综合技能训练临床常见标本的微生物检验

微生物检验技术

----临床常见标本的微生物检验血液标本的细菌学检验（掌握）1脓液标本的细菌学检验（掌握）2痰液标本的细菌学检验（掌握）3尿液标本的细菌学检验（掌握）4粪便标本的细菌学检验（掌握）5学习目录血液标本的细菌学检验（掌握）11-1种类病原菌G+球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、草绿色链球菌、肠球菌G+杆菌结核分枝杆菌、产单核李斯特菌G-球菌脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌G-杆菌大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、克雷伯杆菌、肠杆菌、变形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜血杆菌真菌念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌厌氧菌拟杆菌、产气荚膜梭菌目的:检出相应病原体，为临床提供病原学诊断依据。血液标本的细菌学检测（掌握）血液标本中常见的病原菌：1-2血液标本的标本采集与运送（掌握）采血部位：通常为肘静脉。采集方法：静脉采血，以无菌操作方法抽取血液后，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。采血量：采血量一般以增菌培养液体积的1/10为宜。标本的采集1-2血液标本的标本采集与运送（掌握）采血时间：采集血液标本培养应尽量在使用抗菌药物之前进行，用药前1小时内采集2~3次血液标本，可使细菌检出率高达99%，同一份血液标本，必须同时做需氧和厌氧培养。标本运送与保存：a.即送b.室温

1-3血液标本的检验程序（掌握）1-4血液标本的结果报告（掌握）1、血液培养瓶疑有细菌生长者，涂片染色镜检，电话告知医师。同时做直接药物敏感性试验，将敏感的抗生素初次报告给临床医师。2、分离培养得到的菌落，立即进行微生物学鉴定及标准化的药物敏感性试验。3、培养7天仍为阴性的标本，应进行2次以上盲种。1-5血液标本的注意事项（掌握）采集血液标本注入血培养瓶后立即送检。临床诊断为特殊要求的标本,可持续培养至2周或更长时间，方可发阴性报告。如果血液培养物中有细菌生长而难以判定为病原体时，须先排除技术误差。采集血液标本的部位和血液培养的次数。疑似败血症而普通血培养多次阴性者的情况。思考练习1.制备培养脑膜炎奈瑟菌的培养基时，应加入（）A10％小牛血清B80℃加热后的血液C5％新鲜血液D胆盐E煌绿2.对于血培养瓶，如无细菌生长痕迹，应在几天内发出报告A7天B5天C8天D9天E6天3.关于血培养的运送和处理．下列哪一点是错误的（）A血培养抽取后，立即送到微生物实验室B如不能立即送往实验室，置4℃冰箱冷藏C如不能立即送往实验室，置35～37℃孵箱中D如暂不能立即送往实验室，可放室温保存E实验室接受到培养瓶，应立即置35～37℃孵箱或血培养仪中脓液标本的细菌学检验（掌握）22-1脓液标本的微生物检验（掌握）

类别

菌种革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌、肠球菌、消化链球菌、炭疽芽胞杆菌、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、溃疡棒状杆菌、结核分枝杆菌革兰阴性菌大肠埃希菌、铜绿假单胸菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌，流感嗜血杆菌、拟杆菌、梭杆菌其他病原体放线菌、诺卡菌、白假丝酵母菌脓液及创伤分泌物中常见的病原体目的:对脓液及创伤感染分泌物进行细菌培养，目的是进行病原体的诊断，同时指导临床合理用药。2-2脓液标本的标本采集与运送（掌握）

脓液及创伤分泌物的标本采集类型

1、开放性脓肿

2、闭锁性脓肿

3、大面积烧伤的创面分泌物2-2脓液标本的标本采集与运送（掌握）

脓液及创伤分泌物的标本运送：

取材后立即送检，结核杆菌和真菌培养时不能及时送检，4℃保存，但奈瑟菌属除外。2-3脓液标本的检验程序（掌握）2-4脓液标本的结果报告（掌握）1、初步报告：涂片染色，电话告知临床医生。同时做药敏试验，结果告知医生，报告“找到革兰X性X菌，形似X菌”。2、最后报告：微生物鉴定及标准化药敏试验后。报告格式：“检出XX菌生长”并报告药敏结果。

3、阴性“培养48小时无菌生长”。厌氧培养3~5天报告“厌氧培养X天无菌生长”。2-5脓液标本的注意事项（掌握）对于不能立即送检的标本，应放4℃保存。尽可能在用药前采集标本。革兰染色对标本进行评估。有的创伤均可有细菌污染，但不一定发生感染。思考练习1.疑似”淋病”病人的脓性分泌物标本，必须（）A冷藏，迅速送检B保暖保湿，迅速送检C放50％甘油盐水中保存送检D立即接种于普通琼脂平板E以上都不是2.某一脓标本，涂片革兰染色镜检：革兰阳性球菌，直径lμm左右，呈单个、成对或短链排列；血琼脂平板分离培养：菌落表面光滑湿润，圆形，边缘整齐。黄色，凸起，直径1—1.5mm，菌落周围有完全透明的溶血环；菌落涂片革兰染色镜检：革兰阳性球菌，呈单个、双、短链和葡萄串状排列，以葡萄串状排列为主；生化试验：触酶阳性，血浆凝固酶(试管法)阳性，发酵葡萄糖产酸，发酵甘露醇产酸，对新生霉素敏感。应报告A表皮葡萄球菌生长B金黄色葡萄球菌生长C腐生葡萄球菌生长D中间型葡萄球菌生长E家畜葡萄球菌生长痰液标本的细菌学检验（掌握）33-1痰液标本的微生物检验（掌握）痰液标本中常见病原体

类别

菌种革兰阳性菌肺炎链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌、厌氧链球菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌革兰阴性菌卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、百日咳杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿很单胞菌.嗜肺军团菌其他病原体白假丝酵母菌、新型隐球菌、丝状真菌、放线菌、诺卡菌、肺炎支原体、奋森螺旋体目的:对痰液进行细菌培养，目的是进行病原体的诊断,同时指导临床合理用药。3-2

痰液标本的标本采集与运送（掌握）痰液标本的采集晨痰最好自然咳痰法——最常用支气管镜采集法胃内采痰法小儿取痰法气管穿刺法3-2

痰液标本的标本采集与运送（掌握）痰液标本的运送立即送检检验科微生物室，非正常上班时间送检验科急诊化验室。标本运送过程中必须保证其安全，防止溢出，避免细菌污染。3-3痰液标本的检验程序（掌握）不合格合格3-4痰液标本的结果判断（掌握）1、涂片革兰染色检查如见到革兰阳性球菌、根据形态报告“找到革兰阳性球菌,形似××菌”。2、若见到抗酸阳性杆菌,可报告“找到抗酸杆菌”。3、若查见中央部分菌丝为革兰阳性,而四周放射的末梢菌丝为革兰阴性,抗酸染色为非结核性者,可报告“找到疑似放线菌”。4、分离培养检出致病菌时,除报告该菌外,同时报告正常菌群情况。5、未检出致病菌,报告“正常菌群”。痰涂片的抗酸染色3-5痰液标本的注意事项（掌握）采集标本以清晨为佳，以减少口腔正常菌群的污染，采集前充分漱口。作结核分枝杆菌检查，痰量要多或留取24小时痰液，以提高阳性检出率。思考练习1．肺结核病人痰涂片常用的染色方法是（）AGram’s染色法B美兰染色法C镀银染色法D齐—尼染色法E墨汁染色法2.为提高医院内获得性肺炎痰培养的阳性率，应在培养前做痰的哪项检查（）

A显微镜检查B痰的液化

C痰的稀释D将痰在等渗灭菌的生理盐水中混匀

E培养基的选择尿液标本的细菌学检验（掌握）44-1

尿液标本的微生物检验（掌握）尿液标本中常见病原体

类别

菌种革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、A群链球菌、肠球菌、结核分枝杆菌革兰阴性菌淋病奈瑟菌、大肠埃希菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、铜绿假单胞菌、沙雷菌其他病原体白假丝酵母菌、钩端螺旋体、梅毒螺旋体、衣原体、支原体目的:对尿液进行细菌学检验，目的是进行病原体的诊断，同时指导临床合理用药。4-2

尿液标本的标本采集与运送（掌握）

尿液标本的采集无菌试管或无菌尿液标本留取容器①清洁中段尿采集法：晨尿10～20ml，最常用，易污染。②直接导尿采集法、膀胱穿刺法及留置导尿管24小时尿收集法等。是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法。主要用于厌氧菌培养。4-2

尿液标本的标本采集与运送（掌握）

尿液标本的运送用无菌容器盛标本，标本应立即送检，及时接种。若不能立即接种可将标本置于4～8℃的冰箱内保存，但不得超过8小时。尿液中不得加入防腐剂或消毒剂。4-3尿液标本的检验程序（掌握）4-4尿液标本的结果判断（掌握）1、尿沉淀涂片镜检时,普通细菌根据形态及染色性，报告“找到革兰×性××细菌”。2、尿液细菌计数:革兰阳性球菌大于104CFU/ml，革兰阴性杆菌大于105CFU/ml有诊断意义。3、培养48小时仍无细菌生长，报告“48小时培养无细菌生长”。

4-5尿液标本的注意事项（掌握）尿定量培养法进行细菌计数时，采用连续划线的方法分离细菌。注意尿液细菌计数的影响因素。对不同类型的临床标本，选择正确的培养基进行细菌的分离培养，注意分区划线的操作技术。M-H平板培养基和抗菌药物敏感性纸片相关制作使用要求。严格无菌操作，注意生物安全。4-6不合格尿标本（掌握）同一种标本培养出4种以上的细菌，应认为收集或处理标本不当被污染；送检容器不合格；送检时间超过2小时。思考练习1.下列尿培养结果，哪项对诊断尿道感染有意义（）A每毫升尿含大肠埃希菌量为10000B每毫升尿含大肠埃希菌量为100000以上C每毫升尿含大肠埃希菌量为1000以上D每毫升尿含大肠埃希菌量为5000以上E尿液培养无菌生长2.常用下列哪种方法采集尿标本作细菌培养（）A清洁头段尿B清洁中段尿C留24小时尿D导尿E膀胱穿刺粪便标本的细菌学检验（掌握）55-1粪便标本的微生物检验（掌握）粪便标本中常见病原体

类别

菌种革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、厌氧链球菌、结核分枝杆菌、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌、艰难芽胞梭菌革兰阴性菌伤寒及其他沙门菌、致病性大肠埃希菌、志贺菌属细菌、弧菌属细菌、弯曲菌属细菌、小肠结肠炎耶耳森菌、气单胞菌属细菌、类志贺邻单胞菌其他病原体白假丝酶母菌、轮状病毒、埃可病毒目的:

对粪便进行细菌学检验，可以为临床诊断和治疗疾病提供参考依据。5-2粪便标本的采集与运送（掌握）粪便标本的采集自然排便法：采标本时取有脓血、粘液、组织碎片的粪便液体粪便则取絮状物。直肠拭子法：一般用于排便困难的患者或儿童。5-2粪便标本的采集与运送（掌握）粪便标本的运送粪便标本应立即送检，运送过程安全，防溢出及污染，温室条件下不能超2小时。5-3粪便标本的检验程序（掌握）5-4粪便标本的结果判断（掌握）1、涂片镜检时发现阳性结果,应立即初步报告临床。2、分离培养后，立即进行微生物学鉴定及标准化的药物敏感性试验,最后报告“检出××细菌”，并报告药物敏感性试验结果。3、阴性，“未检出××菌”。5-5粪便标本的注意事项（掌握）粪便标本一般分离可疑致病菌应使用选