μg/L【临床意义】AFP作为肿瘤标志物，对原发性肝癌的诊断很有价值，80％以上原发性肝癌患者血清AFP上升，但无特异性，肺癌、胰腺癌，肝硬化患者血清AFP亦升高，此外，羊水AFP含量测定可用于胎儿产前监测，AFP增高，提示胎儿畸形（神经管缺损、脊柱裂、无脑儿）死胎。2个别血浆蛋白质

（六）结合球蛋白（Hp）又名触珠蛋白，是一种糖蛋白，主要由肝合成，电泳时位于α2区带，是一种急性时相反应蛋白，为两对肽链组成的四聚体（α2β2）。α链有α1和α2两种，其中α1有两种遗传变异体。

Hp的主要功能与血浆中游离血红蛋白结合，（不可逆结合），并送至肝细胞内降解，因此Hp在溶血后含量急剧下降。2个别血浆蛋白质

血浆Hp测定方法①测定Hp-Hb复合物中过氧化物酶活性。②在血浆中加入过量Hb，生成Hp-Hb复合物，凝胶层折法收复合物分离，测定结合的Hb。③电泳法。④免疫化学法。

【参考范围】0.5～2.2g/L

【临床意义】急性时相反应中血浆Hp上升，烧伤、肾病综合征引起Alb丢失时Hp上升，血管内溶血Hp下降。2个别血浆蛋白质

（七）α2-巨球蛋白（α2MG或AMG）是血浆中分子量最大的蛋白质，分子量为62.5～80万，含糖量8％。AMG由肝细胞与单核吞噬细胞系统合成，半寿期5天。

AMG最突出的特性能与多种分子和离子结合，特别是它能与不少蛋白水解酶结合而影响这些酶的活性，有选择地保护某些蛋白酶活性的作用。

AMG测定方法免疫化学法，

【参考范围】1.25～4.10g/L

【临床意义】在低蛋白血症，AMG上升，妊娠、服用避孕药时AMG上升。2个别血浆蛋白质

（八）铜蓝蛋白（CER）含铜的糖蛋白，分子量约12～16万，含糖量约10％，因含铜而呈蓝色，故名铜蓝蛋白。主要由肝脏合成。

CER具有氧化酶活性，使血液中Fe2+氧化成Fe3+，故又称亚铁氧化酶。CER还起着抗氧化剂的作用。防止组织中脂质过氧化物和自由基的生成。

CER测定方法免疫化学法或酶活性测定。

【参考范围】0.2～0.5g/L。

【临床意义】CER属于急性时相反应蛋白。在感染、创伤和肿瘤时上升，Wilson病（肝豆状核变性）CER下降。2个别血浆蛋白质

（九）转铁蛋白（TRF）血浆中主要含铁蛋白质，分子量7.7万，含糖约6％，由肝及网状皮系统合成，半寿期7天。主要运载由消化道吸收的铁和RBC降解释放的铁，此外还可逆地结合多价金属离子，如Ca、Zn、Cu等。

TRF测定方法放免法、散射比浊法。

【参考范围】2.5～4.3g/L。

【临床意义】TRF在急性时反应中下降，如炎症、恶性病变时、TRF、Alb、PA同时下降，慢性肝现营养不良亦下降，妊娠、口服避孕药，注射雌激素TRF上升。2个别血浆蛋白质

（十）β2-微球蛋白（BMG）由淋巴细胞合成，分子量11800，pI5.7，存在于所有有核细胞的表面，特别是淋巴细胞和肿瘤细胞并由此释放入血，半寿期107min。

BMG测定方法常用放免法，ELISA法。

【参考范围】1.0～2.5mg/L。

【临床意义】主要用于监测肾小管功能，特别是肾移植后，如有排异反应，BMG在尿中排出量上升，肾功能衰竭，炎症、肿瘤血浆BMG上升。2个别血浆蛋白质

（十一）C-反应蛋白（CRP）是一种能结合肺炎双球菌细胞壁C-多糖的蛋白质，分子量11.5～14万，五条肽链组成，肝细胞合成。CRP能激活补体，促进粒细胞、巨噬细胞的运动和吞噬，具有调理素样作用。

CRP测定方法免疫扩散法，火箭免疫电泳法，ELISA法，放免法，

【参考范围】＜8.0mg/L。

【临床意义】作为急性时相反应的一个极灵敏指标，急性心肌梗死，创伤、感染、炎症、外科手术、肿瘤浸润迅速上升。2个别血浆蛋白质

纤维蛋白原4.0%

α2-巨球2.93%

触珠蛋白2.2%

铜兰蛋白0.53%

α1抗胰蛋白酶1.99%

α1酸性糖蛋白2.0%前白蛋白0.45%

转铁蛋白4.3%白蛋白55%

其他26.59%疾病时的血浆蛋白质第三节3疾病时的血浆蛋白质细胞遭到破坏合成减低异常表达1、炎症、创伤:

在急性炎症或某些组织损伤时,有些血浆蛋白质含量会增高,有些会降低,这些血浆蛋白质并被称为急性时相反应蛋白(acutephasereactants,APR)。包括：1－抗胰蛋白酶、1－酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜兰蛋白、C3、C4、C－反应蛋白、纤维蛋白原、前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白等。3疾病时的血浆蛋白质

2、肝脏疾病血浆蛋白质大多数由肝脏合成，因此肝脏疾病可导致多种血浆蛋白质发生变化。如乙肝活动期AAT↑，Hp、PA、Alb↓，特别是血浆PA的含量是肝功能损伤的敏感指标。肝硬化时AAT、IgA、AMG↑↑，CER、CRP↑，而AAG、Hp、C3↓，PA、Alb、TRF↓↓。3疾病时的血浆蛋白质3、肾脏疾病肾脏疾病可出现蛋白尿而导致血浆蛋白质丢失，丢失的蛋白质与其分子量有关。小分子量蛋白质丢失最明显，而大分子量的蛋白质因肝细胞代偿性地合成增加，绝对含量升高。所以血浆Alb、PA、AAG、AAT、TRF↓，而AMG、β-LP、Hp↑，这称为选择性蛋白质丢失。当严重肾病是肾小球失去分子筛作用，可导致非选择性蛋白质丢失，表现为广泛地低血浆蛋白质血症。3疾病时的血浆蛋白质4、风湿病：免疫球蛋白IgA、IgG、IgM升高等。5、遗传性缺陷：某些蛋白质发生变异或量缺乏。血浆蛋白质的临床检测第四节4血浆蛋白质的临床检测生理因素生活习性药物影响一、患者的准备4血浆蛋白质的临床检测情绪1、生理影响因素：年龄性别种族妊娠4血浆蛋白质的临床检测2、生活习性影响因素：饮食饥饿运动吸烟饮酒饮茶、咖啡蛋白、脂类、糖、K↑蛋白、脂类、糖↓AST、ALT、GGT↑激素↑，IgG

↓Glu↑CK、K、Na、Ca、ALP、糖、白蛋白↑4血浆蛋白质的临床检测所有药物都会对病人的某些检验项目的结果产生或大或小的影响，它是通过以下途径发生的：

(1)药理作用：

首先是对生理病理过程产生影响。其次是药物的毒副作用

2）对测定方法产生影响：

有些影响是物理性有的药物参与化学反应3、药物的影响：4血浆蛋白质的临床检测二、标本采集标本采集原则：l采样时间的控制2采取具代表性的标本3采取最合乎要求的标本4唯一性标志5采样量4血浆蛋白质的临床检测抗凝剂防腐剂标本的分离储存和转运三、样本处理4血浆蛋白质的临床检测医生填写检验申请单静脉采血、标本留取传送标本至检验科样品编号按检验项目要求处理标本自动生化开机前检查质控操作下达常规操作指令常规标本实施急诊登记及操作结果查询及传输关机医院检验科常规检验项目工作流程：4血浆蛋白质的临床检测四、体液蛋白质检测

生化检验中测定蛋白质的方法很多，主要利用蛋白质的分子组成，结构或性质进行。一、血清总蛋白测定及评价

（一）凯氏定氮法：是测定蛋白质的经典方法，1883年Kjeldahl首创，精密度准确度高，但操作复杂、费时、技术性强，不适合临床常规检测，一般用于标准血清的标定和校正。4血浆蛋白质的临床检测（二）双缩脲法

【原理】蛋白质分子中的肽链在碱性条件下能与二价铜离子作用生成紫红色的络合物，产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质的含量成正比，但双缩脲反应并非蛋白质特有的颜色反应，分子中含二个以上肽键者均有此反应。4血浆蛋白质的临床检测

【试剂】双缩脲试剂未失结晶水的硫酸铜（CuSO4·5H2O）3.0g溶于500ml新鲜制备的蒸馏水或刚煮沸冷却的去离子水中，加酒石酸钾钠（NaKC4O4H6·4H2O）9.0g，碘化钾5.0g，待完全溶解后加入6mol/LNaOH溶液100ml，最后加蒸馏水至1L，置聚乙烯瓶内盖紧保存。酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，维持铜离子在碱性溶液中的溶解度，碘化钾防止两价铜离子还原。

【参考范围】60～80g/L4血浆蛋白质的临床检测【临床意义】

（一）血清总蛋白增高

1.血液浓缩严重腹泻、呕吐、高烧

2.合成增加主要见于球蛋白合成增加，多发性骨髓瘤。（二）血清总蛋白降低

1.血液稀释静脉滴注过多低渗溶液，各种原因所引起的水钠潴留。

2.摄入不足和消耗增加营养不良，慢性胃肠道疾病引起的消化吸收不良，消耗性疾病，结核病、甲亢、恶性肿瘤。

3.合成障碍主要见于肝脏疾患。

4.蛋白质丢失严重烧伤，大量血浆渗出，肾病综合症。4血浆蛋白质的临床检测二、血清白蛋白测定及评价（溴甲酚绿法）

【原理】溴甲酚绿（BCG）在pH4.2的环境中，在有非离子去垢剂（Brij-35）存在时，可与清蛋白结合形成蓝绿色复合物，颜色的深浅在一不定范围内与清蛋白含量成正比。

BCG与清蛋白结合的特异性较低，它不仅与Alb结合呈色，还可与其他蛋白质呈色，其中α1-球蛋白，TRF、Hp最明显，但反应速度不同，Alb可立即反应（快反应），其他蛋白质反应慢（慢反应）。4血浆蛋白质的临床检测【试剂】1.10mmol/LBCG贮存液

BCG1.75g，溶于5ml1mol/LNaoH溶液中，加蒸馏水至250ml。

2.0.5mol/L琥珀酸缓冲贮存液（pH4.0）NaoH10g，琥珀酸56g，溶解于800ml蒸馏水中，用1mol/LNaoH溶液调pH至4.10±0.05加蒸馏水至1L。

3.叠氮钠贮存液叠氮钠40g溶于1000ml蒸馏水中。

4.Brij-35溶液

Brij-3529g，加蒸馏水80ml，置80ml左右水溶使其溶解，然后加水至100ml。4血浆蛋白质的临床检测5.BCG试剂于IL容量瓶内加蒸馏水400ml，琥珀酸缓冲贮存液100ml，BCG贮存液8ml，叠氮钠贮存液2.5ml，Brij