细胞系的生命期

细胞系的生命期原代培养

Primaryculture原代培养Primaryculture概念

从体内取出组织细胞开始培养到

第一次进行传代之前的时期

一个特征性的必然的生长阶段。

完成了从体内环境到体外环境的

过渡和适应过程，

恢复了分裂增殖与

生长发育的能力含义:包含

)①原代培养实质是初次培养，即培养物接种到培养器皿

中就不再分割，任其生长繁殖

②原代培养中的“代”

并不是指细胞繁殖的“代”数

③原代培养过程中不分割培养物

不等于不更换培养液建立方法:

组织块法,分散(细胞悬液）法时间:一般~4周

(代：细胞自接种至新培养皿中至其下一次再接种传代的时间为细胞的一代)特点(1)性质

①性状似体内

可表达某些形态、结构、功能,更能

代表活体细胞最接近在体时的情况

②细胞异质性

细胞成分混杂，除目的细胞之外，

其它各种细胞还存在

③细胞活跃移动，分裂不旺盛

④相互依赖性强

独立生存能力差,不易单个培养特点(2)发展过程:调整组成

原代培养的产生--选择

结果:形成相对均一的细胞系选择第一步:形成原代培养的基础

组织块:能迁移出的

消化分散:操作中能生存、附着

能悬浮生存

特点-发展过程选择第二步:

时间：数小时后至铺满

(汇合confluence)

变化：数小时后至进一步选择中

3种情况:能增殖

能存活

不能存活

细胞类型,继续改变,至铺满

(铺满:贴附生长的细胞在培养器皿中生长达到一定数

量彼此连接成单层长滿器皿底壁)特点-发展过程选择第三步:

时间：铺满(汇合confluence)后

(可用于生长区域已被利用)

变化：通过密度抑制

密度抑制敏感的细胞(如正常细胞)

密度抑制敏感低的细胞(如永生性细胞)

特点-发展过程需及时传代

传不传代及何时传代

根据：

接种的细胞数量

培养瓶皿的大小

培养条件

在一定程度上具有可人为操作的特征

传代期--细胞系

Subculture--Cellline

传代期--细胞系Cellline概述

将原代培养物经过分割，重新接种

到两个或两个以上的器皿内进

行培养，进入传代培养期

整个培养过程的主要时期

原代培养物----要经过反复传代

传代培养期

并不单指原代培养物经首次传代

后的“第一代”培养过程

而是指由首次传代开始经

反复传代一直到培养物

开始衰退之前的全部时间

传代：细胞生长繁殖一段时间，到达一定细胞密度后，就应将细胞分离成二或

几部份至新的培养器皿并更新补充培养液，使之继续繁殖生长，即传代。经过传代即称为细胞系

细胞系可以继续传代传代培养期就是

维持细胞系增殖、生长的培养过程传代培养期的长短：

培养的细胞种类

供体年龄大小一般是有限细胞系特点

细胞分裂增殖活动旺盛，细胞生长活跃

细胞群体在调整：每次传代,调整-

因增殖能力、耐受力差异

增殖能力较强的细胞渐处于优势

其它逐渐淘汰

传代培养早期，细胞尚能保持二倍体核型

随着传代次数增加

细胞发生转化的概率增大

能维持的代数

一般是有限细胞系

种族(主要):成纤维细胞

人,50;

猴,40;

鸡,37;鼠,8

部位:人:胚肺50±10;

肾8~19

猴:肺5;

肾20;

耳40

条件:如表皮细胞+EGF

从50代

增加至150

年龄

传代的频率

原则上

贴壁生长将长满培养罪皿的生长面(器皿的底壁)

悬浮培养下细胞密度足够大

具体时间并没有定时，

根据具体情况，但提前或过晚(尤以后者)都不合适

一般:数天~一周

因素:

接种细胞数量:量大-快

接种细胞性质:细胞系比原代-快

培养液:高血清-快意义

生物学意义:形成较均一的细胞

实际意义:

优点:可传代,有特征,数目多,均一性,

可冻存

缺点:遗传学可改变,失去分化衰退期Senescencephase衰退期Senescencephase

概述仍生存,但基本不增殖-衰退,死亡

传代培养到一定的代数时，

细胞的生命活动明显减弱。

细胞虽然生存，但生长缓慢、

很少分裂增殖甚或不再分裂，

即使及时换液也无效

表明培养物已经进入衰退期，

再向前发展，只有退化、死亡

特点:细胞系的生命期--归宿

有限细胞系:

一般

衰退、死亡

转化:永生化:

--连续细胞系

自发性转化

诱导转化

永生化端粒端粒

在真核细胞染色体两端功能：保护染色体的稳定性和完整性以维持DNA完整复制

生理情况下---细胞分裂---

染色体端粒丢失---至一定程度---

DNA复制不进行---停止分裂

∴正常细胞---增殖潜能有限---

若干代分裂后---有限细胞系瑞拉酶

端粒的长短

肿瘤细胞与正常体细胞不同，

瑞粒不随分裂

-变短

保证此特殊-机制-

端粒酶端粒酶可催化、合成并维持瑞粒一定的长度

其激活可使细胞-无限增殖能力肿瘤细胞：端粒酶活性高

端粒长

无限增殖自发性转化:偶而,个别通过危机--转化

培养的细胞，由于尚不明确的原因---

使培养的细胞发生自发的转化

转化细胞的性状可传递给予代细胞

来源细胞:2种可能

转化因素:种族来源

正常细胞:人0;

鸡0;

鼠较易

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诱导转化

诱导因素:化学、幅射、病毒等

诱发培养细胞的转化因素凡能改变DNA(基因)结构的因素

都可能成为诱发细胞转化因素。如

①化学因素：如MNNG（甲基硝基亚硝基胍）

②物理因素：射线，包括放射性核素等.

③病毒:SV40,逆转录病毒等.

④癌基因:衰退期不同于每一代培养细胞的停滞期

处于衰退期的细胞以任何方法都不能阻止

其向死亡方向发展。

可见细胞轮廓增强，细胞质内出现暗的颗粒样结构及空泡状结构

胞质突起回缩,有时可脱落

转化细胞主要特点

获得无限传代性(即永生化)

生长速率加快

无序的生长形式

贴壁能力降低接触抑制丧失--平板克隆(集落)形成密度抑制降低对培养基血清依赖性减少

锚着依赖性的丢失和可在软琼脂中形成集落(克隆)

细胞克隆:指由同一个祖细胞分裂增生而来的

一