肿瘤个体化分子病理检测和临床应用

肿瘤个体化分子病理检测和临床应用第一页，共二十八页，编辑于2023年，星期一肿瘤个体化分子病理检测及临床应用一、开展肿瘤个体化分子病理检测的意义二、分子病理检测的标本选择三、分子病理检测的方法四、分子病理检测的项目第二页，共二十八页，编辑于2023年，星期一一.开展肿瘤个体化分子检测的意义--个体化分子诊断是个体化治疗的基石。--靶向治疗是为攻击特异性靶分子而设计，所以用药前，必需检测患者是否存在对应的靶点，才能发挥其疗效。第三页，共二十八页，编辑于2023年，星期一卫生部原发性肺癌诊疗规范(2011)-------IV期肺癌在开始治疗前，建议先获取肿瘤组织进行表皮生长因子受体(EGFR)是否突变的检测，根据EGFR突变状况制定相应的治疗策略。第四页，共二十八页，编辑于2023年，星期一中国肿瘤界正在致力于推动肿瘤个体化分子病理诊断的规范化，同时也希望临床能够与病理科紧密配合，共同实现规范化诊断、规范化治疗的目标，以造福患者。第五页，共二十八页，编辑于2023年，星期一外科手术标本(石蜡切片）

10umX2

切片活检标本（石蜡切片）

10umX4

切片穿刺标本（新鲜组织）至少芝麻粒大小胸腹水标本不少于10mL。二.分子病理检测的标本选择第六页，共二十八页，编辑于2023年，星期一--尽量避开肿瘤间质、出血灶、坏死物质等--肿瘤细胞所占的比例也是必须要考虑的因素。--目前尚不清楚满足分子学检测需要的最低限度肿瘤细胞的数量。第七页，共二十八页，编辑于2023年，星期一--获得质、量俱佳的肿瘤标本是EGFR检测的重要前提条件，涉及到从临床标本采集到完成最终检测实验等多个环节。--离体后及时（30分钟内）固定于10%中性缓冲福尔马林液中。--固定时间：小标本6-12h，大标本6-48h。第八页，共二十八页，编辑于2023年，星期一肿瘤组织标本病理学评估组织切片非小细胞性肺癌诊断及病理类型足够的肿瘤细胞比例：测序法，至少50%肿瘤细胞；ARMS法，至少2%的肿瘤细胞(不考虑遗传异质性)足够多的肿瘤细胞总数：>200个肿瘤细胞标识肿瘤丰富的区域富集肿瘤细胞取一张切片H&E染色用于病理评估其余白片用于提取DNA建议切片数量：

—手术标本，5µm×5

—小活检标本，5µm×10固定包埋组织手术标本：可得足量肿瘤DNA，但DNA片段化小活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化新鲜/冰冻组织手术标本：最好标本，可得高质量肿瘤DNA小活检标本：量少，但肿瘤DNA质量仍好肿瘤组织样本的采集及病理评估PirkerR,etal.JThoracOncol2010;5(10):1706-1713.第九页，共二十八页，编辑于2023年，星期一1.Dataonfile.2.KimuraH,etal.BritishJournalofCancer2006;95(10):1390-1395.3.ZhangX,etal.LungCancer2008;60(2):175-182.4.SohJ,etal.IntJCancer2006;119(10):2353-2358.胸水标本处理流程收集胸水50-500ml室温1000转离心10分钟，吸去上清沉淀物-80℃保存沉淀物均匀涂玻片室温晾干涂片涂片区域滴加75%酒精室温晾干涂片常温运输涂片沉淀物用棉絮纸包裹0.1%水性伊红漂染1秒10%中性福尔马林固定24-48小时后续处理与组织标本相同低温保存酒精固定涂片福尔马林固定切片第十页，共二十八页，编辑于2023年，星期一三.分子病理检测的方法基因试剂盒价格适中、灵敏度，特异性高、所需时间短。PCR通用设备平台基因芯片特定设备，价格高测序法检测

PCR通用设备平台，灵敏度，特异性低、所需时间长。价格便宜第十一页，共二十八页，编辑于2023年，星期一

（一）技术简介肿瘤个体化治疗是指实施治疗前根据患者的个体差异（基因差异），“量体裁衣”（基因检测）地制定某个患者的治疗方案，即检查某种靶向药物对患者是否有效或是在多种化疗药物中筛选最有效的药物。化疗个体化可显著提高治疗效果，有效缓解疾病，避免药物的毒副作用，提高患者的生活质量，避免因反复尝试不同药物带来的身体损害、错过最佳治疗时间以及浪费金钱。使用靶向药物前必须基因检测，从而判断该药是否适用该患者。

第十二页，共二十八页，编辑于2023年，星期一荧光定量PCR与基因测序法检测基因突变的比较

第十三页，共二十八页，编辑于2023年，星期一荧光定量PCR与基因测序法检测基因突变的比较

荧光定量PCR检测

DNA测序法技术原理特异双环引物探针Sanger双脱氧链终止法灵敏度、特异性可准确检测出含量<1%的突变DNA，特异性高突变DNA含量低于20%易产生误差成功率成功率高达100%对石蜡样本检测成功率为70-75%扩增片段长度～100bp≧200bp所需时间模板完成后仅需要90分钟至少1个工作日结果判读简单，只需观察扩增曲线即可需要通过DNA序列分析软件第十四页，共二十八页，编辑于2023年，星期一基因检测过程示意图第十五页，共二十八页，编辑于2023年，星期一标本采集与运输要求检验标本标本采集与保存标本运输全血5ml,EDTA抗凝管（紫盖），充分混匀，保存低温运输，24小时送达

血浆新鲜全血5ml,EDTA抗凝管（紫盖），室温直立静置30分钟，8000rpm离心5分钟，取上清于无菌EP管中，冻存低温运输，24小时送达石蜡包埋组织蜡块或5-10张白片，厚度在5-10um;加同一蜡块HE染色片1张常温运输（20）新鲜组织组织切除后用生理盐水冲洗，无菌管中冻存低温运输，24小时送达新鲜组织组织切除后用生理盐水冲洗，放入福尔马林固定保存常温运输（20）体液脑脊液3-5ml,无菌管保存；胸腹水10ml,注入含106mmol/L酸钠抗凝剂的无菌管（浅蓝色盖），抗凝剂与标本比例1:9低温运输，24小时送达骨髓3-5ml骨髓，EDTA抗凝管（紫盖）低温运输，48小时送达第十六页，共二十八页，编辑于2023年，星期一基因突变检测方法

----国际肺癌协会共识第十七页，共二十八页，编辑于2023年，星期一测序法与ARMS法比较测序法ARMS敏感度20-30%1%FFPE标本成功率低高检测流程复杂慢长简单快速数据分析要求高低假阳性机会(交叉污染)多少假阴性机会多少仪器成本高低商用试剂盒无有试剂成本低略高第十八页，共二十八页，编辑于2023年，星期一测序法和ARMS法在不同标本类型中突变率的比较

ARMS法更适合用于小标本检测第十九页，共二十八页，编辑于2023年，星期一四.分子病理检测的项目分子靶向治疗基因检测：●药物敏感基因检测：□ERCC1基因表达EGFR（29种、4种）□P53基因突变（6种突变）KRAS（7种突变）□BRCA1基因表达BRAF基因突变（V600E突变）□RRM1基因表达Jak2基因突变（V617F突变）□TYMS基因表达PIK3CA基因突变（5种热点突变）□DPD基因表达C-KIT基因突变（D816V突变）□STMN1基因表达RET基因突变（M918T突变）□TYMP基因表达PDGFRA基因突变（D842V突变）□BRCA1基因表达BCR-ABL基因突变（T315I突变）□TOP2A基因表达EML4-ALK融合基因（RT-PCR法)□TUBB3基因表达

第二十页，共二十八页，编辑于2023年，星期一（一）分子靶向药物作用靶点基因检测临床应用

癌症种类靶向药物（主要基于NCCN2010版）检测基因检测结果检测靶点非小细胞肺癌易瑞沙、特罗凯EGFRKRASBRAF突变型野生型野生型DNA突变结直肠癌西妥昔单抗、帕尼单抗KRASBRAFEGFR野生型野生型突变型DNA突变胰腺癌厄罗替尼EGFRKRAS突变性野生型DNA突变头颈部癌西妥西单抗KRASBRAF野生型野生型DNA突变黑色素瘤PLX4032,PLX4720BRAF突变型DNA突变胃肠道间质瘤伊马替尼（格列卫）C-kit突变型DNA突变二、分子靶向药物作用靶点检测和耐药基因检测临床应用第二十一页，共二十八页，编辑于2023年，星期一（二）化疗药物对应的基因检测项目临床应用

癌症种类化疗药物（主要基NCCN2010版）检测基因检测结果检测靶点结直肠癌氟类药（如5-氟尿嘧啶、卡培他滨等）TYMSDPD低表达低表达mRNA表达水平铂类药物（如奥沙利铂）ERCC1BRCA1RAP80低表达低表达低表达伊利替康EGFR高表达肝癌铂类药物（如顺铂、奥沙利铂）ERCC1BRCA1低表达低表达mRNA表达水平吉西他滨RRM1低表达氟类药（如5-氟尿嘧啶、卡培他滨等）TYMSDPD低表达低表达蒽环类（如多柔比星）TOP2A高表达mRNA表达水平胆管\胆囊癌铂类药物（如顺铂、奥沙利铂）ERCC1BRCA1低表达低表达mRNA表达水平氟类药（如5-氟尿嘧啶）TYMSDPD低表达低表达吉西他滨RRM1低表达第二十二页，共二十八页，编辑于2023年，星期一

癌症种类化疗药物（主要基NCCN2010版）检测基因检测结果检测靶点胰腺癌铂类药物（如顺铂、奥沙利铂）ERCC1BRCA1低表达低表达mRNA表达水平氟类药（如5-氟尿嘧啶、卡培他滨等）TYMS低表达吉西他滨RRM1低表达肾癌吉西他滨RRM1低表达mRNA表达水平氟类药（如5-氟尿嘧啶、卡培他滨等）TYMS低表达蒽环类（如多柔比星）TOP2A高表达mRNA表达水平前列腺癌铂类药物（如顺铂、卡铂）ERCC1BRCA1低表达低表达mRNA表达水平抗微管类如多西紫杉醇）TUBB3BRCA1低表达高表达依托泊苷TOP2A高表达第二十三页，共二十八页，编辑于2023年，星期一

癌症种类化疗药物（主要基NCCN2010版）检测基因检测结果检测靶点膀胱癌铂类药物（如顺铂、卡铂）ERCC1BRCA1低表达低表达mRNA表达水平吉西他滨RRM1低表达抗微管类（如紫杉醇、多西紫杉醇、长春花碱等）TUBB3BRCA1低表达高表达氟类药（如5-氟尿嘧啶等）、培美曲塞TYMS低表达蒽环类（如多柔比星）TOP2A高表达mRNA表达水平乳腺癌铂类药物（如顺铂、卡铂）ERCC1BRCA1低表达低表达mRNA表达水平抗微管类（如紫杉醇、多西紫杉醇、长春花碱、长春瑞滨等）TUBB3BRCA1低表达高表达氟类药（如5-氟尿嘧啶等）TYMSDPD低表达低表达吉西他滨RRM1低表达依托泊苷TOP2A高表达蒽环类（如多柔比星、表柔比星）TOP2A高表达mRNA表达水平第二十四页，共二十八页，编辑于2023年，星期一

癌症种类化疗药物（主要基NCCN2010版）检测基因检测结果检测靶点宫颈癌铂类药物（如顺铂、卡铂）ERCC1BRCA1低表达低表达mRNA表达水平抗微管类（如紫杉醇、多西紫杉醇、长春花碱、长春瑞滨等）TUBB3BRCA1低表达高表达吉西他滨RRM1低表达氟类药（如5-氟尿嘧啶等）TYMSDPD低表达低表达蒽环类（如多柔比星、表柔比星）TOP2A高表达mRNA表达水平卵巢癌铂类药物（如顺铂、卡铂）ERCC1BRCA1低表达低表达mRNA表达水平抗微管类（如紫杉醇、多西紫杉醇、长春花碱、长春瑞滨等）TUBB3BRCA1低表达高表达吉西他滨RRM1低表达卡培他滨、培美曲塞TYMS低表达依托泊苷TOP2A高表达蒽环类（如多柔比星）TOP2A高表达mRNA表达水平第二十五页，共二十八页，编辑于2023年，星期一

癌症种类化疗药物（主要基NCCN2010版）检测基因检测结果检测靶点头颈部癌铂类药物（如顺铂、卡铂）ERCC1BRCA1低表达低表达mRNA表达水平抗微管类（如紫杉醇、多西紫杉醇等）TUBB3BRCA1低表达高表达氟类药（如5-氟尿嘧啶等）TYMSDPD低表达低表达吉西他滨RRM1低表达黑色素瘤铂类药物（如顺铂、卡铂）ERCC1BRCA1低表达低表达mRNA表达水平抗微管类（如紫杉醇、长春花碱、长春瑞滨）TUBB3BRCA1低表达低表达吉西他滨R