核酸的分离提取课件

核酸的分离提取1、战鼓一响，法律无声。——英国2、任何法律的根本；不，不成文法本身就是讲道理……法律，也----即明示道理。——爱·科克3、法律是最保险的头盔。——爱·科克4、一个国家如果纲纪不正，其国风一定颓败。——塞内加5、法律不能使人人平等，但是在法律面前人人是平等的。——波洛克核酸的分离提取核酸的分离提取1、战鼓一响，法律无声。——英国2、任何法律的根本；不，不成文法本身就是讲道理……法律，也----即明示道理。——爱·科克3、法律是最保险的头盔。——爱·科克4、一个国家如果纲纪不正，其国风一定颓败。——塞内加5、法律不能使人人平等，但是在法律面前人人是平等的。——波洛克植物分子生物学实验技术颜泽洪主要内容第一部分核酸的分离制备第二部分PCR技术第三部分主要分子标记第四部分基因克隆无效的教学行为是指教师在课堂教学过程中偏离教学目标、违背教学规律、忽视教学对象而产生的诸多违背新课程理念的教学行为。无效教学行为严重干扰教学效果，对新课程的实施产生负面影响。反思今天的英语课堂，我们发现，有些英语课堂一味标新立异，流于形式，忽视了课堂实质，严重抑制了学生综合运用英语能力的提高。1.教学目标设计脱离学情，不能有效指导课堂教学1.1教学目标设计的虚化如把“培养学生学习英语的欲望和兴趣”，“树立正确的人生观和世界观”等定为情感目标，显然这些目标的设置过于空泛，难于驾驭。1.2教学环节目标模糊通常设计教学时，在总目标确定之后，教师应设计好多个环节目标。但是在教学中有的教学步骤没有具体目标，直接影响课堂教学的有效性。1.3课型选用不当在听课活动中，我们发现同样的教学材料由不同教师却可以设计出不同的课型，如把阅读课上成语法课。没有从语篇上学习课文，而是先讲语法，再对课文提出问题，严重影响了对学生阅读能力的培养，降低了课堂效率。2.教师忽视新课导入，达不到“导情引思”的效果初中英语教学是一门情境化很强的教学艺术，导入新课时创设问题情境不足，就会直接导致教学的失败。英语课的导入主要存在以下几个问题：1）导入脱离教学内容和学生实际，牵强附会。2）导入对学生接受内容没有启发性，不能使学生对知识知识进行迁移和内化。3）导入没有趣味性。如果学生对所学内容感兴趣，就会表现出主动积极和自觉，学习时轻松愉快，学习效率自然会高。4）教师的导入语言没有艺术性，教态缺乏艺术性。要使新课的开始能扣动学生的心弦，象磁铁一样牢牢地吸住学生，需要教师讲究语言的艺术性和教态的吸引力。3.农村英语教师教学语言的缺陷，也是导致教学无效的重要行为3.1语音缺陷少数教师英语发音不准确，加之个别教师受母语方言影响发音不准确，对教师产生不信任心理，影响到学生向教师学好英语的信心。3.2课堂用语不规范如组织四人练习，指令全为“Fourstudentsinpairsplease.”课堂上教师的语言是学生语言输入的重要部分而教师的错误用语使课堂的有效性大打折扣。3.3提问用语缺乏层次性教学中部分教师把“满堂问”误认为是启发式教学，整节课学生对一个个问题搞的晕头转向，疲于应付。3.4评价用语单一评价是提高课堂活动的有效性的重要手段之一。从教师的评价中学生可以反思自己的学习状况，随着对新课改的学习，不少教师对课堂评价的认识有了提高，但在操作中运用的不太理想，如在课堂中的口头评价随意性居多不够具体。4.教学活动过程设计不当，大大降低了课堂效率4.1教学设计多步骤而缺乏过渡性有的教师在设计多个环节时没有考虑多环节是为了实现总目标服务的，而是设计成一个个孤立的任务，步骤间缺乏过渡语，使所谓的“任务型教学”有拼凑在一起的感觉。4.2课堂活动流于形式在改变了以往的以教师为中心的局面后，不少教师走向另一个极端，为营造热闹的气氛而活动。在英语课堂中出现了有活动无语言的现象。4.3活动设计控制性太强在教研活动中交流时发现，大部分教师都认为要以学生为主体的重要性，并考虑到了学生的参与，如让学生回答问题、小组活动等。然而学生基本停留在控制性、半控制性的练习，得不到全面充分的发展。4.4课堂练习质量不高课堂观察中发现，有的教师对待习题没有精选，习题的设计没有层次性和梯度，没有在学困生掉队初期采取及时的补救措施。以上典型的无效课堂教学行为，可以从以下几个方面着手加以矫正：一是转变教学观念，不断探索教育教学规律，克服语言缺陷，强化英语学科教学能力；二是强化教学设计；三是重视学生主体，教师的职责主要不在于“教”，而在于指导学生“学”；四是创设情境，优化课堂教学，激发学生学习英语的兴趣，从而提高综合运用英语的能力。[1]教育部.英语课程标准[M].北京：北京师范大学出版社，2011.[2]张连仲.基础教育现代化教学基本功――中学英语卷[M].北京：首都师范大学出版社，1997.作文教学是初中语文教学的“重中之重”，也是语文教学的“难中之难”。作文教学通常分为引导、习作、批改、评讲四个环节。批改与评讲是作文教学的反馈环节。我认为作文教学效益不高，学生作文水平低下的症结是长期以来我们对作文反馈，尤其是对作文评讲环节的轻视、敷衍所致。作文教学是一项综合的系统工程，涉及字、词、句、篇、语法、修辞、逻辑等诸多因素。实施起来难度高，难以找到突破口。作文反馈工作量大，费时、费力。一部分老师往往认为作文指导跟不指导一个样，讲评不讲评没区别。于是，作文评讲蜻蜓点水，甚至放任自流。一部分老师也开展作文反馈，但在处理引导与习作、批改与评讲上，尤其处理批改与评讲时，定位偏左，甚至存在本末倒置的现象：重批改，轻评讲。对评讲环节的忽视势必导致学生作文水平原地踏步，甚至“退步”。还有一部分老师也意识到作文评讲的重要性，但缺少作文评讲各阶段明确的达成目标和训练方法：作文反馈“概而括之，笼而统之”；作文评讲缺乏序列性、专题性，“东一榔头，西一棒槌”。此外，作文评讲，教师是“一堂之主”，反馈成“一家之言”，作文评讲课成“一言堂”。学生缺少对自己“创作”的发言权，这种缺乏“主体意识”的评讲，其结果必然是事倍功半。其实作文评讲就应树立“以学生发展为本”的理念，将评讲建立在众多鲜活的学生习作基础上，充分利用好作文评讲这一重要环节，切实提高作文教学质量。据我日常作文教学的作法，特提出以下改进思路：一、诊断病因，对症下药。记叙文写作是初中作文教学的重点。写作中反映出的问题主要集中在立意、选材，构思与语言表达等方面。如处理材料与中心方面。生活面狭窄导致内容单调，要么就胡编乱造，无病呻吟，缺乏真实性；材料不能为中心服务，中心分散或游移，立意不明确；揭露社会悲剧面而非真、善、美，不能反映自我真实的内心世界或不能反映时代主旋律等。安排文章结构条理时，开头冗长，中间重点细节不突出，结尾不点题，虎头蛇尾。要全面了解学生写作能力的不足和缺陷，必须首先认真做好作文批改工作。当然作文批改也要有针对性和侧重点，可尝试教师批改、学生互改、轮改、小组改等。每次批改，教师必须善于发现、筛选、整理、归纳出学生习作中的常见病，或带有共性的典型问题，找准“毛病”，方能“对病下药”。为作文评讲内容做好材料上的充分准备。二、精选典型，比较点评。面对学生在作文训练中反映出的个别性特殊性问题，可通过个别指导的形式予以解决；但批改中所发现的学生作文中的常见病或带有共性的问题，必须当堂评讲。评讲例文必须精选，须有典型性。成功的例文与失败的习作对比评讲；相同题目、相同题材或相同主题的作文也可对比评讲；把内容不能为中心服务的作文与材料能恰当服务中心的作文一同评讲，也可把中心分散或游移的作文与主题鲜明的作文对比评讲……这种比较点评的形式，可使学生生动、直观地加深对写作知识的认识和理解，并引以为鉴，使作文评讲真正具有针对性和实效。三、印发范文，激发兴趣。教师在作文课上，选一、二篇优秀作文一念了之，是低效或无效的。我们必须将评讲范文尽量印发，一桌一份，或人手一份，优秀作品可署作者姓名，问题作文则避免出现作者姓名，以保护学生写作热情。这样学生可以更直接、更直观的接触材料，进行更有效的点评。每次优秀习作按期装订成册，设立“班级美文集锦”。这种印发例文、直观感受的方法，被教学实践证明是提高作文反馈质量、激发学生写作兴趣的行之有效的主要方法。四、作文升格，有效完善。作文升格是作文评讲的后续工作，更是提高作文水平的重要步骤。学生要趁热打铁，根据评讲要点及自己作文的不足进行修改。小到字、词、句、标点，大到立意选材、谋篇布局。学生只有脚踏实地走好这一步，才能将作文之路走得更高、更远。另外，合理利用媒体技术，将媒体技术与评讲结合起来，倡导多元化，动态、辩证、科学的评价方法。总之，只有更新教学理念，强化主体意识，探究科学方法，将作文评讲作为激发学生写作兴趣的切入点和突破口，作文教学才会走上轻松快乐的轨道。高雪萍，教师，现居湖北枣阳。植物分子生物学实验技术颜泽洪主要内容第一部分核酸的分离制备第二部分PCR技术第三部分主要分子标记第四部分基因克隆第一部分:核酸的分离制备1.DNA在分子生物学研究中的重要性DNA提取是一切分子生物学研究最基础的技术,高质量的DNA是用于PCR和酶切分析等系列后续操作的重要保证发展了多种DNA提取方法,可从植物叶片、愈伤组织、组培苗、果实、韧皮部澄3秒怨级爱曲把殿分纽结物神点并物的孤取卖需妻择不同的法或作一些特殊处理从富含多糖、多酚、单宁、色素及其他次生代谢物质的木本植物中提取DNA的方法难度就相对大于大多数禾谷类及蔬莱类植物(1)多酚被氧化成棕褐色(2)多糖、单宁等物质与DNA会结合成粘稠的胶状物,获得的DNA常出现产量低、质量差、易降解,影响了DNA质量和纯度,不能被限制性内切酶酶切,严重的甚至不能作为模板进行PCR扩增2.提取DNA应满足的基本原则不同的研究对DNA的要求不一致,但一般应满足(1)排除蛋白、糖类和脂类等物质的污染,DNA纯度应满足下游操作需要用于RFLP、AFLP应满足酶切要求用于PCR的不含PCR的千扰甚至抑制物(2)所得DNA应当完整电泳检测得到清晰、完整、可重复、无降解的条带保证DNA一级结构的完整(3)足够量的DNA有的实验要求量多(标记)3.基本原理1)破坏(消化)细胞壁、释放内容物在破壁时也会剪切DNA,在完整性和产量间折衷考虑分离总DNA破壁方法液氮中快速冷冻、研磨成细粉末三分离核DN或细胞器DNA破壁方法更温和的方法、以免过早破坏内膜系统、含渗透剂的缓冲液4℃C匀浆」(2)破坏细胞膜使DNA释放到提取缓冲液中通常靠SDS或CTAB去污剂来完成,保护DN受核酸内源酶降解缓冲液通常含EDTA,可螯合大多数核酸酶所需要的辅助因子镁离子三4.基本步骤1)植物材料的采集及前处理尽可能使组织材料保持水分而保鲜(用湿纱布包襄,放置于密闭的冰盒等)野外远距离采集样本时,尽可能采用冷冻保存(如放置于液氮中)不具备冷冻条件时无水CaS04的瓶子分别保存使其迅速千燥,可将材料保存数月,返回后尽快提取DNA对具有大量次生代谢物(如丹宁、酚类、醌类等)的植物材料,尽可能采集幼嫩组织,冷冻保存、短时间内提取DNA植物组织化学保存法乙醇、丙二醇处理法导致DNA剧烈降解(不推荐)样品长期保存液氮处理后贮存在-80℃冰箱或直接储放于液氮中在与提取缓冲液接触前防止冰冻样品在空气中融化导致酚类易被氧化实验室发苗、田间取叶片(清洗去除灰尘、泥土以及茵孢子等)饥饿处理减少淀粉含量、遮光处理产生黄化苗4.基本步骤(2)组织(细胞)破碎三物理方法溶涨和自溶;化学方法生物酶降解液氮快速冷冻处理后硏磨(推荐)或在提取缓冲液中硏磨若)(3)释放DNA释放DNA到CTAB或SDS类去污剂中、65C保温处理三(4)纯化和浓缩:去除残渣、沉淀DNA」释放出的DNA中含有大量的RNA、蛋白质、多糖、丹宁和色素等杂质需用氯仿、苯酚处理后变性、沉淀除去,RNA可用RNase除去。通常采用4C离心的方法,产生分层,去掉植物残渣、留上清液部分沉淀通常采用异丙醇(volume)、酒精(2volume)等(5)洗涤去掉部分色素和盐等,通常采用70%酒精和100%无水乙醇4.基本步骤(6)DNA纯度和浓度检测θ.8%琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测琼脂糖凝胶电泳法(常用)DNA样品在紫外线照射下发出的红色荧光强度与DNA的含量成正比使用标准浓度的DNA样品作对照,可以估计出被测DNA的浓度紫外分光光度计检测DNA在260nm处有一个明显的吸收峰估计