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1.1DNA重组技术的基本工具限制性核酸内切酶——“分子手术刀〞DNA连接酶——“分子缝合针〞运载体——“分子运输车〞分子手术刀——限制性核酸内切酶(限制酶)1.来源:主要从原核生物中别离纯化想一想:这类酶在原核生物中起什么作用?为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？2.作用:4.识别序列:1、识别特定核苷酸序列；2、切开特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。3.切割后产生的DNA片段末端的形式：黏性末端或平末端一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列EcoRI限制酶被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？黏性末端是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。以下黏性末端属于同种内切酶切割而成的是

A、①②B、①③C、①④D、②③TCGAGCTTAAAGGTTCCAAGCTTCAGAATTCG③①②④ADNA连接酶G

AA

TT

CC

TT

AA

GG

AA

TT

CC

TT

AA

GGC

TT

AA

AA

TT

C

GG

C

TT

AA

AA

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C

GGC

TT

AA

AA

TT

C

G用同种限制酶切割“分子缝合针〞————DNA连接酶分类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶想一想:DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么?DNA聚合酶DNA连接酶区别1区别2相同点寻根问底DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么?1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板作为载体的必要条件：1、能自我复制或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制；2、有一或多个限制酶的切割位点；3、必须带有标记基因；4、必须是平安的，不会对受体细胞有害；5、大小应适宜，以便提取和体外操作。基因的运输工具——运载体基因的运输工具——运载体

质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。

常用的运载体：

质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。限制性核酸内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—GGATCC—，限制性核酸内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。1、请画出质粒被限制性核酸内切酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。2、请画出目的基因两侧被限制性核酸内切酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。1、以下不属于基因工程的运载体的是〔〕A、质粒B、噬菌体C、细菌D、病毒C2、判断：A、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、重组技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、运载体3、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用〔〕A、同种限制酶B、两种限制酶C、同种连接酶D、两种连接酶原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的平安。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而到达保护自身的目的。含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。限制酶在原核生物中的作用T磷酸二酯键1234512345A

EcoRⅠ黏性末端黏性末端

EcoRⅠ黏性末端黏性末端