基因重组杂交育种

基因重组杂交育种第一页，共三十五页，编辑于2023年，星期五基因重组

凡把两个不同性状个体内的遗传基因转移在一起重新组合，形成新遗传型个体的方式，称基因重组

第二页，共三十五页，编辑于2023年，星期五一、原核微生物的基因重组（一）转化（Transformation)（二）转导(Transduction)（三）接合(Conjugation)（四）原生质体融合第三页，共三十五页，编辑于2023年，星期五（一）转化（Transformation)1、定义：受体菌直接吸收供体菌的DNA片段而获得后者部分遗传性状的现象，称为转化或转化作用。第四页，共三十五页，编辑于2023年，星期五2、转化过程以革兰氏阳性的肺炎双球菌为材料，转化过程大体是：A、双链DNA片段与感受态受体菌的细胞表面特定位点结合。B、在位点上的DNA发生酶促分解，形成平均分子量为（4~5)x106D的DNA片段。C、

DNA双链中的一条单链逐步降解，同时，另一条单链逐步进入细胞。第五页，共三十五页，编辑于2023年，星期五D、转化DNA单链与受体菌染色体组上的同源区段配对，接着受体染色体组的相应单链片段被切除，并被外来的单链DNA所交换和取代，于是形成了杂种DNA区段。E、受体菌染色体组进行复制，杂合区段分离成两个，其中之一类似供体菌，另一类似受体菌。当细胞分裂后，此染色体分离形成了一个转化子。第六页，共三十五页，编辑于2023年，星期五转化全过程第七页，共三十五页，编辑于2023年，星期五转化的分子机理第八页，共三十五页，编辑于2023年，星期五是指细胞最易接受外源DNA片段并能实现转化的一种生理状态。只有处于感受态的细菌才能接受转化因子，从出现到消失约为４０分钟(对数期的中期)3、感受态感觉态出现原因细菌失去部分细胞壁的结果细菌在细胞表面产生某种Ｅ引起第九页，共三十五页，编辑于2023年，星期五4、转化因子转化是游离的ＤＮＡ片断的转移和重组游离的ＤＡＮ片断叫转化因子转化因子由供体提供自然情况下可由细菌细胞自行裂解产生，实验室里通过提取获得第十页，共三十五页，编辑于2023年，星期五（二）转导(Transduction)

通过缺陷噬菌体的媒介，把供体细胞的DNA片段携带到受体细胞中，通过交换和整合，使后者获得前者部分遗传性状的现象，称转导。转导又分为:

普遍性转导局限性转导，两类。第十一页，共三十五页，编辑于2023年，星期五1、普遍性转导

(Generalizedtransduction)

噬菌体可误包供体菌中的任何基因，并使受体菌实现各种性状的转导，称为普遍性转导。分两种：

1）完全转导

2）流产转导第十二页，共三十五页，编辑于2023年，星期五1）完全普遍转导(Completetransduction)

在鼠伤寒沙门氏菌的完全转导实验中转导媒介P22噬菌体在野生型菌株供体菌内发育时，极少数（10-6~10-8）噬菌体将与噬菌体头部DNA芯子相仿的供体菌DNA片段误包入其中，因此形成了完全不含噬菌体本身DNA的假噬菌体，当假噬菌体将外源DNA片段导入营养缺陷型菌株受体菌内时，由于导入的供体DNA片段可与受体染色体组上的同源区段配对，再通过双交换而重组到受体菌染色体上，形成了遗传性稳定的转导子。第十三页，共三十五页，编辑于2023年，星期五供体A-B+完全普遍性转导(compietetransduction)A-B+A+B-少数受体A+B+经重组形成转导子鼠伤寒沙门氏菌A+B-多数受体形成溶源菌第十四页，共三十五页，编辑于2023年，星期五2）流产普遍转导(Abortivetransduction)

由于转导噬菌体所引入的野生型基因并没有整合到受体菌的染色体上，因而不能复制，当受体菌分裂为两个时，只有一个细菌获得了这一基因，而另一个细菌未获得，从而还是营养缺陷型细菌。表现为基本培养基上除了正常大小的菌落外，还有一些微小菌落。第十五页，共三十五页，编辑于2023年，星期五流产转导第十六页，共三十五页，编辑于2023年，星期五2、局限转导

(Restrictedtransduction)局限转导：通过某些部分缺陷的温和噬菌体把供体菌的少数特定基因转移到受体菌中的转导现象。据转导频率的高低分为低频转导和高频转导。第十七页，共三十五页，编辑于2023年，星期五galbiogalbio宿主基因组整合不正常切离（10-4—10-6）正常切离λ正常λλdgalλdbio低频转导（LFT）裂解物的形成低频转导：指通过一般溶源菌释放的噬菌体所进行的转导，因其只能形成极少数转导子，故称低频转导。第十八页，共三十五页，编辑于2023年，星期五高频转导

λdgalλ正常双重溶源菌UV高频转导裂解物第十九页，共三十五页，编辑于2023年，星期五3、转导的特点需要噬菌体做媒介，不需要细胞间直接接触噬菌体DNA不接合到寄主染色体（供体的DNA整合）噬菌体蛋白质包裹寄主任何一部分DNA片段噬菌体DNA整合到寄主染色体上噬菌体DNA与寄主染色体特定基因发生交换普遍性转导局限性转导Cncnc-micro第二十页，共三十五页，编辑于2023年，星期五4、溶源转变温和噬菌体的基因整合到宿主核基因组上的现象温和噬菌体并不携带外源供体菌的基因这种温和噬菌体是完整的，而不是缺陷的获得新性状的是溶源化的宿主细胞，而不是转导子获得的性状可随噬菌体的消失而同时消失第二十一页，共三十五页，编辑于2023年，星期五（三）接合(Conjugation)

通过供体菌和受体菌完整细胞间的直接接触而传递大段DNA的过程，称为接合。在细菌中，接合现象研究得最清楚的是大肠杆菌。发现大肠杆菌有性别分化，决定它们性别的因子称为F因子（致育因子）。第二十二页，共三十五页，编辑于2023年，星期五+A+B+C-D-

维甲缺陷型A-B-C+D+

苏缺赖陷型接合及其发现A+B+C+D+通过细胞间的直接接触能进行大段ＤＮＡ的转移的过程，叫接合第二十三页，共三十五页，编辑于2023年，星期五F因子(Fertilityfactor)

一种在染色体外的小型独立的环状DNA，一般呈超螺旋状，具有自主的与染色体进行同步复制和转移到其他细胞中去的能力，此外，其中还带有一些对其生命活动关系较小的基因。F因子的分子量为5x107Da。第二十四页，共三十五页，编辑于2023年，星期五雄性菌株

Hfr菌株

F́́菌株Ｆ－菌株（雌株）Ｆ因子和接合

F+菌株第二十五页，共三十五页，编辑于2023年，星期五接合过程F因子转移和复制的细节第二十六页，共三十五页，编辑于2023年，星期五

原核生物三种基因重组方式的比较接合过程转化转导第二十七页，共三十五页，编辑于2023年，星期五（四）原生质体融合(Cytoplasmicfusion)

通过人为方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体发生融合，并发生重组子的过程，称为原生质体融合或细胞融合。第二十八页，共三十五页，编辑于2023年，星期五第二十九页，共三十五页，编辑于2023年，星期五二、真核微生物的基因重组

1、有性杂交

2、准性杂交

第三十页，共三十五页，编辑于2023年，星期五真核微生物的基因重组

1、有性杂交

(SexualHybridization)

有性杂交，一般指性细胞间的接合和随之发生的染色体重组，并产生新遗传型后代的一种育种技术。第三十一页，共三十五页，编辑于2023年，星期五2、准性杂交

（Parasexualhybridization)

准性生殖是一种类似于有性生殖,但更为原始的一种生殖方式，它可使同种生物两个不同菌株的体细胞发生融合，且不以减数分裂的方式而导致低频率的基因重组并产生重组子。第三十二页，共三十五页，编辑于2023年，星期五准性杂交的步骤1）菌丝联结（amastomosis)：发生在形状相同而遗传性有异的同一菌种两个不同菌株间。频率极低。2）形成异核体(heterocaryon)：体细胞联结，原有的单倍体核形成了双相异核体。第三十三