03-LCMS定量分析操作步骤V2

一．外标法1．打开Postrun--------再解析窗口2．打开数据文件--------鼠标双击数据文件3．打开方法编辑器---------将MethodView窗口由View切换到Edit4．积分参数设置---------在Integration窗口进行基本参数编辑MaxPeak表示每个通道积分的最大峰数目，MRM通道中一般设置1；Width表示积分的宽度，一般峰形很窄时，可以适当改小（例如2sec），峰形很宽时，可以适当改大（例如10sec，15sec）；Slope、Drift、T.DBL值采用Auto（Area）模式，不能进行设置，如需设置，需要更改为Advanced；Min.表示设置最小峰面积的阈域值，低于此面积不进行积分。平滑参数设置方面，通常采用Standard，Counts1，Width1，如在色谱峰毛刺较多，需要适当增大平滑参数，例如Counts2，Width2。如果MRM通道为多个通道，对每个通道的积分参数进行编辑，需要将通道状态由No（UseDefault）改为Yes，此时这个MRM通道可进行积分参数的单独设定，并且可单击Program按钮，在弹出的对话框中可进行手动积分，并且可以进行积分关闭和开启（IntegrationIntergrationOff/On）。5．Identification选项卡标签用于对保留时间偏差进行定义，此时务必将右边的UsereferenceIons勾选去除。Identification窗口可以使用Window或者Band，指目标化合物的识别窗口，一般保留时间比较稳定，5%的识别窗口即可使用，若色谱峰漂移飘移，需要根据需要将范围放宽。注：如果需要设定参比离子定性功能，请确定UseReferenceIons勾选上。6．Quantitative选项卡标签用于定义定量计算的参数，例如此处用外标法（ExternalStandardStantard），峰面积计算，校准曲线的点数（level，即配制的标准品的浓度个数），曲线的类型等。Zero表示是否强制过原点，建议通过回归后的标准曲线相关系数及标准点回读值准确度（Accuracy%）选择合适的方式；WeightingMethod表示是否需要使用权重，通常使用1/C和1/C^2，也是通过相关系数及标准点回读值准确度来确认。7．编辑Compound表1）输入化合物的名称并选择m/z注：如果无法选出m/z，请确认Event显示的数字与采集方法中该化合物的Event号码一致，如果不一致，请手动修改序号，保证一致。2）鼠标左击保留时间单元格，然后在ChromatogramView窗口中的色谱图上，左击化合物A的色谱峰的峰顶，则保留时间自动添加到Compoundtable中。输入化合物的浓度参考1）-3）将其他化合物的信息输入进去（注意！！每个化合物都有自己的Event，务必将其相应的Event输入正确）所有信息都填写完毕后，点击View，应用并保存数据。另存方法为数据后处理方法，将方法名字可设置为区别于采集方法的文件名。打开Postrun-------浏览器窗口9．选择助手栏中Main-------QuantBrowserBrower,窗口如下：10．打开方法文件，选择前面编辑好的方法文件或者已经编辑好的定量方法文件；若为初次打开的定量方法文件，打开的窗口如下图3所图3,4在图中没有标注示；如果此方法文件在浏览器窗口打开过，并且定义了标准曲线后保存，再次打开定量方法时，窗口如图4所示，方法中将包含标准曲线，如果直接使用该标准曲线，后续直接将数据拖入，如果需要更换标准曲线，将QuantitativeResultsView窗口的所有行选中，鼠标右键Remove即可。图3,4在图中没有标注将数据文件选中并拖入QuantitativeResultsView窗口编辑QuantitativeResultsQuantativeReasultsView窗口参数。将标准品的Level，浓度从小到大依次填充为1,2,3,4……2）将标准样品的SampleType修改为standard(Calc.point)，校准曲线自动生成。如果没有找到SampleType，鼠标右击，选择Tablestyle，再在双击隐藏项目中的SampleType，OK即可。可在标曲图上鼠标右键查看CalibrationInformation，可以看到标准曲线方程、相关系数等。查看标准曲线回读值的准确度，如下图，如果有标准点准确度超过接受范围，可以将Cal.Point上的勾去掉，代表该浓度点不参与回归。3）如果需要设定Control样品，将质控样品类型修改为Control，设定对应的Level水平，可由软件直接计算Control样品的准确度。

二．内标法1.打开Postrun-----再解析窗口2.2）打开数据文件--------鼠标双击数据文件3．打开方法编辑器---------将MethodView窗口由View切换到Edit4．积分参数设置---------在Integration窗口进行基本参数编辑MaxPeak表示每个通道积分的最大峰数目，MRM通道中一般设置1；Width表示积分的宽度，一般峰形很窄时，可以适当改小（例如2sec），峰形很宽时，可以适当改大（例如10sec，15sec）；Slope、Drift、T.DBL值采用Auto（Area）模式，不能进行设置，如需设置，需要更改为Advanced；Min.表示设置最小峰面积的阈域值，低于此面积不进行积分。平滑参数设置方面，通常采用Standard，Counts1，Width1，如在色谱峰毛刺较多，需要适当增大平滑参数，例如Counts2，Width2。如果MRM通道为多个通道，对每个通道的积分参数进行编辑，需要将通道状态由No（UseDefault）改为Yes，此时这个MRM通道可进行积分参数的单独设定，并且可单击Program按钮，在弹出的对话框中可进行手动积分，并且可以进行积分关闭和开启。5．Identification标签用于对保留时间偏差进行定义，此时务必将右边的UsereferenceIons勾选去除。Identification窗口可以使用Window或者Band，指目标化合物的识别窗口，一般保留时间比较稳定，5%的识别窗口即可使用，若色谱峰漂移飘移，需要根据需要将范围放宽。注：如果需要设定参比离子定性功能，请确定UseReferenceIons勾沟选上。6．Quantitative标签用于定义定量计算的参数，例如此处用内标法（InternalStandardStantard），峰面积计算，校准曲线的点数（Level，即配制的标准品的德浓度个数），曲线的类型等。Zero表示是否强制过原点，建议通过回归后的标准曲线相关系数及标准点回读值准确度选择合适的方式；WeightingMethod表示是否需要使用权重，通常使用1/C和1/C^2，也是通过相关系数及标准点回读值准确度来确认。7．编辑Compound表1）输入化合物的名称并选择m/z注：如果无法选出m/z，请确认Event显示的数字与采集方法中该化合物的Event号码一致，如果不一致，请手动修改序号，保证一致。对于内标物质（在此假设为化合物B为内标物质，将B的Type修改为ISTD，浓度均设为1）注意！！ISTDGroup：当存在多个内标物质的时候，在此将内标物质和内标物质进行分组，假设化合物B是化合物A的内标,化合物D为化合物C的内标，则化合物A,B的ISTDGroup设为1，C和D的设为2.2）鼠标左击保留时间单元格，然后在ChromatogramView窗口中的色谱图上，左击化合物GA8的色谱峰的峰顶，则保留时间自动添加到Compoundtable中。3)输入化合物的浓度，内标浓度输入14)参考1）-3）将其他化合物的信息输入进去（注意！！每个化合物都有自己的Event，务必将其相应的Event输入正确）5)所有信息都填写完毕后，点击View，应用并保存数据。6)另存方法为数据后处理方法，将方法名字可设置为区别于采集方法的文件名。8.打开postrun-------浏览器窗口9．选择助手栏中Main-------QuantBrowserBrower,窗口如下：10．打开方法文件，选择前面编辑好的方法文件或者已经编辑好的定量方法文件；若为初次打开的定量方法文件，打开的窗口如下图3所示；如果此方法文件在浏览器窗口打开过，并且定义了标准曲线后保存，再次打开定量方法时，窗口如图4所示，方法中将包含标准曲线，如果直接使用该标准曲线，后续直接将数据拖入，如果需要更换标准曲线，将QuantitativeResultsView窗口的所有行选中，鼠标右键Remove即可。11.将数据文件选中并拖入QuantitativeResultsView窗口12.编辑QuantativeReasultsView窗口参数。将标准品的Level，浓度从小到大依次填充为1,2,3,4……2）将标准样品的SampleType修改为Standard(Calc.point)，校准曲线自动生成。如果没有找到SampleType，鼠标右击，选择Tablestyle，在双击隐藏项目中的S