预备性实验操作

预备性实验操作生理心理学实验一实验目的初步了解实验课的有关设备和常用仪器、器械；练习动物实验手术操作技能，观察动物腹腔与脑内的的大体结构。二实验原理手术术前准备、消毒麻醉、缝合灌流固定切片染色1手术的术前准备（洗涤与消毒）手术器械的洗涤：玻璃制品，金属器械。（1）玻璃制品：超声清洗、泡酸24h、自来水清洗、蒸馏水清洗、烘烤。（2）金属器械：酒精消毒。防锈消毒液（千分之一的新洁尔灭加亚硝酸钠），戊二醛。液体消毒：过滤、蒸气消毒。个体的消毒：手，清水洗、消毒液泡、蒸馏水洗。聚丙烯材料制成的塑料制品可以高压消毒灭菌。房间消毒：紫外线。手术部位消毒：备毛、碘消毒、75%酒精脱碘，由内向外同心圆。2麻醉麻醉剂：水合氯醛、戊巴比妥钠、乌拉坦（致癌）、乙醚。麻醉程度：止血钳夹动物的尾部。根据反应程度判断麻醉深浅。麻醉剂的选择：实验的种类，手术时间的长短。10%的水合氯醛，0.35ml/100g体重。麻醉方法皮下注射腹腔注射静脉注射手术过程见实验内容3缝合肌肉缝合：连续缝合；皮肤缝合：间断缝合4颅骨解剖部分识别5固定固定液：甲醛、多聚甲醛、戊二醛脑的固定液：４％多聚甲醛固定时间：２４h更长1、配制冲洗液、固定液。2、麻醉动物。3、手术：⑴在剑突处横向剪开，并沿肋骨两侧向上打开胸腔；⑵打开心包膜，剪开左心室，将灌流针头插入心脏主动脉（弓）中，并固定。4、放开冲洗液输液管上的止水夹，开始灌流，同时剪开右心耳放血。5、待肝脏色变浅，流出液为透明时，开始用固定液固定，直到动物僵硬为止。6、灌流结束后，取出所需脑组织放入30%蔗糖固定液中进行后固定和保存，待以后切片用。灌流固定：通过心脏将固定液输入血管中，达到固定全身或某个局部脏器的目的。固定的意义迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转为不溶性物质，以保持其原有状态。使组织内各种成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察。使组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程中不易损坏。使不同的组织成分对染料有不同的亲和力，经过染色处理后易于辨认。防止细胞过度收缩或膨胀，以致失去其原有形态结构。使组织块硬化，便于制作薄片。6切片组织切片机（1）冰冻切片机（恒冷箱切片机）：旋转式切片机，恒冷箱，温度传感器，刀架，标本夹具、微动调节装置，转轮及摇把。石蜡切片机冰冻切片与石蜡切片的比较冰冻切片优点缺点步骤少，需时短；冰冻切片机价格昂贵组织块的快速冷冻，更能反映组织的活体状态；切片较厚，影响连续切片的制作节省试剂组织块不容易长期保存，容易脱水冻干取材较大，保持了结构的完整性石蜡切片优点缺点切片薄，适用于连续切片；步骤多，结果慢，需几十个小时；石蜡包埋的组织可长期保存；在包埋过程中，组织容易脱水；切片过程的时间安排更加灵活；结构的完整性不容易保存；包埋过程中接触有害试剂7染色任何切片，不经过染色，在显微镜下只能看到细胞和组织的轮廓，远不能满足观察和诊断的目的。染色是将染料配制成溶液，将组织切片浸入染色剂内，经过一定时间，使组织和细胞的成分被染上不同的颜色，产生不同的折射率，便于在光学显微镜下进行观察。因此，染色在组织形态学、病理学诊断、研究工作中，具有非常重要的实用价值。HE染色三实验内容实验对象：SD大鼠2只，雌、雄各一；实验用品：手术器械，注射器，鼠板，75%酒精，碘酒，0.9%生理盐水，10%水合氯醛等；动物实验操作练习（1）抓取动物，辨别雌雄，称重，标记；（2）麻醉动物：根据体重腹腔注射麻醉剂；腹腔手术（性腺切除手术）（1）固定动物；（2）剪去腹部被毛，碘酒和酒精消毒，在腹部下2/3沿腹中线剪开腹腔；（3）寻找睾丸或卵巢，分离，节扎，切除；（4）器官复位，腹腔滴入消炎药；（5）关腹缝合；（6）生理盐水擦拭，切口部位撒消炎粉；观察大鼠脑结构及取脑（1）将大鼠俯卧，剪去头部被毛，以碘酒和酒精消毒；（2）切开头部皮肤，刮去颅骨表面的结缔组织，暴露颅骨，辨认颅骨各解剖部位；（3）练习打孔；（4）取脑脑组织切片制作切片前（1）开启电源；（2）调节温度，降温；（3）当下降至预设温度（或接近）时，将组织块加上冷冻包埋液放置在标本台上，置于机箱内冷冻；切片（1）将冻好的组织块标本台置