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文档简介

第六单元感染性疾病的免疫学检测人民卫址出辰社实验一乙型肝炎病毒表面抗体检测人民卫址出辰社实验目的酶联免疫吸附试验通过乙型肝炎(ELSA)是病毒表面抗体感染性疾病的常用检验方法检测实验熟悉影响实验结果掌握E凵SA的的各种因素基本实验学习正确分判断实验结果及原理及操作步骤了解检测的临床意义人民卫址出辰社实验原理采用纯化的乙型肝炎表面抗原(HBSAg)包被反应板,加入待测标本,同时加入标记了辣根过氧化物酶的HBSAg(HBsAg-HRP),当标本中存在抗HBs时,该抗HBs与包被的HBsAg结合并与酶结合物结合形成HBSAg抗HBS-HBSAg-HRP复合物,加入TMB底物显色,显色的强弱与待测标本中的抗HBs含量成正比。人人民卫址出辰社试剂及器材今包被有HBSAg的微孔板HBSAg-HRP☆阳性、阴性及弱阳性对照血清◆显色剂,终止液◆酶标仪◆洗板机人民卫址出辰社实验流程取出包被好抗原的酶标板1.加样12345↓标记各孔,加入50uL/孔空阴阳弱待白性性阳测各孔加入酶标抗原1滴/孔2.加酶结合物37C.30min用洗涤液洗涤5次甩干孔内液体3.显色加入显色液A、B各一滴/孔37C,15min加入终止溶液1滴/孔,混匀4.测吸光度人民卫址出辰社酶标仪上读取吸光度值操作步骤1.将包被孔编号,分别加入标本、阴性对照、阳性对照、弱阳性对照及空白对照各50p1。2每孔加入酶结合物1滴(空白对照孔除外),充分混匀,置37℃孵育30分钟。3.甩去孔中液体,加洗涤液注满各孔,静置5秒,甩干,重复5次后拍干。4.每孔加显色剂A液、B液各1滴,充分混匀,置37℃孵育15分钟。5每孔加入终止液1滴,混匀。6.在酶标仪上于450nm波长处读取吸光度值(A),以空白孔校零点,分别测定阴性、阳性、弱阳性对照及样本孔的A450值。人民卫址出辰社结果判断样本孔吸光度值(S)/阴性对照孔吸光度值(N)≥2.1判断为阳性。人民卫址出辰社实验讨论心ELISA是临床常用的感染性疾病免疫学检测方法,包括间接法、竞争法、捕获法、双抗体夹心法及双抗原夹心法等方法,讨论各种方法的临床应用。◆分析ELISA检测过程中的各种影响因素,探讨本次实验结果的准确性。今讨论乙型肝炎病毒表面抗体检测结果的临床意义。人民卫址出辰社注意事项加样应加在板孔的底部,避免加在孔

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