业助客户文章等白色念珠菌对口腔扁平苔藓角质形

Toll白色念珠菌（Candidaalbican,C.albicans）是人类最常见的条件致病真菌，正常人带菌率以口腔最高，约80%[1]，而由白色念珠菌所引起的口腔黏膜病是人类最常见的真菌。近年来，随着临广谱抗生素、皮质类固醇及免疫抑制剂等的广泛应用，以及移植、、和患者的增多，口腔白色念珠菌的病例呈几何级数上升。除引起口腔黏膜多种外，念珠菌与口腔黏膜癌变的相关性也备受关注。Bhavasav等[2]研究显示白色念珠菌在癌前病变和肿瘤中为优势菌，Cawson等[3]也发现白色念珠菌的口腔癌前病变其率高达30%。国内Wu等[4]也证实念珠菌是口腔癌前病变的重要。而作为与白色念珠菌密切相关的口腔扁平苔藓（Orallichen OLP，[7]OLP21[8]。其致病性、性和耐药性均明显增加。念珠菌生物膜形是念珠菌黏附于宿主上皮细胞，上皮是防御是念珠菌黏附于宿主上皮细胞，上皮是防御 的第一探讨白色念珠菌与宿主细胞的相互作用已成为国内外启动的启动的 ”，是引起炎症反应的关键分子，它们能够瘤中起重要作用[11]。而目前关于OLP机制的研究国内外主要集中于相关表达和信号通路两方面。NF-κB作为信网络与OLP慢性炎症迁延不愈 OLPOLP而角质形成细胞内TLRs 白色念珠菌对OLP角质形成细胞Toll样受体信号通路的影响及其在OLP致病中作用的研究在国内外尚属空白。目前，国上皮细胞的增殖、凋亡、促炎症反应及机制的研究菌的OLP患者炎症迁延不愈、率增加且尚缺乏特异延不愈及细胞凋亡异常是OLP的重要发病机制之一，假疫桥梁的TLRs这一炎症反应启动“的重要分子参与了调节宿主上皮炎症及细胞凋亡异常过程的理论。为此，我课题小组期市科委科技攻关项目《NF-κB在口腔扁NF-κB及其下游细胞因子在调节OLP宿主上皮炎症及细胞凋亡异常过程中的作用，并在国家自然科学基金的协助下成功构建了稳定可重复的体外人OLPNF-κB信号通路在此工作基础上，对本课题小组拟通过体外白色念珠菌人OLP角质形成细胞，引起角质形成细胞内蛋白表达变化的细胞学行为，探讨白色念珠菌对OLP角质形成细胞胞内段与OLP致病机制及机制，为疾病的诊断和治疗提供理论点的基础研究，OLPTLRs的蛋白及表达水平的差异的检测，以初步阐明[1]同口腔粘膜病学(第二版)人民卫生BhavasarRS,GojeSK,TakalkarAA.DetectionofCandidabycalcofluorwhite.Acta.Cytol.2010,54(5):679-684LanWu,JinqiuFeng,LinjunShi.Candidalinfectioninoralleukokia:aclinicopathologicstudyof396patientsfromeastern.AnnalsofDiagnosticPathology2013,17:37-40周红梅，，，等.口腔扁平苔藓研究进展及争[J].中国实用口腔科vanderMeijEH,SchepmanKP,SmeeleLE,etal.Areviewofdiseasemodelforstudyingchronicinfltionandoralcancer[J].MEDICALHYPOTHESES,2010,75(6):492-494.，园刘宏伟.940名中国扁平苔藓患者的相关因素分析。第八次口腔黏膜病大会集,2012Oct7th-9th，P153，Jainkittivong,A.,etal.,Candidainorallichennuspatientsundergoingtopicalsteroidtherapy[J].OralSurgOralMedOralPathol,2007.104(1):61-66，，章强强.萎缩糜烂型扁平苔藓患者不同型白.2011,20（3：300-HallmanM,RametM,EzekowitzRA.Toll-likereceptorsassensorsofpathogens.PediatrRes,2001,50(3):315-321GeY,XuY,SunW,ManZ,ZhuL,XiaX,ZhaoL,ZhaoY,X.ThemolecularmechanismsoftheeffectofDexamethasoneandCyclosporinAonTLR4/NF-kBsignalingpathwayactivationin nus.Gene.2012508(2):157-andandTLR-4intheepithelialcellsinoral nus.ArchBiol,2012.57(5):p.495-OhnoS,TateishiY,TatemotoY,MorishitaK,SasabeE,YamamotoT.Enhancedexpressionoftoll-likereceptor2inorallichennus.JDermatol2011;38(April(4)):335–44.SiponenM,KauppilaJH,SoiniY,SaloT.TLR4andTLR9areinducedinorallichennus.JOralPatholMed.2012WächtlerB,CitiuloF,JablonowskiN,FörsterS,DalleF,SchallerM,WilsonD,HubeB.Candidaalbicans-epithelialinctions:dissectingtherolesofactivepenetration,inducedendocytosisandhostfactorsontheinfectionprocess.PLosRicardoSergioCoutodeAlmeida,IoniceFelipe.ApoptosisofphagocyticcellsinducedbyCandidaalbicansandproduction2、明确白色念珠菌OLP角质形成细胞与未白色念珠IL-10、IL-2WHOOLP，液体培养基中振荡培养然后接种计数细胞悬浮液。2OLPTLRs，检测MyD88及蛋白的表达量检测NF-ΚB及蛋白的表达量为了比较和未白色念珠菌的OLP角质形成细胞OLP无菌操作切取病损区黏膜,将组织置于含双抗和两性霉DMEMPBS0.25%Dispase4%11~PBS3次,置于盛有混合消化0.05%胰蛋白酶：0.02%EDTA=1：137%振荡消化5min,小牛终止消化,用吸管吹打成单细胞1000rmin,5min37%、5%CO22-3d1倒置相差显微镜下动态观察细胞形态变化和生长增殖80%37℃的沙堡液体培养基中振荡培血细胞计数仪计数，一个克隆形成单位(colonyformation4细胞悬浮液的：取标准菌液100µl接种于已放入2437℃90min，弃去菌液,PBS3遍,除去未黏附细胞。3TaΚaRaTLR-2：5‘GCCAAAGTCTTGATTGATTGG‘下游引物：5TTGAAGTTCTCCAGCTCCTG‘5µlRNA1RNA(5)TLR-2mRNATLR-2SantaCruz的测定；SDSMyD88：5‘TAAGAAGGACCAGCAGAGCC3’下游引物：5CATGTAGTCCAGCAACAGCC3’MyD88抗体于Bioss公司8NF-κBRT-PCRp655‘AGAGGAGCACAGATACCA5‘TTGGAAGGGGTTGTTGTTG3’P505‘CAATTTTTCGGATAGTTTCGG5‘CTTGCTCTGTGGTTTCAATAASantaCruz采用流式细胞仪检测白色念珠菌和不的OLP角（2）1％多聚低温下固定0.1％Triton-X100PBS1（9）1mlPBS（5mg/mlPI,0.1％RNaseA）本课题小组拥有良好的，具有从事解剖、黏膜组织病理学、细胞培养、生化及分子生物学研究相关设备（包CO2透射电镜、细胞甩片机、低温冰箱、垂直电泳槽、电泳仪、孵育箱、同位素闪烁仪等）。数据、图像处理室及相关图像处理设备，能满足图像处理和数据分析的要求。同时我们拥有华山医院皮肤科真菌室，可以提供白色念珠菌标准株及各种临床株的培养、鉴定、筛选、分离、纯化、细胞离心机，并拥有-80℃冰箱可以冻存分离纯化的菌株。我院常规设立OLP专病门诊，每年OLP病例近1000例，OLP80℃冷冻保存。常规设立口腔黏膜专病门诊，我们已