口蹄疫监测诊断作业指导书

口蹄疫监测诊断作业指导书更多免费资料下载请进： 好好学习社区口蹄疫监测诊断作业指导书修订日期修订单号修订内容摘要页次版次修订审核批准2011/03/30/系统文件新制定4A/0///批准：审核：编制：口蹄疫监测诊断作业指导书全文共4页，当前为第1页。

口蹄疫监测诊断作业指导书全文共4页，当前为第1页。口蹄疫监测诊断作业指导书一、口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体检测酶联免疫吸附试验1.适用范围用于检测猪、牛、羊血清中的口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体，与猪、牛、羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用，可区分口蹄疫病毒感染动物及疫苗免疫动物。检测猪血清应用猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒；检测牛、羊血清应用牛、羊口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒。2.检测试剂口蹄疫病毒VP1抗原包被板、样品稀释液、酶结合物、阴性对照、VP1阳性对照、酶结合物稀释液、TMB底物A液、TMB底物B液、终止液（l.OMHZSO。）、浓缩洗涤液、稀释板、一次性封板膜、微孔定位标签。3.检测步骤3.1使用前将试剂盒恢复到室温，避免阳光直射或放置在30℃3.2取出试剂盒中的样品稀释液。A1、B1两孔作为阴性对照，Cl、D1两孔作为阳性对照孔，其余孔作检测孔，每孔一个样品。3.3在稀释板的各孔中加200样品稀释液。在相应各孔中分别加入10此对照血清或被检血清样品。用加样器重复吹吸数次。稀释每个样品时必须使用不同的吸头。3.4取出抗原包被板。口蹄疫监测诊断作业指导书全文共4页，当前为第2页。3.5分别从稀释板上取稀释后的对照血清和被检血清各100此，加至抗原包被板的相应孔中，加益或封膜后，置37士2℃口蹄疫监测诊断作业指导书全文共4页，当前为第2页。3.6洗涤工作液配制：按需要量，用去产离子水或双蒸水将洗涤液作25倍稀释。3.7用洗涤工作液洗涤抗原包被板，每孔300吨，洗涤6次，拍干。3.8酶结合物工作液配制：用酶结合物稀释液将酶结合物作100倍稀释，现配现用。3.9每孔加入100此酶结合物工作液，加盖或封膜后，置37±2℃下孵育30±3.10重复3.7。3.11TMB底物工作液配制：将TMB底物B液和TMB底物A液等量混合，现配现用。3.12每孔加入100此底物工作液，加盖或封膜后，置37±2℃下孵育15±3.13每孔加入100此终止液，并轻轻振荡混匀。3.14在15分钟内，用酶联读数仪测定在450nln波长下的OD值。结果判定4.1猪口蹄疫病毒vPI结构蛋白抗体检测结果判定：4.1.1阴性对照孔平均0D值应续0.15，每个阳性对照孔0D值应妻0.5，且簇2.0。否则，试验无效。临界值＝0.23x阳性对照孔平均OD值。4.1.2被检样品孔OD值<临界值时、判为阴性，即为抗口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体阴性。4.1.3被检样品孔OD值>临界值，判为阳性。口蹄疫监测诊断作业指导书全文共4页，当前为第3页。4.1.4对判定结果为阳性的样品，应用2个孔进行重复检测。重复检测后，若至少有一个孔为阳性，则判为口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体阳性，若两孔均为阴性，则判为口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体阴性。口蹄疫监测诊断作业指导书全文共4页，当前为第3页。4.1.5当猪口蹄疫病毒vPI结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒与猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用时，按下列标准进行最终判定}4.2牛、羊口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体检测结果判定：4.2.1阴性对照孔平均OD值应≤0.2，每个阳性对照孔OD值应≥0.5，且≤2.0。否则，试验无效。临界值=0.23x阳性对照孔平均OD值。4.2.2被检样品孔OD值＜临界值时，判为阴性，即为抗口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体阴性。4.2.3被检样品孔OD值≥临界值，判为阳性。4.2.4对判定结果为阳性的样品，应用2个孔进行重复检测。重复检测后，若至少有一个孔为阳性，则判为口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体阳性，若两孔均为阴性，则判为口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体阴性。4.2.5当牛、羊口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒与牛、羊