一种靶向复合体的订书钉肽可抑制癌细胞侵袭

一种靶向复合体的订书钉肽可抑制癌细胞侵袭第1页，课件共23页，创作于2023年2月第2页，课件共23页，创作于2023年2月12344IntroductionMaterialsandMethodsResultsDiscussionContents第3页，课件共23页，创作于2023年2月1.Introduction综合征蛋白家族成员（WASF）包括WASF1，WASF2和WASF3，这些成员与细胞运动有关，如创伤修复（woundhealing）,神经元迁移（neuronalmigration）,趋化运动（chemotaxis）,免疫细胞激活（immunecellactivation）。机制：WASF蛋白的C末端携带VCA粒子可与单体肌动蛋白或ARP2/3复合物结合，从而促进肌动蛋白的复合及蛋白骨架的重组。WASF的基因在健康细胞中处于静默状态，经过酪氨酸残基的磷酸化作用或与Rac蛋白结合后，WASF被活化，解除其构象限制。第4页，课件共23页，创作于2023年2月WASF3的基因可促进细胞移动、侵袭和新陈代谢，在高度侵袭性的乳腺癌和前列腺癌细胞中可高水平的持续性表达。1、调节KISS1,ZEB1,及miRNA-200s等蛋白2、被JAK2,HSP70,ABL,及HIF1蛋白调节3、与ATAD3A线粒体蛋白相互作用从而调节它在线粒体膜上的稳定性WASF3与其它蛋白相互作用形成CYFIP1–NCKAP1二聚体(主要)或ABI2–HSPC300–WASF三聚体发挥作用，第5页，课件共23页，创作于2023年2月“stapledpeptides”：WASFHelixMimics(WAHM)优点：化学结构稳定，细胞透性强，抗蛋白酶降解缺点：近来才被应用于生物治疗学方面，仍面临挑战，但有些研究已进入I期临床试验阶段。研究人员证明stapledpeptides可阻断WASF3与CYFIP1之间的相互作用从而能够抑制WASF3的功能。第6页，课件共23页，创作于2023年2月2.

MaterialsandMethods2.1.Stapledpeptidesynthesis：standardFmocsolidphasepeptidesynthesisMw：2291.4(expected：2291.8),Mw：2305.2(expected：2305.8),Mw：2291.4(expected：2291.8),Mw：2305.8(expected：2305.8),2.2.MolecularreagentsandconstructsshRNAs,shCYFIP1,WASF2andWASF3antibodies,antibodiesagainstCYFIP1,NCKAP1,WASF1,Rac1,andRac2,antibodiesagainstPY20andb-actin,HSP90inhibitor17-AAG.第7页，课件共23页，创作于2023年2月Celllines:MDA-MB-231cells,DU145cellsstandardassays:Lentiviraltransduction,cellproliferationassays,wound-healingassays,Transwellinvasionassays,Westernblotting,flowcytometry,andreal-timeRT-PCRanalysis2.3.Celllinesandstandardassays2.4.Quantitationoffilamentousactin2.5.Immunoprecipitationassays2.6.DetectionofMMP-9secretioninculturesupernatantbyELISAassays2.7.Experimentalmetastasisassays第8页，课件共23页，创作于2023年2月3.1.LossofCYFIP1proteinleadstoWASF3instability,resultinginsuppressionofinvasion3.

Results第9页，课件共23页，创作于2023年2月Thesedatasuggestthatdisruptingtheprotein–proteincomplexinvolvingCYFIP1couldleadtosuppressionofinvasionbyaffectingWASF3function.第10页，课件共23页，创作于2023年2月3.2.RoleofWASFfamilymembersininvasionandmetastasis第11页，课件共23页，创作于2023年2月第12页，课件共23页，创作于2023年2月Theseobservationssuggestthat,althoughtheWASFproteinshavebeenimplicatedincellmovement,onlyWASF3isparticularlyandspecificallyassociatedwithinvasionandmetastasisofcancercells.第13页，课件共23页，创作于2023年2月3.3.TargetingtheCYFIP1–WASFinteractionwithstapledpeptides第14页，课件共23页，创作于2023年2月TodeterminewhetherthestapledpeptidesformedacomplexwithWASF3withinthecells,MDA-MB-231cellswereexposedtobiotinylatedWAHM1andWAHM2for6hours,afterwhichthecellswerelysedandpulldownassayswereperformedusingavidin-coatedbeads.第15页，课件共23页，创作于2023年2月3.4.WAHM1/2peptidessuppresscancercellmotilityandinvasion第16页，课件共23页，创作于2023年2月Thus,targetingtheCYFIP1–WASF3interactionwithstapledpeptidesaffectscancercellcytoskeletonorganization,motility,andinvasion,consistentwithknockdownofWASF3functionachievedbyothermeans.第17页，课件共23页，创作于2023年2月ShRNAknockdownofCYFIP1leadstoWASF3proteindestabilization(Fig.1).Inthestapledpeptidetreatedcells,however,therewasnochangeinWASF3proteinlevelscomparedwithcontroltreatedcells(Fig.3andSupplementaryFig.S3).Thus,targetingtheWASF3complexwithWAHM1/2doesnotleadtoitsdegradationasseenfollowinggeneticknockdownofanyofthethreeWASFproteins,eventhoughinvasionandmigrationaredramaticallyaffected.3.5.WAHMtreatmentleadstolossofWASF3activation第18页，课件共23页，创作于2023年2月ThesedatasuggestthattheinactiveformofWASF3ismoresusceptibletodegradationfollowingdisruptionoftheCYFIP1–WASF3complex.第19页，课件共23页，创作于2023年2月3.6.WAHM1/2suppressesMMP9secretionthroughinactivationofWASF3第20页，课件共23页，创作于2023年2月3.7.WAHMpeptidesdisruptthebindingofRac1/2totheWASF3complex第21页，课件共23页，创作于2023年2月4.1.研究发现WASF3蛋白能够促进癌细胞侵袭，科学家们通过一种订书钉肽阻断该蛋白与另外一个帮助其维持功能的蛋白的相互作用，发现能够抑制具有高度侵袭性的人类乳腺癌和前列腺癌细胞的转移能力。4.2.CYFIP1蛋白↓，WASF3基因↓，细胞侵袭能力↓，证明破坏此WRC复合体对其作用的影响。4.3.用WAHM肽（可靶向CYFIP1-WASF3α螺旋界面）处理细胞并不影响WASF3基因水平，而是通过影响WASF3的磷酸化而发挥作用。4.4.Rac键合作用不会破坏WRC复合体，但会导致其构象变化WAHM肽与WRC复合体相互作用影响Rac键合作用。4.5.与细胞侵袭相关的信号通路的下调也与WASF3基因有关，例如由于WASF3所致的KISS1和MMP-9水平的变化，从而影响细胞活动。4.

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