药物分析 20生物制品

第二十章生物制品分析第一节概述《中国药典》2010版一部——中药二部——化学药物三部——生物药物生物制品：是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的制品。第一代：利用生物材料加工制成的含有某些天然活性物质与混合成分的粗提制剂如：垂体后叶素、甲状腺片生化制药的六个阶段：1、原料的选择和预处理；2、组织及细胞的破碎；3、从破碎的细胞中提取有效成分制成粗品；4、采用多种生化技术从粗品中将目的物精制出来；5、干燥及保存；6、制剂。第二代：根据生物化学和免疫学原理，应用近代生化分离纯化技术从生物体制取的具有针对性治疗作用的特异生化成分。如：人血白蛋白、人纤维蛋白原第三代：应用生物工程技术生产的天然生理活性物质，以及通过蛋白质工程原理设计制造的具有比天然物质更高活性的类似物，或与天然物质结构不同的全新的药理活性成分如：重组人干扰素、EPO基因工程药物在受体细胞中得到目的蛋白质对基因改造并导入受体细胞分离、纯化或合成控制该蛋白质的基因确定对疾病有效的蛋白质第一节生物制品的分类按用途（ChP2010）：预防类：疫苗治疗类：抗毒素、细胞因子、血液制品诊断类：ABO血型1.疫苗类：用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培养后加以处理制造而成

疫苗就是病毒，不过这种病毒已经剔除致病能力。当人体接种疫苗时，免疫系统就会产生一定的保护物质。当人再次接触该类病毒时，人的免疫系统就会循着原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病毒对人体的伤害。1.1细菌类疫苗：卡介苗

1.2病毒类疫苗：麻疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗

1.3联合疫苗：百白破联合疫苗

1.4双价疫苗及多价疫苗2.抗毒素及抗血清类：用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动物所取得的免疫血清叫抗毒素用细菌或病毒本身免疫马或其他大动物所取得的免疫血清叫抗（菌）病毒血清

人工被动免疫3.血液制品：由健康人的血清或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或重组DNA技术制成的血浆蛋白组分，以及血液细胞有形成分4.重组DNA制品：采用遗传修饰，将所需制品的编码DNA通过一种质粒或病毒载体，引入适宜的微生物或细胞系，DNA经过表达和翻译后生成蛋白质，再经提取和纯化而回收所需制品制得。细胞因子类、生长因子类、激素类、酶类疫苗、诊断用品第二节、生物制品的质量要求生物制品的安全性1.异源性生物活性大分子物质2.性质不稳定，易变性失活

3.易受微生物污染生物制品的有效性生物制品的可接受性因生化药物的来源复杂，不同的原材料和生产工艺得到的产品的质量会有差异，包括主要成分的含量、比例，以及其它成分的种类和/或含量等，而这些差异往往质量标准反映不出来，从严格意义上说，生化药物没有仿制。所以，在进行生化药物研究时首先要基于“不可仿制”来考虑问题。

1、注重原材料和工艺过程控制，结合质量标准，较全面地控制产品质量。2、产品上市后不要轻易更换原材料变更生产工艺、改换剂型、延长有效期等。如果需要进行以上变更，应针对变更情况对产品的质量、安全性和有效性的影响进行相应的研究工作包括药学、药理毒理和临床研究。3、因为生化药物的质量是靠全程控制来保证，其原液（或半成品）应不可以自由销售，否则不仅增大了流通环节染菌的可能性，又不利于成品全程的质量控制。4、动物源性病毒的灭活工艺及验证是一个需要研究和探讨的课题。因为人们对动物源性病毒的认识，以及动物源性病毒与人类感染性疾病的关系的认识是在逐步地深入，对病毒的灭活和工艺验证也会随着人们认识的提高而不断地趋于更科学和合理。

1918年的西班牙流感由H1N1亚型流感病毒引起，是历史上最为严重的流感大流行，全球约20亿人感染，4000万人死亡。

1957年的亚洲流感(H2N2)首发于中国贵州，8个月内席卷全球，全球至少100万人死于这场灾难。

1968年香港流感(H3N2)至少波及世界55个国家和地区，造成全球150万~200万人死亡。通过对这3次流感疫情的研究发现，引起疫情发生的病原都同动物流感病毒有着不可分割的关系。第三节、鉴别试验依据生物制品的生物学特点，利用免疫学方法来判断与确证产品的真伪。免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。抗原抗体反应的特点主要有三性：即特异性、比例性、可逆性。

特异性。是抗原抗体反应的最主要特征，这种特异性是由抗原决定簇和抗体分子之间空间结构的互补性确定的。

比例性。是指抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时才出现可见反应。而当抗原抗体比例超过此范围时，反应速度和沉淀物量都会迅速降低甚至不出现抗原抗体反应。

可逆性。是指抗原抗体结合形成复合物后，在一定条件下又可解离恢复为抗原与抗体的特性。1.免疫双扩散法原理为相应的抗原与抗体，在琼脂凝胶板上的相应孔内，分别向周围自由扩散。在抗原和抗体孔之间，扩散的抗原与抗体相遇而发生特异性反应，并于两者浓度比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀线，证明有抗原和抗体反应发生。2.免疫电泳法免疫电泳法是指利用在电场作用下标本中各组分因电泳迁移率不同而分成区带，然后与抗体进行双向免疫扩散，在适当比例处形成沉淀线。根据沉淀线的数量、位置及形状，以分析标本中所含组分的性质。

3.免疫印迹法供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。4.免疫斑点法

ChP2010-重组人干扰素α2a5.酶联免疫法

ChP2010-抗毒素和抗血清制品第四节、生物制品的检查安全性毒性试验；防腐剂试验；热原质试验；有关安全性的特殊试验安全性和效力检定效力检定浓度测定；动物保护率试验；活菌率或病毒滴度测定；免疫抗体滴度测定；稳定性试验。检查项目：1.物理性状检查：外观、溶解速率、装量2.蛋白质含量测定：凯氏定氮法3.防腐剂和灭活剂含量测定：苯酚、甲醛4.纯度检查：电泳法、HPLC5.相对分子量或分子大小测定6.其他检查：水分、酸碱度、氯化钠7.安全性检查7.1检查对象

菌种和主要原材料半成品（包括原液）成品生物制品的全程质量控制7.2检查内容

7.2.1过敏性物质检查

过敏性试验：抗血清要检查异体蛋白牛血清含量测定血型物质检测：避免溶血（人血白蛋白）7.2.2杀菌、灭活和脱毒检查

死菌苗、灭活疫苗及类毒素制品需做无菌检查、活毒检查、解毒试验7.2.3残余毒力和毒性物质检查残余毒力检查：减毒活疫苗无毒性检查毒性试验

死菌苗、组织培养疫苗、白蛋白防腐剂检查

除活菌苗、活疫苗及输注用血液用品7.2.4外源性污染检查

野毒检查热原检查乙型肝炎表面抗原：血液制品8.生物制品的效力测定8.1免疫力试验定量免疫定量攻击法

变量免疫定量攻击法：50%有效免疫剂量测定定量免疫变量攻击法：保护指数测定被动保护力测定8.2活菌数和活病毒滴度测定活菌疫苗需测定活菌率8.3血清学试验：

测定抗体水平或抗原活性9.杂质检查特殊杂质检查生物污染物：微生物污染、细胞成分、外源DNA、培养基成分产品相关杂质：聚合物、降解物工艺添加剂：抗生素、防腐剂9.1.宿主细胞蛋白残留量检查控制异源蛋白以防超量后引起机体免疫反应特别是需反复多次注射的药品方法：酶联免疫吸附剂测定法9.2.外源性DNA残留量的检查