丙氨酸氨基转移酶标准操作规程（ALT-SOP）

PAGE6-生物技术有限公司技术部标准操作程序StandardOperatingProcedures版本：V1：A0执行日期：2007-05-02共6页标准操作程序项目：丙氨酸氨基转移酶方法：连速监测法文件编号ELK-SH-SOP-07-003编写者日期审核者日期批准者日期颁发部门或个人接收部门或个人院长办公司保管者院档案室保管者医务科保管者检验科主任临床化学检验室发布日期：2007年4月2日实施日期：2007年4月3日前言为使临床检验操作规范化，指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作，保证检验质量，特制定本操作规程。本规程的编写遵循了ISO15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T227-2002《

临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订，作为本产品的标准操作程序。本规程从2007年5月2日起实施，每2年复审1次。本规程由浙江生物技术有限公司编制。本规程起草单位：生物技术有限公司技术部。本规程主要起草人：XXXXXXX、XXXXXXX、XXXXXXX。本规程首次起草。XXXXXXXX人民医院检验科2007年4月2日目

录1检验申请…………………32标本采集与处理…………………………33试剂及成份…………………………44方法原理……….…………45仪器……….……………….…………46校准液及校准模式………………………47质控品与室内质控规则…………………48标本检测步骤………….…………………59结果计算…………………510操作性能………………511试剂使用的注意事项……………...……512参考范围及医学决定水平………………………..……513检验结果的报告及范围………………………..………514临床意义……….….……615结果审核分析以及相关项目的联系..……………………..……..……616威胁生命的“紧急值”及报告规定.…………………..…617有关引用程序与文件………………..….618参考文献附录AXXX型生化分析仪参数丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请：血清丙氨酸氨基转移酶（AlanineAminotransferase,缩写(ALT/GPT）测定；组合项目申请：肝功能测定项目组合。临床医生根据需要提出检验申请。2.标本采集与处理2.1受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后。体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。2.2.2检验申请单和血标本试管上统一且唯一的标识符。2.2.3标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。2.2.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.2.5下列标本为不合格标本2.2.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.2.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、黄疸和浑浊的标本。2.2.5.3对无法确认标本与申请单对应关系的。2.2.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.3标本处理2.3.1接收标本在室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆。吸出血清或血浆,标本应立即测量。处理样品时要将其当成生物污染品。2.3.2标本保存时间：20-25℃稳定1天；4-8℃稳定7天；-20℃稳定1个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.3.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7d。2.4标本的注意事项2.4.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。2.4.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素或EDTAK2（1mg/mL）作为抗凝剂。2.4.3应该在4小时内测定完毕，否则按要求保存标本。血清不宜反复冷冻保存，以免影响酶的活性。2.4.4血清中含有酮酸能消耗NADH，使结果偏高；血清中谷氨酸脱氢酶增高时，在有氨存在的条件下，亦消耗NADH，使结果偏高2.4.5血清标本出现溶血、脂血、黄疸或抗坏血酸的干扰情况参见抗干扰能力。3.试剂及成份3.1试剂本科使用的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，由浙江生物技术有限公司生产,产品货号为:XXX,试剂为液体试剂，其组份如下：组成R1:R2=2:1混合后溶液的浓度R1:Tris缓冲液:80mmol/LPH=7.8NADH0.18mmol/LLDH>1200U/LR2:起动液L-丙氨酸450mmol/La-酮戊二酸18mmol/L3.2试剂盒保存及效期未启封试剂盒在2～8℃保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定28d。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。新打开试剂不宜与已用过的试剂混合在一起,否则易造成试剂稳定性下降。3.3试剂盒准备液态试剂型，即开即用，无特殊准备。4.方法原理4.1测定方法：IFCC改良法。4.2原理：丙氨酸氨基转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。ALTL-丙氨酸+a-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸LDHNADH+丙酮酸+H+L-乳酸+NAD+5.仪器XXXX型号仪器。6.校准品与校准模式6.1校准品：使用XXXXX公司提供的复合校准液或采用因数法。采用因数法时按照浙江生物技术有限公司提供的参数中样本和试剂比例，理论因数=3376。实际因数可根据自行进行校准。6.2标准类型和校准点数目：线性模式，X个校准点。6.3校准周期：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后；均须需要全点定标。6.4校准液重建方法：XXXX复合校准液用XXXX00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。7.质控品与室内质控规则7.1质控品采用XXX公司提供的PrecinormU（正常范围质控）和PrecipathU（病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。产品号为10171778和10171743。7.2质控液重建方法：用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。7.3质控品测定：在每一批标本中测定至少两个水平质控血清各一次。7.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。7.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。8.标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。9.结果计算ΔA/min×Vt×1000 样品中ALT活性(U/L)==ΔA/min×Fe×Vs×d式中：ΔA/min——每分钟吸光度变化率；e——NADH摩尔吸光系数6.22；Vt——反应液总体积（ml）；d——比色杯光径（cm）；1000——变化因数；Vs——标本体积（ml）；10.操作性能10.1精密度：批内CV2％，批间CV4％。10.2准确度：测量结果在质控血清靶值±2SD范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。10.3线性范围：2～600/L（血清与试剂用量之比为1:12时）10.4方法的有限性及干扰因素：EDTA(2g/L)，柠檬酸钠(116mmol/L)对本试验有干扰。胆红素1026μmol/L、甘油三酯11.4mmol/L无明显干扰。磷酸吡哆醛能使血清中ALT显示最大活性，使用不含有磷酸吡哆醛试剂测定ALT活性，某些疾病患者如肾脏病患者，可因血清中磷酸吡哆醛含量不足而致ALT活性低估。11.试剂使用的注意事项11.1本试剂仅应用于体外诊断。11.2扔弃废物应符合当地的法规。11.3换算公式：U/l×0.0167=ukat/l12.参考范围及医学决定水平参考范围：血清丙氨酸氨基转移酶参考范围（酶测定温度37℃）男：3～50U/L；女：2～45U/L。13.检验结果的报告及范围13.1结果的报告13.1.1结果经审核确认准确无误后发出报告。13.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。13.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。13.2报告范围：血清与试剂用量之比为1:12时，测定上限为600U/L。超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，并经上级主管技师审核后报告。14.临床意义14.1ALT存在于各种组织细胞内，以肝细胞中含量最多，正常时血清中ALT活性很低。14.2肝细胞因感染病毒而受损伤，尤其是处于急性期时，ALT从细胞内逸出至血液中，血清中ALT活性可明显升高，因此是各种肝炎患者检查的一个重要指标。14.3某些药物对肝细胞有毒性副作用，过量或长期使用可致肝脏受损，亦可以ALT活性升高反映。14.4实质性脏器有非感染性炎症或损伤时，如脂肪肝、梗阻性高胆红素症、肝内胆汁淤滞、胆管炎、胆囊炎、肝癌、急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血等，均可成为血清ALT升高的原因。14.5ALT与AST联合测定并计算其比值有助于对某些疾病的鉴别，正常情况下ALT/AST比值小于1，但在传染性肝炎及其他原因引起的肝脏炎症时，ALT/AST比值升高；肝硬化、肝癌、进行性肌营养不良、皮肤炎时，AST升高的幅度高于ALT。15.结果审核分析以及相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：审核与肝功能组合中其他项目、胆汁酸的关系，ALT/AST比值是否与疾病一致。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16.威胁生命的“紧急值”及报告规定16.1＞1000U/L为引起临床重视的紧急值，可能有较严重的肝细胞坏死或受损的情况。16.2处理程序16.2.1检测人员立即报告审核者。16.2.2审核者首先根据审核程序，分析质控、定标、试剂的情况是否正常，当天其他已做标本本项目的总体情况有无异常，确认实验有关的基础是正常状态中。16.2.3出现紧急值的标本有无异常，该标本其他相关项目有无异常，尤其是该患者其他肝功能指标的情况。16.2.4对该标本进行一次重复测定，确认紧急值是否重现。16.2.5报告技术质量主管及科主任