第八章动物实验的基本方法

第八章动物实验的基本操作技术遵循动物保护、保证动物福利的原则不造成动物的应激反应和伤害不造成动物实验人员自身的伤害确保实验结果的准确可靠第一节实验动物的抓取和固定一、大、小鼠的抓取和固定抓取方法固定方法

徒手固定固定板固定固定架固定简易固定PlacingamouseonacagelidandgraspingthelooseskinbehindtheearsbythethumbandforefingerPushthemouseintotherestrainerLeavethetailofthemouseoutsidethecoveroftherestrainerLettheratrelaxesonthetopofthelid.Stretchthebodyoftheratbypullingupit’stailandthencovertheratwithatowelbyyourlefthandFoldtheskirtsoftowelundertheratfromalldirectionsGraspupthelefthindlimboftherattoexposetheabdomen点击图片，播放视频固定方法二、豚鼠的抓取与固定

抓取方法固定方法

徒手固定

固定板固定

抓豚鼠时，一般不要抓腰腹部位，否则易造成肝破裂而引起死亡三、家兔的抓取与固定抓取方法

徒手固定固定方法

盒式固定

台式固定四、犬的抓取与固定抓取方法固定方法慢性试验中犬的固定方法急性试验中犬的固定方法

头部的固定

四肢固定第二节性别鉴定一般情况下，哺乳类动物性别依据动物的肛门与外生殖器之间的距离加以区分。雄性要比雌性的距离更长。Sexingmice-Thedistancebetweentheanalandgenitalorificesisgreaterinthemale(left)comparedtothefemale(right).SexingRat-thedistancebetweentheanalandgenitalorificesisgreaterinthemale(left)comparedtothefemale(right)SlightpressureisappliedtotheexternalgenitaliatoexposethevulvaofafemalebunnySlightpressureisappliedtotheexternalgenitaliatoexposethepenisofamalebunnyAfemalerabbitAmalerabbit第三节动物的编号、标记及去毛方法

一、动物的编号与标记常用的标记液：①3%～5%苦味酸溶液（黄色）②0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）③2%硝酸银溶液（咖啡色，涂后需光照10分钟）④煤焦油酒精溶液（黑色）编号原则：先左后右，从前到后。左前肢记为1号，左侧腹部为2号，左后肢3号，头顶部为4号，腰背部5号，尾基部6号，右前肢7号，右侧腹部8号，右后肢9号。编号超过10时，可使用两种不同颜色的溶液，把一种颜色作为个位数，另一种为十位数。穿耳孔法

用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法，原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。实验动物：兔、犬、猪标牌法一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。实验动物：犬、猴烙印法剪毛法二、实验动物被毛的去除方法

1.剪毛法2.拔毛法3.剃毛法4.脱毛法

常用的化学药品：硫化钡（BaS）、硫化钠（NaS）、硫化钙（CaS）四、动物的麻醉方法常用的麻醉剂1.

挥发性麻醉剂:乙醚、氯仿等2.

非挥发性麻醉剂：苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、硫喷妥钠等巴比妥类的衍生物，盐酸氯胺酮、水合氯醛等3.中药麻醉剂：洋金花、东莨菪碱等动物的麻醉方法1．全身麻醉①吸入法:②腹腔和静脉给药麻醉法2.局部麻醉:盐酸普鲁卡因、盐酸可卡因常用麻醉药的剂量及注射途径种类戊巴比妥硫贲妥钠盐酸氯胺酮水合氯醛乌拉坦mg/kg途径mg/kg途径mg/kg途径mg/kg途径mg/kg途径小鼠3550IVIP2550I.V.IP22～44IM400IP--大鼠2550IVIP2040IVIP22～44IM300IP0.75IP豚鼠3040IVIP2055IVIP22～44IM200～300IP1.5IP家兔3040IVIP20IV22～441.0IVIP狗30IV25IV125IV1.0IV猪<45kg>45kg30-2015IVIV10～95IVIV10～1510-15IMIM麻醉注意事项:①静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张性、角膜反射和对皮肤夹捏的反应，当这些活动明显减弱或消失时，停止注射。②麻醉时要注意保温。保温方法有：实验桌内装灯，电褥，台灯照射等③作慢性实验时，在寒冷季节，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平。④注意保持动物的呼吸道的通畅.

五、动物的给药途径和方法

实验动物的给药方法主要分为注射法和投入法两种，注射法又分为：皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、脑膜下注射、脑内注射、胸腔内注射、腰椎内注射、静脉注射、关节腔注射和心内注射等方法，投入法可分为：鼻腔内投入、胃腔内投入、肠管内投入、气管内投入以及经口腔投入。1.小鼠的给药途径和方法灌胃（i.g）:动物要固定好；头颈部保持平展；要沿着口角进针，再顺着食管方向插入胃内；决不可进针不顺就硬向里插。皮下注射（s.c）:常选用颈背部皮肤。皮内注射（i.d）:观察皮肤血管的通透性变化及观察皮内反应，多用于接种、致敏实验等。雄性较雌性皮肤紧密，注射难度大。肌肉注射（i.m）：较少应用腹腔注射（i.p）静脉注射（i.v）：一般采用尾静脉注射。小鼠尾部背腹各有一根动脉，两侧各有一根静脉。2.大鼠的给药途径和方法灌胃:左手按徒手固定方式固定大鼠,使大鼠伸开两前肢,手掌握住大鼠背。方法与小鼠相同。皮下注射：常选在左侧下腹部或后腿皮肤处，方法同小鼠。皮内注射：常选用背部脊柱两侧的皮肤，方法同小鼠。肌肉注射：一般选择股二头肌注射，但应避免伤及坐骨神经，否则会导致后肢瘫痪腹腔注射：用左手的大拇指、食指和中指从大鼠的前肢和头部后面抓住大鼠，同时用身体抵住大鼠的两后肢使之固定，使腹部向上并伸展，注射方法与小鼠相同。静脉注射：尾静脉点击图片，播放视频经口给药点击图片，播放视频注射给药3.兔的给药途径和方法灌胃：确保灌胃管插入胃内药液推完后将残留在灌胃管内的药物用水冲入胃内，确保给药剂量的准确皮内注射：背部脊柱两侧的皮肤皮下注射：背部和腿部皮肤肌肉注射腹腔注射静脉注射：耳缘静脉DisinfectofskinonthetopofthighmuscleInsertneedleperpendiculartothesurfaceofskinandinjectthesubstanceinsidethesyringeDisinfectofinjectionsiteby75%alcoholdirectlyor75%alcoholcottonballPinchtheskinupandinserttheneedleinforinjectionKeeptheneedletipinskinforawhileafterinjectiontopreventleakageofsubstancefromtheneedlewhichduetoimbalancepressureofemulsioninsidethesyringe.EarveinbeforeadministeringoftranquilizerEarveinafteradministeringoftranquilizerInsertneedleintotheearveinwithneedletipsurfacefaceup第六节动物血液的采集方法1.大小鼠的血液采集方法眶静脉丛（窦）采血（多次重复）：轻压颈部两侧，眼球充分外突眶动脉和眶静脉取血（大量采血）：尽量使动物眼周围皮肤往眼后压，眼球突出充血，弯头镊迅速夹去眼球尾静脉采血：剪尾或切开尾静脉：将尾巴在热水中浸泡数分钟或用酒精/二甲苯反复擦试针刺尾静脉其它：心脏采血、大血管采血等点击图片，播放视频采血方法2.兔、豚鼠的血液采集方法耳中央动脉采血：兔耳缘静脉采血：兔心脏采血：兔、豚鼠颈动（静）脉采血：背跖静脉采血：豚鼠FixthepositionofneedlebyyourleftthumbandwithdrawbloodfromtheearveinPressacottonballonthetopoftheinjectionsitebeforepullouttheneedle.Applycliponthetopofthecottonballfor2-3minutestostopfurtherbleedingApplysameprocedureascollectingbloodfromearveinforbloodcollectionfromeararteryRestraintheanesthetizedrabbitonthesurgicaltableRemovethehairaroundtheneckareaMakea5cmopeningonthemiddlelineoftheneckSearchthecarotidarterywithatissueforcepsandahomeostaticforceps.IsolatethecarotidarteryfromthevagusnerveandotherconnectivetissueTieupthedistalendofthecarotidarterybysilksutureCliptheproximalendofthecarotidarterywithabulldogclampInserta16GintravenouscatheterintothearteryFixthepositionofthecathetertipbytwosilksutureknotsReleasethebulldogclampandcollectbloodfromthearterythoughthecatheterintothecentrifugetube3.犬的血液采集方法前后肢皮下浅层静脉采血：颈静脉采血隐动（静）脉采血股动脉采血心脏采血第七节动物的安乐死方法一、原则尽量减少动物的痛苦，避免产生惊恐、挣扎、喊叫注意实验人员的安全方法容易操作不能影响实验结果尽可能缩短致死时间判断是否死亡时不仅要看呼吸，而且要观察神经反射、肌肉松弛等情况二、方法颈椎脱臼法：大、小鼠、豚鼠、兔空气栓塞法：兔、猫、犬放血法：大、小鼠、豚鼠、兔、猫、犬断头法：大、小鼠、沙鼠药物法：药物吸入：大、小鼠、豚鼠等；CO2、CO、乙醚、氯仿等药物注射：兔、犬静脉注射氯化钾、巴比妥类麻醉剂、DDT等点击图片，播放视频善待动物结语实验动物科学作为一门新兴的综合性的交叉学科正以异乎寻常的速度不断取得新的进展，影响着生命科学的各个领域，成为生命科学研究的基石，成为医、药领域科技创新的基础支撑学科。实验动物科学已成为现代科学技术的组成部分，也是现代科学技术的