细菌和放线菌的个体形态观察

实验3

细菌和放线菌的个体形态观察•

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基1瓶液体培养基150mL+2.5g琼脂•

5支试管，加帽，包扎•

生理盐水1瓶水150mL加NaCl

1.3

g微生物形状

球菌

杆菌

螺旋菌•

球菌

球形或椭圆形排列方式：微球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌和葡萄球菌•

杆菌•

螺旋菌双球菌四联球菌八叠球菌链球菌葡萄球菌•

球菌

球形或椭圆形，排列方式：微球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌和葡萄球菌•

杆菌

短杆、棒杆、梭状、分枝杆菌，单个或链状•

螺旋菌

弧菌（不满一周）和螺旋菌炭疽芽胞杆菌大肠杆菌双歧杆菌1、革兰氏染色

涂片•

挑一环水于洁净载玻片中央；•

无菌操作取金黄葡萄球菌，在水滴中涂布4~5周；•

灼烧环上残菌后，无菌操作取克雷伯氏菌，在水滴中反复涂布5圈×10，具体是从中央向外逐渐涂布5圈，然后再从中央向外涂布5圈。将两种菌涂布均匀，成为直径约0.5

cm的菌膜。•

杀灭环上残菌。

固定•

载玻片在火焰上方来回过火数次，但要控制载玻片微热，不烫手，防止过热，否则菌体聚集乃至变形严重。•

固定不牢，染色过程中细菌会大量从载玻片上脱落，即载玻片上菌膜必须干燥彻底。

染色•

初染：加草酸铵结晶紫，染色1.5

min，弃去染色液后水洗，稍干；•

媒染：加路德尔碘液，1.5

min后弃去，水洗，稍干；•

脱色：滴加95％乙醇，稍摇动几下后马上弃去，重复1次，立即水洗；•

复染：加沙黄染液，染色2

min后弃去，水洗，用吸水纸轻轻吸干。

镜检观察，记录结果正置光学显微镜结构染色的细菌装片置于载物台上低倍镜下寻找合适的视野转换油镜到工作位置聚光器升至最高，可变光栅开至最大，亮度调至最亮油镜头下的载玻片处滴加1~2滴香柏油油镜头浸入香柏油中，转动粗校准螺旋，使镜头与玻片相切目镜观察，缓慢粗调至出现物像（降低载物台,禁止提升载物台）细调至物像清晰，选取视野，记录结果提升镜头或者降低载物台，聚光器降至最低位置下降载物台，取下载玻片；取擦镜纸，擦去镜头上香柏油；重复至无油。油镜保养取擦镜纸，吸少量清洁剂，擦去残余油迹，重复1次；用擦镜纸检查，确认无油污。将4倍镜头转至工作位置关闭电源，将电源线绑好放回显微镜，登记显微镜编号、使用者和使用时间金黄葡萄球菌和克雷伯菌革兰氏染色结果油镜下观察，拍照或者绘图，少量紫色（＋）球菌和大量红色（－）杆菌均匀分布为佳。金黄葡萄球菌克雷伯菌2、简单染色•

载片中央加一滴水→无菌操作取菌（枯草芽孢杆菌）→涂布→火上稍加热，干燥固定→草酸铵结晶紫染色2

min→弃去，水洗→稍控水→擦干残余的水→加香柏油，镜检（油镜）。枯草芽孢杆菌的简单染色内有芽孢的菌体菌体释放的芽孢3．夹膜染色•

载玻片中加一环水→无菌操作取菌（胶质芽孢杆菌）→轻微涂布→试验台上晾5

min→加冰乙酸结晶紫染色2

min→弃去，用硫酸铜溶液冲洗2次→马上加香柏油→镜检，记录结果。胶质芽孢杆菌的夹膜染色法背景菌体夹膜4

放线菌个体形态观察•

菌丝状生长，产孢子繁殖，陆生性较强的一类原核微生物•

材料：链霉菌插片培养物。•

方法：（1）假水封片制备：用镊子拔下一片长有链霉菌生长物的盖玻片

用毛边纸擦去一面的生长物，将该盖玻片粘在载片中央水滴上，无生长物的向下，有生长物的一