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文档简介

第三节分光光度测定方法一、普通分光光度法二、示差分光光度法三、双波长分光光度法一、普通分光光度法1.单组分的测定通常采用A-C标准曲线法定量测定。2.多组分的同时测定⑴假设各组分的吸收曲线互不重叠，那么可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。⑵假设各组分的吸收曲线互有重叠，那么可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。Aλ1=εaλ1bCa＋εbλ1bCbAλ2=εaλ2bCa＋εbλ2bCb二、示差分光光度法普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差，可需采用示差法，即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。

设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs<cx)。那么：Ax=εbcxAs=εbcsΔＡ＝Ａx－Ａs=εb(cx－cs〕=εbΔc测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔＡ。三、双波长分光光度法

不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。

ΔA

＝Aλ2－Aλ1＝(ελ2－ελ1)bc

两波长处测得的吸光度差值ΔA与待测组分浓度成正比。ελ1和ελ2分别表示待测组分在λ1和λ2处的摩尔吸光系数。

关键问题:测量波长λ2和参比波长λ1的选择与组合以两组分x和y的双波长法测定为例：设：x为待测组分，y为干扰组分，二者的吸光度差分别为:ΔAx和ΔAy，那么该体系的总吸光度差ΔAx+y为：ΔAx+y=ΔAx+ΔAy如何选择波长λ1、λ2有一定的要求。选择波长组合λ1、λ2的根本要求⑴选定的波长λ1和λ2处干扰组分应具有相同吸光度，即：ΔAy=ΔAyλ2－ΔAyλ1=0故：ΔAx+y=ΔAx=(εxλ2－εxλ1)bcx此时：测得的吸光度差ΔA只与待测组分x的浓度呈线性关系，而与干扰组分y无关。假设x为干扰组分，那么也可用同样的方法测定y组分。

可采用作图法

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