分子标记物在妇科肿瘤中应用简版

逸仙妇瘤周三学术活动资料

分子标记物在妇科肿瘤中的应用曾韵洁中山大学孙逸仙纪念医院病理科

2015.11.11曾韵洁主任同意转发本课件因课件大小超过微信上限

删除了一些病理图片一、背景二、免疫组化染色及基因检测技术三、分子病理在妇科肿瘤中的应用内容目前医学发展趋势正在从“循证医学”向“个体化医学”和“精准医疗”发展(未来医疗发展的主流方向)

精准医疗是临床转化医学的组成部分，其目标之一是提供患者个体化诊断、鉴别及治疗(治疗策略依据患者而设计)同病异治 异病同治一、背景一、背景*基础研究与临床研究结合的趋势(转化医学)*病理学是连接基础与临床的重要桥梁和纽带，正在发挥越来越重要的作用。一、背景二、免疫组化染色及基因检测技术三、分子病理在妇科肿瘤中的应用内容诊断与鉴别诊断：CK、EMA、Vimentin、LCA确定转移性肿瘤的原发部位:：PSA、TTF-1、TG恶性淋巴瘤的诊断和分类：CD20、CD3、CD10评估肿瘤的生物学行为，并为临床提供治疗方案选择的依据：P53、Ki67、Her-2二、免疫组化染色*定义：免疫组织化学技术是免疫学与组织化学两种技术的结合，其原理是应用抗原与抗体的特异性结合，再用显色剂显色达到标记细胞的某种抗原物质的定性与定位检测技术。二、免疫组化染色在肿瘤诊断上的用途主要有：①肿瘤的诊断与鉴别诊断②确定转移性肿瘤的原发部位③恶性淋巴瘤的诊断和分类④评估肿瘤的生物学行为，并为临床提供治疗方案选择的依据。二、免疫组化染色①肿瘤的诊断与鉴别诊断：小细胞性肿瘤（小细胞癌、各种小细胞肉瘤、恶性淋巴瘤等）多形细胞或梭行细胞肿瘤（平滑肌瘤/肉瘤、胃肠道间质瘤、神经鞘瘤/恶性神经鞘瘤）二、免疫组化染色②确定转移性肿瘤的原发部位帮助确定部分肿瘤的起源，如甲状腺球蛋白（TG）、前列腺特异性抗原

(PSA)、甲胎蛋白(AFP)、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)等确定甲状腺癌、前列腺癌、肝癌或生殖细胞源性肿瘤的转移。二、免疫组化染色③恶性淋巴瘤的诊断和分类恶性淋巴瘤尤其是非霍奇金淋巴瘤的诊断和分类几乎离不开免疫组化。目前应用最为广泛的分类方法是2000年的恶WHO分类法，将血液和淋巴组织肿瘤以形态学改变、免疫表型、基因异常、临床表现和预后结合进行分类。已有100多的CD系列抗体和其他抗体可用于诊断和分类。二、免疫组化染色（一）上皮性肿瘤标记角蛋白（keratin）：常用，细胞角蛋白CK（广 谱），标记腺癌、鳞癌、移行细胞癌等。上皮膜抗原（EMA）：上皮细胞标记抗体，细胞 膜阳性。癌胚抗原（CEA）：对肠、胃、肺、胰、肝、乳 腺等腺癌标记阳性。甲胎蛋白（AFP）：由胎肝细胞提取的一种酸性糖蛋白，对肝细胞癌、卵黄囊癌特异性标记。二、免疫组化染色（二）间叶源性肿瘤标记波纹蛋白（Vim）：是一种细胞中间丝蛋白抗体，在多数软 组织肿瘤均可表达。常用作间叶源与上皮源肿瘤的第一线 鉴别抗体。S-100蛋白：是一种周围神经雪旺氏细胞特异标记抗体，后发现对脂细胞、朗格罕氏细胞、肌上皮细胞、黑色素细胞及其肿瘤均可阳性。结蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、横纹肌均可阳性。平滑肌肌动蛋白(SMA)：平滑肌为阳性。

第8因子Ⅷ，CD34：对血管内皮细胞肿瘤，胃肠道间质瘤标记较特异。二、免疫组化染色（三）双向分化肿瘤标记即有上皮与间叶两种细胞分化的肿瘤的标记，如滑膜肉瘤、间皮肉瘤、脑膜瘤、癌肉瘤、上

皮样肉瘤等，一般采用CK、EMA标记上皮，

Vimentin等标记间叶细胞。另外有一种恶性纤维组织细胞瘤，由纤维细胞、肌纤维母细胞和组

织细胞混合组成的恶性肿瘤，故应用Vimentin和组织细胞标记来诊断。二、免疫组化染色（四）神经细胞、胶质细胞及神经内分泌肿瘤标记神经原特异性烯醇化酶（NSE）：神经原肿瘤标记。胶质纤维酸性蛋白（GFAP）：脑胶质细胞特异性标记抗体。二、免疫组化染色3．神经内分泌肿瘤标记：包括类癌、胰岛、垂体瘤、甲状腺髓样癌、皮肤Merkel细胞癌、原始神经外胚层瘤（PNET）等，目前应用NSE、嗜铬蛋白颗粒A（CgA）及触突素（Syn）三种抗体同时或两种一起用，因NSE不够特异。二、免疫组化染色（五）淋巴网状组织肿瘤（淋巴瘤）标记B细胞标记抗体：CD20（L26），Ig重链（IgG、M、A、E）、轻链（λ、κ）、CD79a。T细胞标记抗体：CD45RO（UCHL-1），CD3较好。组织细胞标记抗体：Mac387、CD14、抗溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶等。二、免疫组化染色霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’s

lymphoma，HL）R-S细胞（

Reed-Sternberg

cell

）标记抗体：CD15

、

CD30白细胞共同抗原（LCA）：它对淋巴网状细胞均为膜阳性，作第一线抗体为好。二、免疫组化染色（六）肿瘤细胞增殖活性与细胞凋亡标记抗体常用抗体有：增殖细胞核抗原（PCNA）、Ki-67等。凋亡抑制基因蛋白抗体：Bcl-2、mtp53等。促凋亡基因蛋白抗体：wtp53、Bax、Bcl-xs、Fas等。二、免疫组化染色2011

St

Gallen

Consensus分型ER/PRHER-2Ki-67LuminalA型+-低表达（＜14%）Luminal

B型+-高表达（≥14%）+任何水平HER-2过表达型-+/基底样型--/乳腺癌的分子分型2011

St

Gallen

Consensus分型ER/PRHER-2治疗类型Luminal

A型+-单纯内分泌治疗Luminal

B型+-内分泌治疗±化疗+内分泌治疗+化疗+抗HER2治疗HER-2过表达型-+化疗+抗HER2治疗基底样型--化疗分子分型指导下的治疗方案激素受体及评估标准以前：>10％肿瘤细胞核阳性ER和PR的评估标准（核染色）10%～

25%

（+）25%

～

50%

（++）＞50％

（+++）肿瘤细胞无核染色----“阴性”目前：>1%肿瘤细胞即为阳性（无论强度如何）1％～＜10％肿瘤细胞核阳性----“低阳性”百分数+强度（强、中、弱）未分化癌、淋巴瘤和恶性黑色素瘤的免疫组化抗体未分化癌淋巴瘤恶性黑色素瘤细胞角蛋白（CK）+--上皮细胞膜抗原（EMA）+--波形蛋（Vimentin）-+/-+HMB45--+S-100--+白细胞共同抗原（LCA）-+-平滑肌瘤、神经鞘瘤、GIST和Kaposi肉瘤鉴别的免疫组化抗体DesMSASMACD34CD31S-100平滑肌瘤+++---神经鞘瘤-----+GIST---+--Kaposi肉瘤---++-血管源性肉瘤恶性（纤维型）间皮瘤良性（局限纤维型）间皮瘤CK-+-ACTIN+/-+-CD34+-+第八因子+--鉴别间皮肿瘤和血管源性肉瘤的抗体二、基因检测技术红色信号呈簇状，明显增多HER2/CEP17=7.2，有扩增红绿信号接近HER2/CEP17=1.65，无扩增FISH/荧光原位杂交 图示阳性:比值≥2.0

，或比值＜2.0且平均拷贝数/细胞≥6.0阴性:比值＜2.0

，拷贝数/细胞＜4.0图片来自SCC红色信号:HER2基因

绿色信号:17号染色体着丝粒基于PCR平台的检测技术HPV分型BRCA1/BRCA2……一、背景二、免疫组化染色及基因检测技术三、分子病理在妇科肿瘤中的应用内容三、分子病理在妇科肿瘤中的应用疾病筛查宫颈液基细胞学联合HPV分型检测宫颈免疫组化Ki67、P16…遗传性卵巢癌/子宫内膜癌:BRCA1/2基因检测…林奇综合症:MMR……MLH1、MSH2、MDH6、PSM2采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术。依据HPV与宫颈癌发生相关性高低可分为高危型和低危型低危型：6、11、42、43、44、53、81高危型：16、18、26、31、33、35、39、45、

51、52、53、56、58、59、66、68、73、82（2005年IARC专题会）来自世界各国的宫颈癌组织标本研究发现，高危型HPV16、18型在宫颈癌患者中的感染率最高，约占

64%。但是做HPV检测时，只检测16、18型是远远不够的，还有约36%的宫颈癌是由其他型别的HPV病毒引起的。HPV分型检测宫颈免疫组化ABC

DKi67:(A)

和(C)为CIN

III，其中(C)呈弥漫强阳性；(B)和(D)为CIN

I，其中(D)仅基底层及外基底层呈散在阳性。宫颈免疫组化ABCD(A-D)宫颈原位腺癌，癌变区P16、CEA、Ki67弥漫强阳性尚可见残留的正常腺上皮。*

又称为遗传性非息肉病性结直肠癌（HNPCC)，属于常染色体遗传病，与错配修复基因（MMR）MLH1，MSH2，MSH6，PMS2及EPCAM/TACSTD1的突变有关。携带MMR突变的患者更容易患结直肠癌（患病风险30%-70%）。Lynch综合征（林奇综合征）女性患者林奇综合征的第二发病肿瘤是子宫内膜癌（30%-60%）。林奇综合征患者其他部位的肿瘤发病风险也会提高，尤其泌尿道（5%-12%）、小肠、卵巢（4%-12%）、胃（8%-10%）、胰腺（4%）、胆管、脑以及皮肤。Lynch综合征（林奇综合征）MMR基因突变显示MLH1突变使患者更早得结肠癌MSH2突变携带者更易得肠外组织的肿瘤MSH6缺失女性患者得子宫内膜癌的几率大于结肠癌PMS2突变携带者患结肠癌或子宫内膜癌的几率较低（15%-20%）Lynch综合征（林奇综合征）二、MMR

抗体组合MMR抗体组合检查可以鉴别LS（林奇综合征）MLH1结肠癌不伴有MLH1缺陷:癌细胞、细胞，间质细胞及良性上皮细胞显示中等到强的着色结肠癌伴有MLH1缺失:癌细胞不表达

MLH1、细胞显示核阴性，而其中的间质细胞核强阳性MSH2结肠癌不伴有MSH2缺陷:癌细胞、间质细胞和残存的正常上皮细胞胞核呈中等至强阳性表达结肠癌伴有MSH2缺失:癌细胞不表达

MSH2、邻近的正常间质细胞胞核呈中等至强阳性表达MSH6结肠癌不伴有MSH6缺陷:癌细胞、间质细胞和残存的正常上皮细胞

胞核呈中等至强阳性表达结肠癌伴有MSH6缺失:癌细胞不表达MSH6、但中间夹杂的间质细胞胞核呈中等至强阳性表达PMS2结肠癌不伴有PMS2缺陷:癌细胞、间质细胞和残存的正常上皮细胞胞核呈中等至强阳性表达结肠癌伴有PMS2缺失:癌细胞不表达

MSH6、但间质细胞、淋巴细胞及残存的正常上皮细胞胞核呈中等至强阳性表达2.诊断及鉴别诊断*

宫颈癌(鳞状细胞癌/腺癌):P16、CK5/6、CK8/18、CK14…*子宫内膜癌:ER、PR、CD10、P16、CK7、WT-1…*子宫平滑肌肉瘤和间质肉瘤:Vimentin、Actin、Desmin、CD10、CD99、α-inhibin…三、分子病理在妇科肿瘤的应用2.诊断及鉴别诊断*卵巢癌:ER、PR、CA125、CA153、CA199、P16、WT-1…*小细胞癌:CK、CD56、NSE、Syn、CgA、Ki67…*卵巢性索-间质肿瘤:α-inhibin、Vim、CK7Calretinin、S-100、SMA、CD99、EMA…*生殖细胞肿瘤:AFP、CEA、CK、PLAP、HPL、HCG、CD30、CD99、CD117…三、分子病理在妇科肿瘤中