传染病的实验室检查课件

传染病的实验室检查叶

英我国法定传染病的种类分为甲类（2）、乙类(25)、丙类(10)乙类传染病原有23种，新增2种传染性非典型肺炎、人感染高致病性禽流感传染病的诊断具备三要素:①

流行病学资料②

临床资料③

实验室资料：对传染病诊断具有特殊意义疑似病例，确诊病例有病原学方面资料可明确诊断实验室检查⒈

一般检查：三大常规、生化检查⒉

病原学方面资料：①病原体的检出：直接检出，分离培养②分子生物学检测特异核酸：分子杂交

、聚合酶链反应（PCR）实验室检查③免疫学检测：特异性抗体检测特异性抗原检测细胞免疫功能检查免疫球蛋白测定3.其他：内镜检查、影像检查、活检1.一般检查：(4项)①

血常规WBC↑：流脑、猩红热等细菌性传染病出血热、乙脑WBC↓：病毒感染、原虫感染伤寒、布氏杆菌病嗜酸粒细胞↑：蠕虫感染嗜酸粒细胞↓：伤寒、流脑异型淋巴细胞：见于出血热、传单1.一般检查：(4项)②

尿常规蛋白尿、RBC、管型、少量WBC：钩体病蛋白尿、膜状物、管型、RBC、融合细胞：出血热③

大便常规RBC+WBC:菌痢、肠阿米巴病（少量WBC）水样便，粘液便：病毒性或大多数细菌性肠道感染④

生化病毒性肝炎等2.病原学检查①病原体直接检出

血液、骨髓涂片：检疟原虫（显微镜、肉眼）

大便涂片：寄生虫卵、阿米巴等②病原体分离培养检材：血、尿、脑脊液、骨髓、皮疹吸取液等注意采集标本注意病程阶段、是否应用抗生素点

本保存与运送标时间方法人工培养基分离培养：细菌、螺旋体、真菌动物接种、组织培养：立克次体、病毒3.分子生物学检测①分子杂交：利用探针检出特异性病毒核酸②聚合酶链反应（PCR）:可将DNA扩增100万倍以上逆转录PCR（RT-PCR）：检测RNA病毒核酸③原位聚合酶链反应：用于组织细胞中原位检出低拷贝DNA、RNA序列。4.免疫学检查用已知Ag/Ab检测血清或体液中的相应Ag/Ab①特异性抗体检测急性期、恢复期双份血清4倍以上升高意义

4倍以下升高提示回忆反应近期感染：IgM型抗体阳性凝集反应（肥达氏反应）方法补体结合：病毒感染免疫荧光：快速诊断酶链免疫吸附测定：灵敏度高，操作简便②特异性抗原检测诊断意义较抗体可靠；方法多样。③细胞免疫功能T细胞亚群检测:CD4,CD8等：艾滋病④免疫球蛋白测定降低者见于先天性免疫缺损升高者见于慢性肝炎、黑热病、艾滋病等5.其它检查①

内镜

:纤维支气管镜：艾滋病肺孢子虫病结肠镜：菌痢、阿米巴②

影像学检查：X光、超声、CT、MRI③

活检病毒性肝炎病毒性肝炎在我国危害极大病毒性肝炎在我国各类传染病中发病率最高我国乙肝病毒感染者逾1.3亿

10%乙型肝炎患者近3千万HAV感染率约80%HCV感染率约7％HDV感染率在HBV感染者中约10％HEV感染率约18％每年近30万人死于肝炎或肝癌能引起肝功能损害的病毒有很多：它•

黄热病毒（YFV）•

EB病毒（EBV）们均非嗜肝病毒•

巨细胞病毒（CMV）•

单纯疱疹病毒（HSV）•

风疹病毒(RV)可通过特异的Ag/Ab来检测病毒性肝炎特指由嗜肝病毒感染所引起的肝脏炎症和坏死病变的一组传染病。目前已知的嗜肝病毒有五种：HAV（甲）、HBV（乙）、HCV(丙）、HDV（丁）、HEV（戊）庚型肝炎病毒（HGV/GBV-C）输血传播病毒（TTV）SenV5种嗜肝病毒的病原学特点一、甲型病毒性肝炎甲

肝●

HAV为单股正链RNA病毒●病毒分型和抗原抗体系统：HAV仅有一个血清型和一个抗原抗体系统抗HAV-IgM：急性感染指标，一般持续8-12周，少数6月抗HAV-IgG：是保护性抗体，可长期存在二、乙型病毒性肝炎l

HBV属嗜肝DNA病毒科1.HBV形态结构乙

肝A:大球形颗粒（Dane颗粒）B:丝状颗粒C:小球形颗粒Dane颗粒-病毒复制的主体HBsAg（外膜蛋白）HBcAgHBVDNADNAP乙

肝2.HBV基因组结构编码pre-S1pre-S1蛋白pre-S2蛋白HBsAgpre-S2Spre-CHBeAgCPHBcAgCDNAPXHBxAgHBsAgpre-S2pre-S1乙

肝3.HBV血清标志物及其临床意义（1）HBsAg

曾用名：HAA、澳大利亚抗原●出现时间：HBV感染后1周～12周●持续时间：急性肝炎：1-6周，6个月内可消失慢性肝炎或HBsAg携带者：可持续阳性乙

肝●

HBsAg有抗原性而无传染性HBsAgHBV整合肝细胞DNAS基因持续表达adradwayr●HBsAg

的亚型长江以北长江以南新疆、西藏、内蒙等ayw乙

肝（2）抗-HBs●

出现时间：急性感染后期或HBsAg消失后窗口期：

HBsAg已消失，抗-HBs未出现，只检出抗HBc和抗HBe●

抗-HBs为保护性抗体其出现标志着HBV感染进入恢复期●

抗-HBs对相同HBsAg亚型的HBV再感染有免疫力，但对不同亚型的HBV保护力不完全。（3）HBeAg乙

肝从前C基因开始编码的蛋白质经加工分泌到细胞外即为HBeAgHBVC基因C区表

达前C区前C/

C蛋白切割、加工HBcAgHBeAg分泌到细胞外HBeAg只存在于血清中乙

肝●

HBeAg是病毒复制和传染性的标志●

在慢性乙肝中HBeAg是重要的免疫耐受因子l

血清HBeAg阳性者中，HBV-DNA阳性率为92%左右乙

肝（4）抗-HBe●

出现时间：

HBeAg消失后，常伴DNA阴转，ALT正常●抗-HBe的出现标志着病毒复制减少、传染性降低在部分抗-HBe阳性者中，DNA仍阳性，ALT异常，HBeAg阴性

---

前C基因变异(G1896A)易加重病情、易演变为肝硬化α-干扰素疗效差HBeAg阴性的慢乙肝乙

肝（5）HBcAg一般血清学方法检测不到HBcAg肝组织免疫组化技术:

可检查肝细胞内HBcAg（6）抗-HBc抗HBc-IgM：是HBV急性或慢性感染者病毒活动标志抗HBc-IgG：凡“有过”HBV感染者均可阳性，高滴度亦提示病毒活动可终身阳性乙

肝（6）HBVDNA是病毒复制和传染性的最直接证据检测方法：斑点杂交法、PCR法（7）DNAP（DNA多聚酶）：是逆转录酶是直接反应病毒复制的指标之一（8）HBxAg：HBxAg具有反向激活作用，可调控病毒基因转录水平，并对宿主癌基因可能有激活作用。乙

肝●介绍三个概念：①

“两对半”②

血清转换：HBeAg消失，出现HBeAbHBsAg消失，出现HBsAb③

“转阴”常用指标：HBsAg血清转换----金牌HBeAg血清转换----银牌HBVDNA阴转------铜牌丙

肝三、丙型病毒性肝炎丙肝是经济发达国家病毒性肝炎的主要类型1.

HCV形态HCV为单股正链RNA病毒，1991年归为黄病毒科丙型肝炎病毒属2.HCV基因组结构

HCVRNA全长约10kbC

E1

E2/NS1

NS2

NS3

NS4

Ns55’NC3’NC两侧为5’和3’非编码区，中间为ORF。ORF依次为：C（核心蛋白区，高度保守）-E1-E2∕NS1（包膜蛋白区，极易变异）-NS2-NS3-NS4-NS5（非结构蛋白区）l

NS3蛋白具有强免疫原性，可刺激机体产生抗体l

HCV基因型：>10个，我国以1b型为主丙

肝3.HCV的抗原抗体系统l

血清中HCVAg含量低，目前尚无法检测。l

抗-HCV为非保护性抗体，阳性为病毒感染标志l

HCV-RNA：是病毒复制及传染的直接标志，但体内病毒含量较低，需反复检测丁

肝四、丁型病毒性肝炎HDV为缺陷病毒，必须依赖HBV的辅助才能复制。1.

HDV形态：l又称δ因子，为单股负链RNA病毒。l在细胞核内HDVRNA无需HBV辅助而能自行复制，在血液中表面包裹HBsAg丁

肝2.

HDAg和抗-HDVl

HDV仅有一个血清型和一个抗原抗体系统l

HDAg最早出现，是HDV感染的直接标志l

HDV-Ab不是保护性抗体抗HDV-IgM：早期感染标志抗HDV-IgG：既往感染的标志l

HDVRNA是诊断HDV感染最直接依据戊

肝五、戊型病毒性肝炎●

HEV为单股正链

RNA病毒,有2个以上的基因型。l

HEVAg主要定位于细胞浆，血清中检测不到。●

抗-HEV：抗HEV-IgM：是近期内HEV感染的标志，有早期诊断价值抗HEV-IgG：HEV感染后可长期存在，可用于流行病学调查l

HEVRNA是HEV感染最直接依据,但持续时间不长病毒性肝炎的实验室检查一、血象急性肝炎：WBC正常或稍低，淋巴细胞相对

慢性肝炎、肝硬化：WBC和BPC↓二、血清生化检查1.血清酶测定（1）丙氨酸转氨酶（ALT/GPT）●分布：肝>肾>心>肌肉●意义：反映肝功能的最常用指标●血清ALT升高程度与肝损伤程度不平行（2）门冬氨酸转氨酶（AST/GOT）●

AST明显升高者提示肝细胞损伤较严重ALT胞浆内AST

线粒体（80%）和胞浆（20%）内（3）γ-GT和ALP(AKP)●

两者均是反应胆汁淤积的指标γ-GT

肝炎活动期，梗阻性黄疸时可显著升高ALP同上，儿童亦可明显升高。肿瘤时两者亦可出现显著升高2.血清胆红素测定●血清总胆红素升高水平可反应肝细胞损伤程度●直接胆红素占总胆红素的比例对判断黄疸性质有一定帮助：肝细胞性黄疸：DB与IB同比例升高梗阻性黄疸或胆汁淤积时：DB

60%TB3.甲胎蛋白（AFP）●

慢性肝炎及肝硬化：可升高●

重型肝炎：可升高，病情好转后降低●

诊断PHC：>500ng/ml，4周以上200～500ng/ml，8周以上4.白蛋白、球蛋白●

白蛋白下降多见于肝硬化和重型肝炎●

球蛋白升高多见于慢性肝炎病毒的感染5.凝血酶原时间（PT）和凝血酶原活动度（PTA）★PT和PTA可以敏感地反应肝脏损害的严重程度VitK依赖性凝血因子：Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ主要由肝脏合成的凝血因子：Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、ⅩⅦ因子半衰期最短淤胆PT主要检测外源性凝血系统中Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ等活性●正常值：PT

12～16秒维生素K纠正试验303PTA＝×100%（80%～100%）PT—8.7PTA<20%时可自发性出血，<10%时预后恶劣与肝细胞坏死严重性相关的实验室指标●血清胆红素:升高程度与肝细胞坏死程度正相关●PTA:

降低程度与肝细胞坏死程度正相关●血清白蛋白:降低程度与坏死程度正相关慢性肝炎实验室检查异常程度参考指标项

目轻

度中

度重

度ALT或/或AST(IU/L)≤正常3倍

＞正常3倍

＞正常3倍胆红素(Bil)(μmol/L)

≤34.2

34.3-85.5

＞85.5白蛋白(A)(g/L)A/G电泳r球蛋白(rEP)(%)

≤21凝血酶原活动度(PTA)(%)＞71≥35≥1.4＜35-＞32

≤32＜1.4-1.0

≤1.0＞21-＜26

≥26＜71-＞60

60-40*胆碱酯酶(CHE)(U/L〗

＞5400

≤5400-＞4500≤4500注：*有条件开展CHE检测的单位，可参考本项指标。★三、病毒感染血清标志物的临床检测及意义（一）甲

肝●抗HAV-IgM是诊断急性甲肝最可靠方法。●抗HAV-IgG检测：主要用于人群感染率的调查（二）乙

肝1.乙肝五项意义判定“两对半”分析举例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋大三阳小三阳＋＋＋＋＋＋＋＋＋“两对半”分析举例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋急性肝炎早期，传染性强“两对半”分析举例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc“大三阳”＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋传

急染

性性

或强

慢性＋＋＋现症＋＋感染“两对半”分析举例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋有无传染性应结合HBVDNA检测结果“小三阳”“两对半”分析举例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋有过HBV感染，目前有无传染性应结合HBVDAN结果“两对半”分析举例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋HBV感染的恢复期，有免疫力，无传染性“两对半”分析举例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋①注射疫苗后；②遥远的过去有过HBV感染“两对半”分析举例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋①窗口期，抗-HBs即将出现；②HBV感染已过乙肝血清标志物小结●

唯一的保护性抗体：

抗HBs●

HBsAg代表现症感染，不代表传染性●

空窗期及空窗期标志物（抗HBc/抗HBe）●

抗HBe的临床意义(康复/前C变异/HBV-DNA整合）●

HBV感染的血清复制指标HBVDNA;

HBVDNAPHBeAg;

HBcAg(肝细胞或Dane颗粒内）高滴度IgG抗HBc；IgM抗HBc（三）丙

肝●

抗-HCV：不是保护性抗体，是感染标志●

HCV-RNA是HCV感染和治疗的直接证据（四）丁

肝●

HDAg和HDV-RNA均是HDV感染的直接证据●抗HDV-IgM：既可用于早期诊断，也是诊断慢性HDV感染的敏感指标。（五）戊

肝●抗HEV-I