UW液联合丹参酮ⅡA对肢体IR损伤保护作用的研究课件

UW液联合丹参酮ⅡA对骨骼肌I/R损伤保护作用的研究

刘小林王洪刚李智勇中山大学附属第一医院显微外科研究背景游离组织的移植断肢（指）的再植骨筋膜室综合征的发生肢体主干血管的损伤或栓塞止血带的使用不当等缺血再灌注损伤的发生（I/R)肢体组织缺血性损害往往遗留难以处理的，不同程度的功能障碍研究背景有待解决的难题：

如何改善、提高恢复血供后肢体的功能？研究背景改善肢体功能减轻I/R损伤白细胞的活化氧自由基的产生细胞内钙超载能量代谢障碍内皮细胞自稳态失衡尽快恢复血流改善缺血组织的代谢清除自由基和减轻钙超载减轻炎症反应改善内环境疗效尚不理想仍是关注的热点研究背景器官移植成功的启示：

肝、胰、肾等器官移植领域中器官保存液的成功应用，为减轻移植器官I/R损伤、改善术后功能，取得良好的临床疗效。提示:合适的灌注保存液对减轻组织I/R损伤是有益的研究背景UW液成为目前标准的灌注保存液，在肝肾移植领域应用广泛,具有较强的抗氧作用.近年来异体手移植中,UW液作为灌洗和保存液并得以应用.为什麽选择UW液?References:1、裴国献，顾立强，林昂如等.异体手移植2例:中国广州经验.中华创伤骨科杂志,2000;2(2):101~1062、Jones,J.W.Successfulhandtransplantation.One-yearfollow­up.Louisvillehandtransplantteam.N.Engl.J.Med.2000;343:468UW液主要成分UWsolutionComponentUnitKlactobionate100mMRaffinose30mMMgSO45mMGlutathione3mMAllopurinol1mMKH2PO425mMAdenosine5mMInsulin40U/LDexamethasone8mg/LColloid:HES50g/LPenicillin200,000U/LpH7.4Osmolarity320mOsm/L辅助成分对UW液的影响

既往研究表明有效的辅助成分可能改善UW液的对组织的保护作用（如：抑肽酶，丁二醇－NO等)References:1.RobertsRF,NishanianGP,CareyJN,DarbinianSH,KimJD,SakamakiY,ChangJY,StarnesVA,BarrML.Additionofaprotinintoorganpreservationsolutionsdecreaseslungreperfusioninjury.AnnThoracSurg.1998Jul;66(1):225-30.2.Norden,M.A.,andRao,V.K.SouthardJH.ImprovedpreservationofrathindlimbswiththeUniversityofWisconsinsolutionandbutanedionemonoxime.Plast.Reconstr.Surg.100:957,1997.丹参酮ⅡA的作用

丹参酮ⅡA是从中草药丹参提取的一种有效成,研究表明其有清除氧自由基、稳定血管内皮功能和改善微循环等多种生物功能.丹参酮ⅡA联合UW液能否改善和提高对缺血组织的作用效果?研究目的探讨缺血期灌洗对骨骼肌I/R损伤程度的影响观察UW液和UW+TanⅡA液灌洗缺血肢体后骨骼肌I/R损伤程度，评估其作用效果。探讨丹参酮ⅡA的剂量与效应的关系，确定丹参酮ⅡA的有效剂量范围。

材料与方法建立模型

1、选择健康雄性SD大鼠，每组8只;约400～450g2、3%戊巴比妥钠（30mg/kg）行腹腔麻醉3、建立后肢缺血模型模型建立夹闭缺血插管灌洗

分组与处理夹闭股血管肢体缺血4h后，直接恢复血供6h肢体缺血3.5h后，应用UW液灌洗0.5h，恢复灌注6h肢体缺血3.5h后，分别UW+T(0.05~0.2mg/ml)液灌洗0.5h，恢复灌注6hI/R组UW液灌注组UW+T0.05灌注组UW+T0.1灌注组UW+T0.2灌注组UW+T0.05-0.2：

UW+Tanshinone(0.05~0.2mg/ml)检测指标激光多普勒监测骨骼肌血流量随灌注时间的变化测定静脉血中CPK、AST、LDH的基础含量及随灌注时间的变化测定缺血及再灌注后骨骼肌含水量、SOD、MDA、ATP酶的含量检测ICAM-1的表达及骨骼肌细胞凋亡情况研究结果骨骼肌血流灌注量的变化SkeletalmuscleluxuryperfusionwasobservedinI/Rrats.I/RGroupvsWashoutGroupsP<0.05-0.01luxuryperfusion血清CPK的含量变化Dataareexpressedasmean±SD.n=8inallgroups.bP<0.05,cP<0.01vsI/R;eP<0.05,fP<0.01vsUW.血清LDH的含量变化Dataareexpressedasmean±SD.n=8inallgroups.bP<0.05,cP<0.01vsI/R;eP<0.05,fP<0.01vsUW.血清AST的含量变化Dataareexpressedasmean±SD.n=8inallgroups.bP<0.05,cP<0.01vsI/R;eP<0.05,fP<0.01vsUW.骨骼肌水含量及MDA、SOD、ATPase含量

GroupWaterContent(%)MDA(nmol/mgprot)SOD(U/mgprot)ATPase(µmolPi/mgprot/h)I4-hR6-hI4-hR6-hI4-hR6-hI4-hR6-hI/R74.20±1.4779.83±1.656.23±1.0212.23±1.7222.62±1.6516.62±1.650.18±0.040.11±0.02UW72.16±1.38b78.92±1.614.81±0.82c

11.86±1.6926.53±1.83c17.95±1.690.23±0.05b0.13±0.02UW+T0.0572.25±1.35b75.55±1.57cf

4.32±0.78c7.86±0.91cf28.65±1.98ce20.87±1.85cf0.26±0.06c0.16±0.03ceUW+T0.171.75±1.32c74.26±1.52cf3.95±0.63ce5.82±0.85cf30.48±2.20cf26.36±2.03cf0.28±0.06c0.23±0.05cfUW+T0.271.77±1.30c74.19±1.49cf3.98±0.68ce5.80±0.87cf30.25±2.24cf26.53±2.10cf0.28±0.05c0.24±0.05cfDataareexpressedasmean±SD.n=8inallgroups.bP<0.05,cP<0.01vsI/R;eP<0.05,fP<0.01vsUW.骨骼肌中血管ICAM-1的表达正常骨骼肌中未见ICAM-1阳性的血管I/R组骨骼肌中血ICAM-1阳性率为：57.24±7.45%

骨骼肌中血管ICAM-1的表达UW组骨骼肌中血管ICAM-1阳性率为：45.18±5.56%;P<0.05vsI/R

UW+T0.05组中血管ICAM-1阳性率为：37.69±4.57%;P<0.01

vsI/R

骨骼肌中血管ICAM-1的表达UW+T0.1组中血管ICAM-1阳性率为：33.40±3.82%;P<0.01vsI/R

UW+T0.2组中血管ICAM-1阳性率为：33.76±3.90%;P<0.01vsI/R

骨骼肌细胞的调亡情况正常骨骼肌中未见TUNEL阳性细胞核I/R组骨骼肌胞核凋亡指数AI为:21.85±6.84%

骨骼肌细胞的调亡情况UW组骨骼肌胞核AI为:15.70±4.15%；P<0.05vsI/RUW+T0.05组骨骼肌胞核AI为:12.35±3.95%;P<0.05vsI/R骨骼肌细胞的调亡情况UW+T0.1组骨骼肌胞核AI为:9.40±2.75%;P<0.01vsI/R

UW+T0.2组骨骼肌胞核AI为:8.87±2.60%;P<0.01vsI/R讨论

灌注条件对灌注效果的影响

包括：灌注压力、灌注速度、灌注时间、灌注温度等故而不同研究的结果不尽相同，本研究中各组灌注条件均相同，目的在于探讨灌注液对研究结果的影响，灌注条件尚未探讨，有待进一步研究。讨论

1、乳糖醛酸盐和棉子糖是非渗透性大分子，对调整细胞容量具有重要作用

2、还原型谷胱苷肽和别嘌呤醇等具有较强抗氧化能力，能有效抑制氧自由基造成的组织损伤3、腺苷对改善细胞代谢具有重要作用

UW液对骨骼肌的保护可能与其成分密切相关：讨论

但本研究也发现UW液可能对血管内皮功能有一定影响，而导致组织血流量有一定下降：

这可能与内皮源性血管扩张因子减少,易引起血管痉挛有关讨论

TsuchidaT等应用大鼠缺血肢体模型研究发现，UW液灌洗后股动脉对乙酰胆碱的反应减弱，动脉扩张度下降，提示血管内皮的分泌功能部分受损。Reference：TsuchidaT,KatoT,YamagaM,IkebeK,OnikiY,IrieH,etal.TheeffectofperfusionwithUWsolutionontheskeletalmuscleandvascularendothelialexocrinefunctioninrathindlimbs.JSurgRes2003;110:266-71.讨论

AlperM等应用大鼠提睾肌模型研究发现，UW液灌洗后各级动、静脉直径，毛细血管密度均有不同程度的下降，而导致骨骼肌血流量减少。Reference：AlperM,OzekC,ErdemO,DenkM,ColenLB,PrewitR.EffectofUniversityofWisconsinandlactatedRinger’ssolutionstoischemia-reperfusioninjuryinisolatedcremasterflap.Microsur­gery2002;22:69-73.讨论

Reference：GeZD,HeGW.ComparisonofUniversityofWisconsinandSt.Thomas’hospitalsolutionsonendothelium-derivedhy­perpolarizingfactor-mediatedfunctionincoronarymicro­arteries.Transplantation2000;70:22-31

GeZD等在心脏研究中发现UW液可影响冠状动脉内皮功能，并认为这可能与UW液减少了心肌钾通道的开放有关。讨论本研究表明UW液联合丹参酮ⅡA优于单纯UW液的效果，提示丹参酮ⅡA可以作为UW液一种有效的辅助成分但丹参酮ⅡA是如何发挥作用？本研究尚未探讨，有待进一步研究！讨论

有研究表明丹参酮ⅡA可通过改变线粒体内呼吸链电子的传递过程，减少了氧自由基产生，进而减