高中生物实验方法与常用试剂及高中生物实验归类总结

高中生物实验方法与常用试剂1．实验方法

实验方法是整个实验设计的精髓，是做好实验设计的关键所在。现将与中学实验有关的一些最常见的经典的实验方法汇总如下：(1)化学物质的检测方法：①淀粉——碘液(蓝色)

②还原性糖——斐林试剂、班氏试剂(砖红色)

③CO2——Ca(OH)2溶液(澄清石灰水变浑浊)或酸碱指示剂④乳酸——pH试纸

⑤O2——余烬复燃无O2——火焰熄灭⑥蛋白质——被蛋白酶水解、双缩脲试剂(紫色)

⑦脂肪——苏丹Ⅲ染液(橘黄色)、苏丹Ⅳ染液(红色)

⑧DNA——二苯胺(蓝色)

⑨染色体——龙胆紫溶液（紫色），醋酸洋红溶液（红色）(2)实验结果的显示方法：①光合速率——O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量◆水生植物可依气泡的产生量或产生速率;

◆离体叶片若事先沉入水底可依单位时间内上浮的叶片数目;

◆植物体上的叶片可依指示剂(如碘液)处理后叶片颜色深浅。

②呼吸速率——O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量③原子途径——放射性同位素示踪法④细胞液浓度大小——质壁分离和复原⑤细胞是否死亡——质壁分离的复原⑥甲状腺激素作用——动物耗氧量，发育速度等（饲喂法）⑦生长激素作用——生长速度(体重变化，身高变化)⑧胰岛素作用——动物活动状态（切除、移植胰腺）⑨菌量——菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度⑩大肠杆菌——伊红—美蓝琼脂培养基⑾生长素作用——向光性(3)实验条件的控制方法：①增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物②减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水③除去容器中CO2——NaOH溶液④除去叶片中原有淀粉——置于黑暗环境⑤除去叶片中叶绿素——酒精隔水加热⑥除去光合作用对呼吸作用的干扰——给植株遮光⑦如何得到单色光——棱镜色散或彩色薄膜滤光⑧血液抗凝——加入柠檬酸钠⑨线粒体提取——细胞匀浆离心⑩骨的脱钙——盐酸溶液⑾灭菌方法——微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料,灭菌方法不同：培养基用高压蒸气灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用75％酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行。(4)实验中控制温度的方法：①还原糖鉴定：水浴煮沸加热②酶促反应：水浴保温③用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热④DNA的鉴定：水浴煮沸加热⑤细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养（5）常见器材滤纸：过滤或纸层析纱布、尼龙布：过滤，遮光血球计数板：计数（探究酵母菌种群数量变化）

2、具体实验方法⑴、根据颜色来确定某种物质的存在：

淀粉+I2(蓝色);还原性糖+斐林试剂(砖红色);脂肪+苏丹Ⅲ(橘黄)或+苏丹Ⅳ(红色);蛋白质+双缩脲试剂(紫色);

大肠杆菌+伊红和美蓝(菌落为深紫色，有金属光泽)

⑵、用颜色标记法来确定原肠胚三个胚层的分化情况。

⑶、用荧光标记法来证明细胞膜具有一定的流动性

⑷、同位素示踪法：光合作用产生氧气的来源;光合作用中二氧化碳的去向;

噬菌体侵染细菌实验证明DNA是遗传物质，蛋白质不是遗传物质;

DNA的复制是半保留复制。

⑸、确定某种元素为植物生长必需的元素的方法:

水培法(完全培养液与缺素完全培养液对照)

⑹、获得无籽果实的方法:

用适宜浓度的生长素处理花蕾期已去雄的子房，如无籽蕃茄、

诱导染色体变异，如无籽西瓜。

⑺、确定某种激素功能的方法：

饲喂法，切除注射法，阉割移植法，切除口服法。

⑻、确定传入、传出神经的功能：

刺激+观察效应器的反应或测定神经上的电位变化。

⑼、植物杂交的方法

雌雄同花：花蕾期去雄+套袋+开花期人工授粉+套袋

雌雄异花：花蕾期雌花套袋+开花期人工授粉+套袋

⑽、确定某一显性个体基因型的方法：

测交;该显性个体自交。

⑾、确定某一性状为显性性状或隐性性状的方法：

具有一对相对性状的纯合体的杂交

自交，观察后代是否有性状分离。

⑿、确定某一个体是否具有抗性基因的方法：

确定小麦是否具有抗锈病基因，用锈病菌去侵染，一段时间后，观察有无锈斑出现。

⒀、鉴定血型的方法：

用标准血清与待测血型混合，在显微镜下观察血液的凝集情况。

⒁、育种的方法：

杂交育种;人工诱变育种;单倍体育种;基因工程育种;细胞工程育种;多倍体育种等。

⒂、测定种群密度的方法：样方法;标志重捕法

⒃、生态瓶的制作方法;瓶必须透明，且封闭

⒄、分离微生物的方法：

平板划线法;用选择培养基培养(如：圆褐固氮菌的分离，金黄色葡萄球菌的分离，细菌和酵母菌的分离)

⒅、测定微生物群体生长的方法：

测定细菌的数目显微计数

测定细菌的重量取一定体积的培养基，经离心分离，反复洗涤后，称湿重，或烘干后称干重

3、生物学中常用的试剂：

1、斐林试剂：

成分：0.1g/ml

NaOH（甲液）和0.05g/ml

CuSO4（乙液）。用法：将斐林试剂甲液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。

2、班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的测定。

3、双缩脲试剂：成分：0.1g/ml

NaOH（甲液）和0.01g/ml

CuSO4（乙液）。用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。

4、苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色（被苏丹Ⅳ染成红色）。

5、二苯胺：用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色。

6、甲基绿：用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色。（甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。）7、50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中，用苏丹Ⅲ染液染色，再用50%的酒精溶液洗去浮色。（苏丹Ⅲ是弱酸性染料，易溶于体积分数为50%酒精）8、75%的酒精溶液：用于杀菌消毒，对于细菌有强烈的杀伤作用，可以作防腐剂。75%的酒精能渗入细胞内，吸收细菌蛋白的水分，使蛋白质凝固变性而失去功能。低于这个浓度，酒精的渗透脱水作用减弱，杀菌力不强；而高于这个浓度，则会使细菌表面蛋白质迅速脱水，凝固成膜，妨碍酒精透入，削弱杀菌能力。75％的酒精溶液常用于手术前、打针、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等。9、95%的酒精溶液：=1\*GB2⑴提取含杂质较少的DNA。冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA。DNA不溶于酒精，尤其是体积分数为95%的冷冻酒精，而细胞中的某些物质（蛋白质等）可以溶解于酒精。=2\*GB2⑵洗去多余的试剂：卡诺氏液可溶于体积分数为95%的酒精中。=3\*GB2⑶燃烧加热：酒精是富含能量的有机物，燃烧能释放大量的热量无水乙醇：提取色素。叶绿体中的各种色素均是有机物，能溶解在有机溶剂中，各色素在无水酒精中的溶解度较大，且酒精无毒，方便操作。10、盐酸：在“探究酶在不同Ph下的活性”的实验中提供酸性环境15%的盐酸和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。（观察植物细胞的有丝分裂,观察低温下染色体的数目变化.）8%的盐酸:观察DNA和RNA在细胞中的分布中，改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色质中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。11、龙胆紫溶液：(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色，可将染色体染成紫色，通常染色3~5分钟。（也可以用醋酸洋红染色）12、20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）

13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。

14、碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。

15、丙酮：用于提取叶绿体中的色素。

16、层析液：（成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油）可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。

17、二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。

18、碳酸钙：研磨绿色叶片时加入，可中和有机酸，防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏。

19、0.3g/mL的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液，比植物细胞液的浓度大，可用于质壁分离实验。蔗糖溶液还可用于测定植物细胞液浓度、作为碳源和能源物质，也可用于探究生物膜的半透性。

20、0.1g/mL的柠檬酸钠溶液：与鸡血混合，防凝血。血液抗凝剂。21、氯化钠溶液：①可用于溶解DNA。当氯化钠浓度为2mol/L、

0.015mol/L时DNA的溶解度最高，在氯化钠浓度为0.14

mol/L时，DNA溶解度最低。②浓度为0.9%时可作为生理盐水。22、胰蛋白酶：①可用来分解蛋白质。②可用于动物细胞培养时分解组织使组织细胞分散。23、秋水仙素：人工诱导多倍体试剂。用于萌发的种子或幼苗，可使染色体组加倍，原理是可抑制正在分裂的细胞纺缍体的形成。24、氯化钙：增强细菌细胞壁的通透性，可用于基因工程。25．石蕊试剂：检验溶液酸碱性→判断光合速率与呼吸速率快慢的关系；26、NaHCO3/Na2CO3Na２HＰＯ４/NaH２ＰＯ４：酸碱缓冲对→调节ＰＨNaHCO3：提供CO2

27．溴麝香草酚蓝水溶液：检测CO2，由蓝变绿再变黄。28.NaOH：用于吸收CO2或改变溶液的pH。用于“探究细胞表面积与体积的关系”的实验。（与酚酞显色反应），观察物质运输效率。

29.Ca(OH)2：鉴定CO2。

30.琼脂：激素或其他物质的载体或培养基的凝固剂。用于“探究细胞表面积与体积的关系”的实验。

31.亚甲基蓝：用于检测污水的细菌含量。试剂检验物质反应颜色斐林（要加热）还原糖砖红色沉淀双缩尿蛋白质紫色苏丹三/四脂肪橘黄/红碘淀粉蓝色DNA二苯胺（加热）蓝色DNA甲基绿绿色RNA吡啰红红色线粒体健那绿（唯一的活体染色剂）蓝绿色染色体龙胆紫紫色染色体醋酸洋红红/紫红色乙醇重铬酸钾灰绿色二氧化碳溴麝香草酚蓝由蓝变绿再变黄4、几种试剂的比较1．斐林试剂、班氏试剂与尿糖试纸这三种物质均可用来检验含醛基的有机物的存在，在医学上用来检验糖尿病，其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化，但成分略有不同：斐林试剂：即硫酸铜、氢氧化钠和酒石酸钾钠组成的蓝色混合溶液。分为斐林试剂A和斐林试剂B，A为CuSO4溶液，B为氢氧化钠和酒石酸钾钠的混合溶液，使用时将A、B等体积混合即成斐林试剂。班氏试剂：即硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸钠组成的混合液，又叫本尼迪克特(Benedict)试剂，它与醛反应的结果是与斐林试剂一致的，只是比斐林试剂更稳定，所以在临床化验中更常使用。尿糖试纸：又叫硫酸铜试纸，呈白色,带蓝色斑点，用于糖尿病患者的尿糖测试。每片含硫酸铜20毫克,枸橼酸300毫克,碳酸钠80毫克，氢氧化钠235毫克。尿糖试纸法快速、方便，试纸的正确使用方法为：将试纸条放在尿液中浸湿，一秒钟后取出，在一分钟内观察试纸的颜色，并与标准色板对照，根据不同的颜色来确定尿糖阳性的程度。2．斐林试剂和双缩脲试剂的比较相同点：①都由NaOH溶液和CuSO4溶液构成；②斐林试剂甲液和双缩脲试剂A都为0．1g/mLNaOH溶液。不同点：①CuSO4溶液浓度不一样：斐林试剂乙液为0．05g/mLCuSO4溶液，

双缩脲试剂B为0．01g/mLCuSO4溶液。配制比例不一样：斐林试剂是甲乙液等量混合均匀后再注入，双缩脲试剂是先将双缩脲试剂A1mL加入组织样液2mL，振荡均匀(必须营造碱性环境)，再加入2~3滴双缩脲试剂B，振荡均匀。

③使用方法不一样：斐林试剂是甲、乙液一起混合后再使用，

双缩脲试剂则是先向待鉴定材料加入A试剂摇匀后，再加入试剂B。

④鉴定的对象不一样：斐林试剂鉴定的是还原糖，双缩脲试剂鉴定的是蛋白质。

⑤反应本质及颜色反应不一样。3．苏丹Ⅲ染液与苏丹Ⅳ染液的比较都是用来鉴定脂肪。苏丹Ⅳ染液更易溶于脂肪，所以染色更深，同时要求染色时间更短。二轮实验复习3-6页一、实验试剂1.用到酒精的实验（1）叶绿素的提取：无水酒精用于提取光合色素（2）物质鉴定实验：50%酒精用于洗去浮色（苏丹III和IV）（3）DNA粗提取：95%冷酒精用于析出DNA（4）观察有丝分裂：95%酒精与15%盐酸1:1混合（解离液）用于使组织细胞分散开（5）微生物培养、植物组培、动物细胞培养等中的无菌操作：75%酒精用于消毒（6）土壤中小动物类群丰富度的研究：70%酒精用于保存土壤中的小动物（7）萨克斯的叶片遮光实验：用95%酒精煮叶片达到脱色2.用到盐酸的实验（1）观察有丝分裂：95%酒精与15%盐酸1:1混合（解离液）用于使组织细胞分散开（2）观察细胞中DNA与RNA的分布：8%盐酸用于①增大细胞膜对甲基绿、吡罗红的通透性；②让DNA更好地与甲基绿结合（3）探究影响酶活性的调节：5%盐酸用于调节反应体系的pH（4）植物组织培养技术：盐酸用于调节培养基的pH（5）微生物的纯化与培养：盐酸用于调节培养基的pH（6）生物维持pH稳定的机制：0.1mol/L盐酸用于改变溶液体系的pH（7）促胰液素的发现：斯他林和贝利斯用盐酸刺激使小肠粘膜产生促胰液素3.用到NaOH的实验（1）探究影响酶活性的调节：5%的NaOH用于调节反应体系的pH（2）植物组织培养技术：NaOH用于调节培养基的pH（3）微生物的纯化与培养：NaOH用于调节培养基的pH（4）生物维持pH稳定的机制：0.1mol/L的NaOH用于改变溶液体系的pH（5）物质鉴定实验：0.1g/mL的NaOH用于配置斐林试剂和双缩脲试剂（6）探究酵母菌的呼吸方式：10%的NaOH用于吸收CO2（7）细胞大小与物质运输的关系：将含有酚酞的琼脂块浸入NaOH溶液中4.用到蒸馏水（清水）、无菌水的实验（1）使用高倍显微镜观察细胞：蒸馏水用于制作植物细胞的临时装片，也用于洗去某些多余的染液（2）制备细胞膜：蒸馏水用于涨破红细胞（3）DNA的粗提取：①蒸馏水用于涨破动物细胞以获取含DNA的混合溶液；②蒸馏水用于稀释2mol/L的NaCl溶液。（3）观察植物细胞质壁分离及复原：清水用于制作临时装片和使细胞发生质壁分离复原（4）微生物的纯化与培养：无菌水用于稀释菌液（5）蒸馏水、清水经常作为植物为材料的探究实验中的空白对照（6）观察细胞的有丝分裂、减数分裂：漂洗细胞，防止过度解离以及影响染色5.用到特定酶的实验（1）植物体细胞杂交：果胶酶和纤维素酶用于水解细胞壁（2）动物细胞培养技术：胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）用于分散动物细胞（3）基因工程：限制酶用于剪切DNA，DNA连接酶用于目的基因与载体的连接（4）PCR技术：耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）用于催化DNA的延伸（5）比较过氧化氢的分解：肝脏研磨液中的过氧化氢酶用于催化过氧化氢的分解（6）探究影响酶活性的条件：淀粉酶、过氧化氢酶分别用于探究温度、pH对酶活性的影响（7）DNA的粗提取：嫩肉粉中的木瓜蛋白酶可以水解蛋白质（8）艾弗里的肺炎双球菌转化实验：DNA酶用于水解DNA，验证DNA是转化因子二、实验器材1.用到显微镜的实验（1）使用高倍显微镜观察细胞（2）物质鉴定实验：检测脂肪时用于观察细胞中被染色的脂肪粒（3）观察DNA与RNA在细胞中的分布（4）制备细胞膜：用于观察涨破前后的血红细胞（5）观察线粒体和叶绿体、观察细胞质环流（6）观察植物细胞质壁分离及复原（7）生物膜结构的探索：罗伯特森用电子显微镜观察细胞膜，光学显微镜观察人鼠融合细胞（8）观察细胞的有丝分裂、减数分裂（9）低温诱导植物染色体数目的变化（10）培养液中酵母菌种群数量的变化2．用离心机的实验（1）分离细胞器：差速离心用于分离不同重量的细胞器（2）制备细胞膜：将涨破的细胞膜离心至沉淀中（3）赫尔希、蔡斯的噬菌体侵染实验：将细菌离心至沉淀中，观察放射性的分布（4）探究DNA的复制方式：密度梯度离心用于观察子代DNA的重量差异（5）PCR技术：离心用于反应体系的混合（6）植物体细胞杂交、动物细胞融合：离心可以诱导原生质体或动物细胞融合三、实验材料1.对实验材料有特殊要求的实验（1）物质鉴定实验：实验材料本身无色或颜色浅（2）制备细胞膜：哺乳动物红细胞（3）DNA的粗提取：DNA含量较高且较易提取（不能是哺乳动物的血细胞）（4）观察细胞的有丝分裂、低温诱导染色体加倍：植物根尖分生区细胞（5）观察细胞的减数分裂：植物的花药、动物的雄性生殖器官（精巢或睾丸）（6）观察植物细胞质壁分离及复原：成熟的、液泡中有颜色的植物细胞（7）调查人群中的遗传病：调查发病率需要对人群进行随机抽样，调查遗传方式需要找患者家系（8）植物组织培养：分化程度低，全能性高的植物外植体（9）动物细胞培养：胚胎或幼龄动物的组织、器官（分裂能力强）2.需要保持实验材料活性的实验（活体实验）3.实验操作导致实验材料死亡的实验四、实验条件需要控制温度条件的实验（1）物质鉴定实验：鉴定还原糖和DNA需要水浴加热（2）探究影响酶活性的条件：温度对酶活性的影响（水浴）（3）传统发酵技术：果酒要求18~25℃，果醋要求30~35℃，腐乳