高效液相色谱法在中药标准提高中的应用-李华课件

高效液相色谱法在中药质量标准

广东省药检所――李华前言中药是中国医药学的瑰宝，对中华民族的繁衍昌盛做出了伟大的贡献。为了保证中药的安全性和有效性，数千年来中医药一直处于不断标准化、规范化的进程中，《神农本草经》则是最早的中药材标准。李时珍的《本草纲目》是中药材标准规范的深化。历史发展到今天，总结前人经验，补充完善、制定中药系列标准是中药现代化的需要，也是中药国际化，造福全人类的需要。一、我省中药材质量标准状况、部分中药材无质量标准。广东是一个中药材生产、销售、使用的大省，我省用于生产中药成方制剂及临床配方的中药材有上千种，《中国药典》年版收载的中药材有种；现有质量标准的中药材远不能满足我省中药材的需求和使用，尚有数百种经常使用、疗效较好的广东地产中药材，既无国家药品质量标准也无省级药品质量标准。、与药典同名异物广东是“川、广、云、贵地道药材”的主产地之一，“南药”是广东的特产。有些特产药材已收入《中国药典》如陈皮、广藿香、广金钱草、广防己、广枣、砂仁、巴戟天、沉香、地龙、化橘红、何首乌、佛手、丁公藤……等。但尚有大部分广东常用中药材未被《中国药典》收载，有的其习用名称却与《药典》收载的名称相同，为同名异物的中药材.、已有的质量标准偏低。

《广东省中药材标准》收载个品种，建立了定量测定方法的有个，其中高效液相色谱法个。二、高效液相色谱法在国家药品

标准中的运用高效液相色谱法由于仪器化程度高、分离效能高、准确性和重现性好，更适合中药复杂成分的分离分析和标准色谱图库的建立，成为中药含量测定的主导方法。（一）、在部标中药成方制剂的应用《中华人民共和国卫生部药品标准》“中药成方制剂”分册，共种，建立量化指标项目的占，其中采用高效液相色谱分析方法的有４２项，占１.１２％，见表。表部颁品种量化指标方法分析含测方法挥发油测定容量法、重量法分光光度法液相色谱法气相色谱法薄层扫描法其他浸出物合计项目（二）、在《中国药典》的应用在《中国药典》的应用，在我国药学工作者的努力下，经历了一个从无到有、从少到多的过程。表２近版版药典品含量测定方法分析年份总收载数薄层扫描法气相色谱法高效液相色谱法比例（）三、运用高效液相色谱法进行药品标准定量部分提高工作中药是多种成分的混合物，其化学成分可有几十种甚至上百种，虽然中药药效是多成分综合作用的结果已渐成共识，但由此认为中药全成分均为有效成分的观点则是片面的，以我们目前的技术及实验条件要想对所有的成分进行测定也是不可能的，选择

个有效成分作为中药质量评价的标准，虽然这种方法不够充分、客观，但却是目前我们的技术及实验条件所能做到的。（一）、指导思想１、在制定中药标准中突出中医理论的指导作用，反映中医用药与质量标准的内在关系。２、在检测成分上也要注意以中医临床功能主治与现代药理学相结合进行研究。３、如所测成分含量低，应制定浸出物或增加一味药的含量测定。表多指标测定品种与项目序号品名检测成分西红花羟基红花黄色素、山奈素山楂叶总黄酮、金丝桃苷马钱子马钱子碱、士的宁丹参丹参酮、丹酚酸甘草甘草酸、甘草苷半枝莲总黄酮、野黄芩苷肉桂挥发油、桂皮醛红花羟基红花黄色素、山奈素芦荟库拉素芦荟、好望角芦荟沙棘总黄酮、异鼠李素虎杖大黄素、虎杖苷金银花绿原酸、木犀草素银杏总黄酮醇苷、萜类内酯淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷紫草羟基萘醌总色素、ßß’二甲基丙酰阿卡宁槐花总黄酮、无水芦丁蜂胶白扬素、高良姜素六味地黄丸牡丹皮中的丹皮酚、山茱萸中马钱苷六味地黄颗粒牡丹皮中的丹皮酚、山茱萸中马钱苷注射用双黄连金银花中绿原酸、黄芩中黄芩苷、连翘中连翘苷独一味胶囊总黄酮、正丁醇提取物、木犀草素清开灵口服液黄芩中黄芩苷、总氮量清开灵注射液含氮量、胆酸、栀子中栀子苷、黄芩中黄芩苷鼻窦炎口服液正丁醇提取物、黄芩中黄芩苷表规定的含量限度为多成分之和序号品名检测成分测定方法含量限度（）人参人参皂苷和、的总量；≥；人参叶人参皂苷、的总量≥儿茶儿茶素和表儿茶素的总量≥三七人参皂苷、和三七皂苷的总量≥木香木香烃内酯、去氢木香烃内酯≥木通齐墩果酸、常春藤皂苷元≥瓦松槲皮素、山奈素≥西红花西红花苷、西红花苷≥西洋参人参皂苷、、的总量≥大黄芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量≥防己粉防己碱、防己诺林≥防风升麻甙和甲基维斯阿米醇苷的总量≥红参人参皂苷和、的总量；≥；吴茱萸吴茱萸碱和吴茱萸次碱的总量≥补骨酯补骨酯素、异补骨酯素≥苦参苦参碱、氧化苦参碱≥金钱草槲皮素、山奈素≥胡黄连胡黄连苷、胡黄连苷≥厚朴厚朴酚与和厚朴酚的总量≥厚朴花厚朴酚与和厚朴酚的总量≥牵牛子咖啡酸、咖啡酸乙酯≥香薷麝香草酚、香荆芥酚≥重楼重楼皂苷、重楼皂苷≥穿心莲穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量≥蟾酥华蟾蜍次素和脂蟾毒配基的总量≥（二）、提高的程度１、以中国药典２００５年版一部为基准。２、中国药典２００５年版一部，成方制剂和单味制剂共收载５６个品种，其中有３２５个项目采用了高效液相色谱法进行定量分析，占５７％。３、在３２５个分析项目中测定芍药苷的有４５项，占１３.８％，测定黄芩苷的４３项，占１３.２％，测定盐酸小檗碱的１８项，占５.５％，测定大黄素的２０项，占６.２％。类别被测成分所属药材测定条件芍药苷白芍、赤勺乙腈磷酸溶液（：）乙腈水（：）；生物碱盐酸小檗碱黄连、黄柏乙腈磷酸二氢钾溶液（：）；盐酸麻黄碱麻黄乙腈磷酸二氢钾溶液（含三乙胺）磷酸调至（：）；苦参碱苦参乙腈磷酸溶液（三乙胺调）；氢溴酸东莨菪碱洋金花乙腈磷酸钠溶液（含十二烷基硫酸钠，用磷酸调节至）（：）；荷叶碱荷叶乙腈三乙胺冰醋酸水（：：：）；马钱子碱士的宁马钱子乙腈庚烷磺酸钠溶液与磷酸二氢钾等量混合,用磷酸调节至）（：）；原阿片碱夏天无乙腈三乙胺醋酸溶液（水中加冰醋酸，三三乙胺）（：）；黄酮类黄芩苷黄芩甲醇水磷酸（：：）；葛根素葛根乙腈磷酸溶液（：）；柚皮苷化橘红甲醇冰醋酸水（：：）；橙皮苷陈皮、青皮甲醇醋酸水（：：）；淫洋藿苷淫洋藿乙腈磷酸（：）；芦丁槐花甲醇水冰醋酸（：：）；金丝桃苷山楂叶甲醇乙腈四氢呋喃冰醋酸（：：：）；槲皮素山奈素异鼠李素银杏甲醇磷酸（：）；木犀草素独一味甲醇－磷酸溶液（：）；皂苷类甘草酸（单铵盐）甘草甲醇醋酸铵溶液冰醋酸（：：）；人参皂苷类人参、三七乙腈；水，梯度洗脱；黄芪甲苷黄芪乙腈水（：）；蒸发光散射检测器蒽醌类大黄素、大黄酚大黄甲醇磷酸溶液（：）；丹参酮丹参甲醇水（：）；丹酚酸丹参甲醇乙腈甲酸水（：：：）；马钱苷山茱萸乙腈水（：）；绿原酸金银花乙腈磷酸溶液（：）；（三）、高效液相色谱分析方法建立的一般步骤：一种高效液相色谱分析方法的建立，是由多种因素来决定的，除了了解样品的性质及实验室具备的条件外，对液相色谱分离理论的理解，对前人从事过的相近工作的借鉴以及分析工作者自身的实践经验，都对分析方法的建立起着重要的影响。通常在确定被分析的样品以后，要建立一种高效液相分析方法必须解决以下问题：（）根据所测成分的性质，制定其分析纯化的方法。（）根据被分析样品的特性，选择适用于样品分析的高效液相色谱分析方法。（）由获得的色谱图进行定性或定量分析。（四）、高效液相色谱图存在问题、原因及解决方法液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。峰拖尾原因、流动相选择不当、干扰峰、样品与填料表面残留硅羟基发生反应解决方法调整值。、使用更长的色谱柱。、改变流动相或更换色谱柱。、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂、更换色谱柱峰前延原因、样品过载、样品溶剂选择不恰当、柱温低解决方法降低样品含量。、使用流动相作为样品溶剂。升高柱温峰分叉原因、保护柱或分析柱污染、样品溶剂不溶于流动相解决方法、取下保护柱再进行分析。改变样品溶剂。保留时间波动原因色谱柱没有平衡流动相组分变化温控不当解决方法在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱防止变化（蒸发、反应等）调好柱温保留时间波动原因、柱温波动。、流动相不均匀。、流通池被污染或有气体、检测器出口阻塞、流动相配比不当或流速变化解决方法、控制好柱子和流动相的温度、使用级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。、流通池被污染或有气体、取出阻塞物或更换管子。、更改配比或流速。基线漂移、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时。、柱温波动。、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成、样品中有强保留的物质。、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用倍体积的新流动相对柱子进行冲洗、控制好柱子和流动相的温度、检查流动相的组成。、使用保护柱基线漂移四、

结束语