Shimadzu液相色谱基础

液相色谱基础

1色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。2岛津高效液相色谱仪LC-10Avp系列3高效液相色谱分析过程

高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成。

分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。4色谱分离过程Temporalcourse流动相5高效液相色谱原理

色谱法：利用样品组分在两相间分配系数

不同而进行分离的技术流动相：携带样品流过整个系统的液体固定相：静止不动的一相，化学键合型固 定相

6高效液相色谱法的特点高效液相色谱法法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)。HPLC有以下特点：高压-压力可达15~30MPa。高速-流速为0.001~10.000ml/min。高效。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。荧光和电化学检测器可达0.1pg。7高效液相色谱法的分类

按分离机制不同分为液固色谱法键合相液相色谱法

正相色谱法反相色谱法离子交换色谱法离子对色谱法体积排阻色谱法8液相维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器检测器色谱柱9

流动相流动相选择注意事项：纯度：采用“HPLC”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配10溶剂前处理过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。脱气目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：

1）柱流量不准

2）检测器基线波动脱气注意点：

1）每天脱气(无在线脱气器时）

2）混合溶剂脱气时间不能过长11工作原理在线脱气机12何时需要使用在线脱气机13输液泵送液方式：恒流控制恒压控制VP系列：LC-10ADvp泵和LC-10ATvp泵Prominence：LC-20AD、LC-20AT、LC-20AB泵

D泵：并联微体积往复式泵

T泵：串联式往复泵

B泵：并联微体积往复式泵（2组）14等度洗脱和梯度洗脱等度洗脱梯度洗脱15梯度洽洗脱梯度脏洗脱就是筛在分筝离过牵程中多使两连种或著两种蕉以上甘不同水极性椅的溶蓝剂按壳一定评程序客连续浅改变使它们衔之间陡的比送例，蹈从而抖使流赶动相笨的强出度、喉极性忙、pH值或支离子膝强度精相应万地变雄化，冻达到元提高承分离坊效果帜，缩威短分赢析时趟间的怀目的益。优点细：可详提高蜓分离腥度、漫缩短姐分析昌时间疑、降杜低最监小检野测量爆和提怪高分捎离精甜度注意浇事项舌：溶剂沾的纯吼度要筝高，消否则弱梯度体洗脱皆的重素现性上差16高压叹梯度郊泵系陵统17四元鼠低压裤梯度越泵系凤统18进样土器自动昨进样漠器SI妖L-耀10症HT止SI爪L-抄10里A轻S挂IL挪-2起0A恢/C手动观进样绸器Rh主eo喊dy适ne77学25祸/7谁72蓄5i原理离：（木六通栗阀）注入冲方式句：1）全湿量注裕入2）部广分注鞠入19手动甘进样快器使谈用须枯知全量迁进样教：进忽样体扶积至门少为赶定量杏环的3倍以填上。半量罢进样应：进邮样量足应不做大于挑定量规环体犯积的50珠%。一定磁要使恭用合装规格蹦的进怠样器老，规偶格为馅外径逝0.挣02夹8英府寸，四长2害英寸加的平姓头针赴。一定拾不能贿使用息尖针常！它拖会严容重刮删坏转荒子垫紧圈。20装填货状态样品津注入六通举阀21柱温辆箱柱温炒控制诵的优谱点：分析辫结果为重现释性好提高抛柱效降低足柱压保证油检测哪稳定齐性22低价芦格，滩小体匆积可安策装手铲动进唉样器温度毯范围室温-1女5º初C∽付80该ºC室温缝传感蛮器保证船分析奖在可称靠的迷温度告范围被内进男行可单戏独进疫行操监作容量流大，份可容淋纳2个切幸换阀畜，手桐动进离样器混合趁室，VP副控促制器CD霞D/同L-剪EC害D检测湖池温度御范围室温+1搁0º沫C∽口8涛0º聪C（Av说p)室温-1电0º宅C∽遭8诱0º叔C（AC贼vp)室温萝传感最器保证捷分析跳在可肉靠的浆温度已范围亚内进项行可单遣独进低行操追作CT娘O-谅10翠AS脾vp(半导玻体模视块加染热式太）CT寨O-胀10舰A(C逗)vp(空气乒循环喉式）CT吓O-慰10横A系列23色谱逢柱反相信色谱很柱：C1灯8、C8、氰眠基、循氨基怕、苯咽基正相永色谱侨柱：桨硅胶陶、氰以基、松氨基离子拘交换屿色谱没柱：SC京X、SA部X凝胶棕色谱芹柱：顷凝胶手性涉色谱亿柱：肠牛血敲清蛋拿白、AG欺P、环惰糊精逗等24检测居器SP缓D-伞10域Av小p(喝19键0—胶60长0n亩m)紫外会检测蓬器SP狭D-连10倒AV毫vp贪(1知90陕-9碰00溜nm屑)紫外员检测木器SP需D-示M1娱0A屑vp近(1宇90洲—8尿00历nm粪)二极骑管阵急列检台测器RF佩-1昼0A坊XL荧光叮检测滋器RI斜D-巴10丘A示差林折光摔检测吸器CD语D-心10朴Av梁p电导罚检测拿器L-活EC栽D-酬6A电化壤学检摄测器EL勒SD蒸发唯光散慢射检桨测器25紫外在可见称光检扫测器EinEou忧tA=eCl=鞋-芳lo未g债(Eou写t/Ein)比尔碧定律检测卵池C谦:浓度l优点徐：1）灵枣敏度府高2）对摔温度尖和流榨速不要敏感3）可搏用于庸梯度键洗脱缺点当：仅乱适用币于测镜定有奖紫外饥吸收脖的物钥质原理捏：26岛津VP系列紫外千检测密器功昨能设定舒时间梦程序丛（切苗换检妙测波泛长等其）双波长商检测比例涨色谱球，初晴步判兆断峰支的纯播度停泵屑扫描舅，确壳定组蛙分最寒大吸马收波津长27时间还程序28双波导长检挪测水溶课维生全素的食双波层长检缩慧测29比例晨色谱30停机异扫描31二极剧管阵谅列检漏测器色谱健图光谱扬图吸光虎度波长时间32荧光栋检测止器优点黎：1）灵拉敏度恢极高馆，是深最灵钟敏的录检测巾器之顿一2）选班择性循好3）对喇温度皮和流纽奉速不拥敏感两，可做用于次梯度摊洗脱缺点身：仅砖适用卵于测碑定可阁产生骆荧光幅的物诉质可检骑测物钥质：劣多环梳芳烃私、霉炭菌毒振素、丑酪氨犬酸、颠色氨私酸、谨卟啉燥、儿议茶酚骂氨等燥（具展有对展称共透轭体番系）33示差盼折光乒检测疼器原理灭：连格续测数定流陪通池苹中溶辛液折矛射率珠来测炭定试巾样中团各组钥分浓蚕度。优点每：通听用型狱检测井器缺点雷：1）对犬温度狮变化胖敏感2）对暑溶剂凤组成佩变化酸敏感坐，不汁能用烈于梯匀度检哑测3）属娃于中赴等灵下敏度镜的检灰测器34电导博检测续器原理径：根肿据物巷质在另某些败介质弱中电煌离后谣所产斯生的维电导维变化晨来测萄定电骨离物阀质含络量。优点臭：对蹲流动蠢相流佛速和超压力替的改找变不扮敏感看，可叛用于半梯度诞洗脱缺点恶：对啄温度滑变化米敏感驶（每艘升高1度，理电导惜率增魂加2%撞-2卫.5鄙%)广泛五应用盟于离毒子色栋谱。卫主要样用于稀检测冬水溶区性无叹机和范有机姻离子35电化属学检爱测器原理摆：测柔量电义活性头分子松在工上作电季极表灭面氧跳化或哲还原召反应议时所鼠产生竖电流肺变化雾的检丢测优点方：1）灵纤敏度约高2）选脊择性价好，蜡只检显测电选活性巨物质缺点表：1）不猎适用铜于梯识度洗走脱2）对渣温度首、压探力变狐化敏筝感36蒸发端光散夏射检叠测器原理猪：柱遣流出饰物雾千化僚流疤动相掩蒸发宵溶质赵粒子丙散射凭光强协度检测优点皆：1、适头用于际没有当特征玩紫外讲吸收决或紫蔑外吸镜收很暮弱的狱待测伴物2、可矛以应慢用有率强紫沟外吸亭收的漠试剂驰，如腊氯仿默、丙案酮等3、适遣用于征梯度嫂洗脱4、通痕用型辽检测梦器，扔只要旷待测寸物挥亏发性演低于圆溶剂矛，即偷可适钞用5、对碎环境见影响烫不灵症敏，蓬室温分下即掉可操田作6、没扰有溶捧剂前关缘峰疤，适贴用于但保留叫时间穴短的掀物质最的检任测缺点扁：1、如彼果流么动相趁不能宋挥发墓（如射含有杨钠盐慰、钾灾盐等)，不筹适用2、对万有紫倘外特代征吸鼓收的屯物质种，检先测灵炼敏度帅不如愉紫