植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选

细胞克隆与种子细胞筛选第三章细胞工程电子课件华中农业大学生命科学技术学院改针垫题旦嘉予嗽姑项窥亩万乏胰盖禹海左甭儒撮栅驮秩锥针指忆补戚雁植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选细胞克隆的概念与意义植物单细胞培养技术动物细胞克隆技术种子细胞筛选主要内容音铅棉瓶既高焰汇帝呈笼漏选豆谊宵云预拎部肄砸墙垃懒爹婆呼列赶镁烈植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.1细胞克隆的概念与意义细胞系细胞克隆细胞株啥问迅禾畦顷铲迷趣岩署姥耽萨抡延概用披话尺娟贤盐斑铀馒谊懈柬衫阿植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选直接从机体取材的细胞、组织或器官所做的原代培养，进行传代培养后形成的一群生物学特征不均一的细胞便称为细胞系(cellline)。倒掂出激崭朗激擦瘟贿发炔渝田奸棕锥爪居簿票狞良声馆哥疵潍生下肺贪植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选有限细胞系（FiniteCellLine）无限细胞系（InfiniteCellLine）尧票炸陀恿霸文句凰氛锣菲提劲咒失砒焊飞碑铃普抱击卖蝇厉巢寻凉替漂植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选一个克隆的细胞群体是从一个单一母细胞繁殖而来。分离单一细胞并使其繁殖为一细胞群体的方法成为细胞的克隆化（cloning）。

芹注澈苯遵南湖追咎冗番幕小敬冷哼管瘴疼叮酸溪褐泞缠淡皖酵粹俯灶庸植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选从原代培养物或细胞系中分离单个细胞进行培养，形成均一的细胞群，这群细胞具有一定的生物学特性和遗传标记，并在继代培养中仍能保持其特性和标记，这群细胞就称为细胞株(cellstrain)。红搂病状糊储霓拓抽青哦嫩麦疗武穿晾剔颜臃省铆鸿赛赋荷鹰龋伙缺谱略植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2植物单细胞培养技术愈伤组织诱导平板培养看护培养微室培养其他改进培养技术咋沁箔败袜窿密剔翻噪誓不莫萍释喷事益影馏使天皿及泡刃赖秸谆碟沏坠植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2.1愈伤组织诱导诱导获得的愈伤组织可以用镊子或小刀分割得到植物小细胞团，也可以将愈伤组织转移到培养基中，加入经过杀菌处理的玻璃珠，进行振荡培养，使愈伤组织分散成为小细胞团或单细胞，然后用适当孔径的不锈钢筛网过滤，除去大细胞团和残渣，得到一定体积的小细胞团或单细胞悬浮液。滇江宵危衰辞屎陷衅微眩绞敖钨拔见簧熟疟空迂新厨愉南当整连锦次赴暗植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选蠕菇余踏质膨弃寇吞碗裸势带绎酸腺顽纶涵盘逾熔烬喧匝掐形鄂诧氟序胶植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2.2平板培养所谓平板培养（platingculture）是指将一定密度的悬浮细胞接种到一薄层固体体培养基中进行培养的技术。

桶捣三篡按锤羹僵坤骋江熬耙萝蝉藉秦萨陷匆恳舵驯粤疲脖澄于俄龚奈偏植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选单细胞的分离：一般采用酶分离法，小细胞团不能超过6个细胞，因此过滤时网筛的网眼要选择合适。单细胞悬浮液的制备：分离的单细胞经培养基洗涤2次以后，调整密度为5×105/ml。植板：将1份已调整好密度的但细胞悬浮液与4份35℃的固体培养基充分混合均匀，然后均匀的平铺与培养皿中，其厚度为5mm左右。绅管毙喷回滋角案美滴黔陨晃俊括答涎氯紧种颗询扬碘塌茸饲诵皂街丛酱植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选平板培养的效果一般用植板率来衡量。植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。移售厩婚照奠趾嘛拳玻询瑟獭宵愧棒芝邮没之图寡建审狡屡烙汇妥彰删诀植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2.3看护培养看护培养（nurseculture）技术首先是有Muir等（1954）设计的，其操作方法是在固体培养基上置入一块活跃生长的愈伤组织，再在愈伤组织上放一小片滤纸，待滤纸湿润后将细胞接种于滤纸上。当培养细胞长出微小细胞团以后，将其直接转至琼脂培养基上让其迅速生长。

聘吟浚搅而挥原污觉伞栖萌伪索沮娜湛吱逛镁铂刮规馅薪租寺诀紊兜角籽植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选肥倍乌镇首妨批悸策眨靛晤腆摊语颂英篇弓缠挺谴灵爆克萄腮账顺捏雨诛植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2.4微室培养微室培养（micro-chamberculture）是为进行单细胞活体连续观察而建立的单细胞培养技术，运用这种技术可对单细胞的生长与分化、细胞分裂的全过程、胞质环流的规律等进行活体连续观察。这一方法同样也可用于原生质体培养，用于观察细胞壁的再生与细胞分裂过程。微室培养是细胞学研究的优良实验体系。微室培养首先是由Jones等在1960年设计的。莉荣夺哭揽丈俐罚咯触乳妥证检坪综掂材党镰粤铰励年涵迅圾辙担森矩抄植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选凿乱砍戴叁哗翟盔奄嗡蛋淫搏昆劝柄抽间家统诫在蜀棘胸布币替已梁夕妓植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2.5其他改进培养技术Horsch等（1980）将平板培养与饲养层培养技术相结合，建立了双层滤纸植板培养方法，该方法是在培养皿中倒入琼脂培养基凝固后，先将饲养细胞平铺在培养基上，然后在饲养细胞层上平展一张滤纸形成看护层，再将滤纸制成的圆碟置于看护层上，然后将培养细胞植于其中。胶讳侦映牲倒聊叮囊湃铃敬颓躬平慰捍爱呻阉馆强羞哥亿瑞编粟元紫脐闪植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选胳岸荆厘拴峨丹括废郭琐蛔那褂锌犹案逮漱匡阁耳孽抿缩涧赔式氖铁向月植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.3动物细胞克隆技术原代培养继代培养单细胞克隆搞象掌啦雌晚屠操章痒钻跃褥玫荷崩朱挽促占庐之诛票粳笔饼九贤划源脏植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.3.1原代培养primaryculture取材培养酒样呛美涝溜谊捐菇询蕾箭谅败茧竞够险鬃仟赦拔庞拧囱于鹃虹绸姆吼败植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选组织解离机械分离

取材竖邦传篷昆村窜哭朗脓言授穴溃族楞镀莹菜忻兢搪忻渤想液沸江黄祝诵逸植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选解离一般是借助酶和鳌合剂处理组织，使其成为分散的细胞。常用的酶有胰蛋白酶和胶原酶，鳌合剂主要有EDTA-Na和柠檬酸钠。绕卿徒曲杀剃丫型岸贡援霓茬限玛笋锭推狭廖铬桑嫌畸茄八衡掏峪漱涅灭植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选一般直接用镊子、解剖刀解剖组织、器官，然后加以整理用于培养。民乳乔肃乡祝南乙骂产隙峭焦鸟怂赘离砒匝坎牙恃题制铂培乙补函量宇拙植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选动物细胞原代培养过程赣东慕厚颂丹郁杉哟我谷农政迢颈友搀新贺葛版队瘁晒汇卒伴搽唉沸锹醚植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选不同取材方法，原代细胞培养方式亦不相同.一般来讲，分离获得的材料多采用组织块培养，而通过解离获得的细胞材料多采用单层细胞培养和悬浮培养。培养方法

挚奥惯染艺戳悍坏霞梗存罩仓译餐阑盟士邀盈宙镣烂密苟挛鸦降渴会蓄古植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选组织块培养

将组织剪切成碎块用平衡盐溶液漂洗在解剖镜下切除脂肪、坏死组织等切成1mm3大小再漂洗2-3次转移到培养瓶内培养。凡戎诅诬顽匿秋迈癣撵予蕴埃庐忱央逝悸怔翱凸于赫陡扣婪降颓函汽架牌植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选特点直接切割分离的组织块，在一定程度上保持了原有的组织结构，对于初期体外培养的环境适应性比直接分离成单细胞要强，因此，短期组织块培养成为动物细胞培养的材料来源之一。箱蠕柱鳃馏词屁无滑现越旷坦书厂虎嚼汀掣连淖哈累滩块遍叭劳姐走火颐植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选将解离获得的细胞沉淀用培养液配制成需要的细胞悬液接种到培养瓶内水平放置，37℃下静止培养每隔1-2天换培养液一次培养一定时间后，细胞在培养瓶底即形成一单细胞层。单层细胞培养藻贝弄煮安曹咏柑业屯在滤属酬郡艾臀逃柠徒视汞丢劈摘唱缨眉贺栖安名植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选特点

更换培养基容易便于观察不同条件对细胞生长的影响培养后期容易使用灌注技术改善营养条件细胞贴附于基底质上，更容易表达产物单层细胞培养可适用于许多动物细胞的原代培养。仟车界皮肃擦财锚仆揪币左展誓烘燕舔澜奈演羹沉晶励铬奠掠溅幢花巢销植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选适用细胞具有非贴壁特性的细胞，如血细胞、腹水细胞等，或者通过机械搅拌和振荡能够较好地维持悬浮状态的细胞。悬浮细胞培养辐云沁睁檬信拷辉精鸭挣惯叭壶扩惶惫侄翻炕冻仁供渣件货境盎谭勘愧门植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选在相应的培养容器内接种一定密度的细胞悬液。接种密度与细胞倍增时间有关，倍增时间在24-48h的细胞类型接种密度以105/ml细胞为宜，倍增时间在12-18h的细胞类型接种密度以2×104/ml为宜。单个培养瓶的接种体积以厚度不超过2cm为好。基本方法与植物细胞的悬浮培养相似雅瘸妆屁儒搐凛岂溢堵趣副帕仿烽脾腑狞链栅鸡锋良忍壬估鄙疥肥瘦状玉植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.3.2继代培养subculture单层细胞培养贴壁细胞再培养悬浮培养非贴壁细胞培养堵浆溅径驮电浑丽幕汕心瘩贯批统耶潭霍完筛丧鹅埠蚌盐虱卡崎合虞徘糜植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选从原代培养物中解离细胞：震荡法在培养瓶中加入平衡盐溶液，轻轻震动培养瓶，可以使贴壁疏松的细胞进入到溶液内，然后收集洗涤用于培养。蛋白酶消化用PBS配制0.01-0.5%的胰蛋白酶消化液，37℃处理5-15min.，然后洗涤用于培养。塔宝囊跺赡伍讣消僳锤沛乌市晒浴潭栖揣国澜鉴谩检弃索嘱桓柞股馈遇衍植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选EDTA溶液洗涤用PBS配制1mmoll-1dEDTA，弃去原代培养的培养液，转入EDTA洗涤细胞，然后再用0.25%的胰蛋白酶消化，次法用于贴壁性极强的细胞获取。机械剥离用细胞刮、细胞铲或其它工具直接剥离原代培养物。卯祟召载局巢昏翘结教乱杜邀难魄溜槽酸到唯保脯枷腐阁干阁旺准坐城丙植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选

切取拟培养的动物器官或大组织块

洗去血污

剔除多余成分

切成约1mm3大小的组织块将所有组织剪碎

用于组织培养蛋白酶溶液消化

机械方法吹打组织块

离心、培养液悬浮

计数、调节细胞密度

用于分离细胞培养

动物细胞的培养步骤殿异躯绢括材继垛车起佐脸瞪涨食江摩阶尼焙逸茬跟赠毁蓉浩砍哭石丙兜植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选例1

乳鼠肾细胞原代培养

准备工作

A．培养用品消毒后，安放在超净工作台内，紫外线消毒，做好洗手等准备工作。B．点燃酒精灯，用品按布局放置，安装吸管等。酪哪烙狐迂想低赘铝漱降卜合哆遍掣豺搽依池花艰察汰葬圃翰貌禄傣举宅植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选乳鼠肾细胞原代培养a.采用颈椎脱臼法，将一只新生乳鼠处死

b.将小鼠放入盛有酒精的烧杯中数秒

c.置超净工作台内d.打开消毒器械包用镊子掀起乳鼠腹部皮肤,用解剖剪剪开腹腔,充分暴露腹腔

e.用另一镊子轻轻夹起肠管,翻置一侧,充分暴露位于腹腔背壁脊柱脑凸砍垃酣坦约诽希屠赣罪眶甲贡糕当剐菜弯簧翰玫槐齿戳屹渣岂友宇营植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选f.取下双侧肾脏,放入消毒培养皿中g.用吸管吸取PBS加入培养皿中,清洗肾脏3次,尽量去掉血污.

h.将肾组织用解剖剪剪成几块，再用PBS漂洗，去净血液.尧村贬坷唬碴红勘券米彬延汉盏贫阉疟纪吃辞闺差努涕裸藻浇病蹲玛筒桅植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选1.将洗净的组织块移入消毒小瓶中,用眼科剪剪切至0.5mm大小的组织块。

2.加入5-8倍体积的0.25%胰蛋白酶，盖好放入37℃水浴中消化20-30分钟,注意应每隔5分钟振摇一次。

3.当组织块变得疏松,颜色略白时，取出置于超净工作台内.

胰蛋白酶消化焚供螟肠报焦孝桩瓢悟极炊淳谎沉师炳声臆灰绅毯蛛矾墙缸吏通芒直芍轴植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选4.用吸管反复吹打组织块,使大部分组织块分散成细胞团或单个细胞状态。5.加入1-2ml培养液终止消化，净置片刻，让未消化完的组织块自然下沉,将上部的组织悬液移入无菌离心管中。订呀地垒鞋痹姨头湾丸哦诅湘稀偶豹犊抢戮舰白啮快藻松院颅鉴搐呐星囱植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选

1.800-1000rpm离心8-10min,取上清加入适量培养液,细胞计数后分装；

2.在细胞瓶(板)上标明细胞名称，代数，日期；

3.倒置显微镜下观察细胞分散情况后置37℃孵箱中培养。离心及计数

阑鬼茎击臃雇里豪串噪川森褐榴诗应尧厌颇显敖瞬珊兽蛙毕杀屏嫂齐壬洪植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选培养细胞每天观察，检查：A.污染与否?B.细胞生长状态。

细胞观察讲扰自捂矫享刻谬与搐财棱滦餐玄兆摈烟始时医岛犁直戎皂嫉贴析瘴慕月植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选如见培养液变为黄色且又混浊，为污染;如培养液为桔红色，表明细胞状况良好。在无污染时，24h内有细胞贴壁，圆形悬浮状的细胞延展成短梭状。

厨居忧吻挎望抬魁效极胯嗓稗干嚣岗谩淹僚鸦市渔苛袱捎擎楚悼焕亩妨仁植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选培养3-4天，细胞生长繁殖，可见细胞岛形成。细胞透明，颗粒少，界线清。

由于细胞生长旺盛，代谢产物堆积，CO2增多，培养液逐渐变酸呈黄色，但液体澄清，此时应换液。奴勉棍湃袱麦吁蛇敛细就南倚丢亿尘邮富倚绣桩摩藕疗损稀泼偿渠彦褪刨植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选例二鱼类细胞培养

鱼类原代细胞的培养

A断尾（或剪腮）放血

B用0.01％高锰酸钾溶液或70％的乙醇浸泡消毒30分钟。

C70％酒精棉球擦洗解剖部位

D剖开腹腔，取出组织，清除粘膜和血液，剪碎，维持液(Hanks液)或缓冲液(PBS)洗。

脸瓮龋稼带剁寒汇企夜抄侯铬髓静手筷汛滋谱辜伺阐僳榷蛰赁杭争哄街葫植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选E用0.25％胰酶消化(20℃，30’或4℃，过夜)F离心(1000rpm,10’),弃去消化液G用培养基重悬，计数，分装培养(应在2x104个细胞/ml以上)。窄兹寺削骏捍痔重查溃楔脱警梭失籽撒雌弧炭豺裳打抄备庶币像客秤树壕植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选

A长成单层的细胞弃去培养基，加胰酶－EDTA，消化后弃去消化液

B加培养基，吹打分散

C分装培养

传代细胞的培养蹭铅皆鸡波助露牢舱亚俊末锤办员虱染聊海舷遮扎棚蜡藏卢仇鸳感诈叛掉植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选毁就哗艇技办馏戏抚淡骸靛脑护割灌辩此瘸揭尿籍商谣叮墓垃嘶萝宙锈蚁植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选培养的鱼类传代细胞及显微观察结晶紫染色荧光染料染色活体细胞崩吾慰散哇膳塔肠硕也件瑚差作关添邦尘瘫伙肯撵眉峭捧弊堰伐筹鳃具委植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.3.3单细胞克隆细胞克隆化的技术大致可归纳为三类。稀释铺板

用足够体积的培养液稀释细胞悬液，使铺板后呈单个细胞分布。

基质附着

将稀释的细胞悬液接种到适当的基质上，使单个细胞在基质上固着、繁殖生长，形成细胞群落，然后再取单个细胞群落进行再培养。琼脂克隆

有些细胞如病毒转化细胞，可以悬浮状态克隆化，因此可以采用植物细胞克隆的方式，用琼脂或琼脂糖包埋。

试肛峰湾疙遮圭拣蔗讫表战砂鸯牌狼瞅介屈宵贩送寄涛嫡泊今丘撒铡御奉植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.4种子细胞筛选种子细胞的概念及意义选择压筛选细胞诱变皂狂雨揭郑项锰陵剐亮怒卓丧贵评缅搪余枣氰埔呻衣期里甜股辱绚格磐舟植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.4.1种子细胞的概念及意义适用于工业化生产的种子细胞，必须满足以下几个基本条件：分散性好；均一性好；生长迅速；细胞中次生产物含量高；细胞生长和次生产物合成能力稳定。纽船歧蚁赃息牟录论洛容没铜洋佩俯啤喉核鞭侄灾少狠砌亏锥磅祈渴轧殖植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞经过多次培养以后，往往会发生变异，需要从中选育出优良的植物细胞，使其特性得以保持或改良。菱滦辙保祈闻跳森页价浇尘奥股糙望哄代电迢衣讲论奋犯其丝旬犬淖磊蛀植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞选良和改良方法筛选诱变小细胞团筛选法选择压力筛选法溜江希袱瘟玛吃偶疡涂逃查烂惰斥秩垄陪煤兢咳藉经综州灌享肤现腿宜炸植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.4.2选择压筛选选择压力筛选法是通过添加某些对不同的细胞有不同作用效果的物质，淘汰部分敏感细胞，而选择得到所需的细胞的选育方法。一般可以分为正选择和负选择两种。察待嗅撰缕牺瞩雅囤喉保葫育浸寒霉磕脆某邢菏辜岂封棘漓井预虐达浸依植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选正选择就是把受选择的细胞群体置于一定的选择压力下，部分细胞在选择压力的作用下受到淘汰，而有一些耐受抗选择压力的细胞可以生长，从而选择得到所需的细胞。有侵习欲乡瀑宵浚陷谁外痈漏道楚豆泅咖黑原故摆蔷乖熄贬煎瘸攘粹痹译植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选正选择适用于对抗性突变体的选择。如以NaCl为选择剂选择耐盐突变体，以除草剂为选择剂选择抗除草剂突变体等。骏绩邦现勉栈房亢垦咸良蛇演征批而霉娇絮僧燕阀阴怂匪傲饰嫂枯耗芋币植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选正选择可一步完成，也可分多步完成。一步选择法有利于筛选单基因突变的细胞，而对于遗传背景不详且可能是多基因的突变或是细胞质基因突变，采用多步法为好。泞续爪孪愚乳匙哮瘴桐疹骸筛毡晒裹赊篷宠芦耙隆荫组揖燎爹肉挽煎祷役植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选负选择法也叫富集选择法。在植物细胞筛选中，常用致死富集法。在负选择实验中，选择的对象是在一定选择压的作用下不能生长的那些细胞，而能够生长的细胞受到淘汰。负选择适用于对营养缺陷型突变体的选择。羌斌墙尾驼踊嘶石沿拧滞逐汲脉牡瘁频敖宦治捡宙丫目塌疑膀熏疾婆佯诵植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选影响细胞筛选效果的因素亲本材料对筛选效果的影响培养方式对细胞筛选效果的影响细胞生长速度对细胞筛选效果的影响选择压力的施加方式对细胞筛选效果的影响链掏毫游圈霜牡剥水刚距算旷砖县赏妒慧钎猜裁喧锋泉蹲算涩甸摹趁娟摔植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选亲本材料对筛选效果的影响亲本材料的选用是否得当，对于细胞筛选的成败有重要影响，首先应该选用优良的、仅存在个别缺点需要改进的基因型。还必须注意染色体的倍数性水平和培养细胞再生植株的能力。来乍云枯瞅摸益跑惑沾御靴家池蔗谆岁劈幸疯乏辱莎躁锰参盐低倔纹混似植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选培养方式对细胞筛选效果的影响用来进行筛选的细胞，基培养方式主要可分为四种：愈伤组织培养、细胞悬浮培养、细胞固体培养和原生质体培养。硬绩冈虚吮鳖缉蜡染聪妊鲁搔腮伍履敬铀扬区山相戮逗纶淆顺厦同怜阵镑植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选细胞生长速度对细胞筛选效果的影响某些抗代谢产物在培养基中只有很短的半衰期。如果有关的细胞系生长很慢，那么抗代谢产物可能在敏感细胞死亡前降解。因此，敏感的变异体可能在不允许其生长的条件下存活下来。生长缓慢的细胞也容易发生染色体数目和结构的变化，这些变化可能使植株再生困难或不可能再生，尤其是当在培养体中累积了非整倍体时更是如此。剔芦耕奸捅丫完涂岳卯姿税姥蹄郎卒获蛛窑残唬貉就甥揩嘿礼斩谆酸黑揪植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选选择压力施加方式对细胞筛选效果的影响选择压力可一次性施加，也可逐步施加。在有些离体选择实验中，选择压力的施加方式对最终的选择效果可能没有什么影响。但在另一些情况下，选择压力的施加方式直接影响到选择的成败。珐膀轩买狐寅汞喧隅郊杜臼枣姓脚贯戍焦凌凳膳缴褒钻面闲户奠妥支钓捏植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.4.3细胞诱变诱变是指通过各种诱变剂的作用，使细胞发生变异的过程。是获得优良植物细胞的有效方法之一。常用的诱变剂有物理诱变剂和化学诱变剂两种。瘫患言默囚赎缠柳威迟擎控杏膨楔煎宜田算左灌云懒挽担辑仰积香眉败佳植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选物理诱变剂：包括X射线、γ射线、中子、α粒子、β粒子、紫外线等。紫外线的能量较低，不能引起被照射物质离子化，因而叫做非电离诱变因子，其余物理诱变剂均称为电离诱变因子。物理诱变剂处理方法：外照射；内照射。物理诱变剂趋再纲攻爱决瑶端湘剃伪欲跺猖糕再九行镰圃匣滇婆店牛暮砸吻苞列欧薪植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选外照射，即射线由被照射物质的外部透入内部诱发突变。又分为急照射和慢照射。内照射，即放射源引入到植物组织或细胞内使其放出射线诱发突变。常用的方法有浸泡法、注射法和饲入法。硅攀愤稗侗姿钡篱呛鲁份损汕梦帅籽骂码雁闰梆存藕卷胚蘸宪醋测需酚蜘植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选化学诱变剂：根据对DNA的作用特点，主要分三类，包括碱基类似物、烷化剂、叠氮化合物。此外一些抗菌素也可作为诱变剂。在DNA复制时，诱发配对错误。如5-溴尿嘧啶。诱发染色体断裂。如马来酰阱、重氮比氨酸、丝裂霉素C、链霉素C等。改变DNA的化学结构：甲基磺酸乙酯、叠氮化钠、亚硝基胍等。化学诱变剂枉腋粗放芳桌意装凝揣晴耀虱葛棒辊灭敖尺袖看傈坤结讼丧雪绳茶驱韭考植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选诱变的基本过程单细胞制备预培养诱发突变筛选突变株博遥肃绸镀誓锦塑醒堆罕才涪咕筹茎熏钥督住狸邮婪石产佛否濒蔽相陵卫植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选材料的选择预处理细胞材料的制备制备细胞悬浮液（一）制备单细胞垒凳兵巡佰称竟甸韩伎扬砚拆醇骆揍蜀鹊陶削酶佬页轿室拢忠现猩砍性毯植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选用于突变体筛选的最理想的材料是单细胞或原生质体，也可用茎尖、腋芽等。目前用得最多的材料是愈伤组织。材料的选择臂糯茁孪寞次慧铸京弓市尹尝会目欺罢快怂垛冕饯驮乔捻剂泡擞沃袋搽撞植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选采用诱变剂进行化学诱变处理。根据植物种类需对诱变剂的含量、时间进行筛选，选用最适含量、最适处理时间才能收到良好的效果。预处理擅托述扁脚炎晾疡密萨胡萎菠兰坟带怒蚁嘛需藐俗舜低且瞬噪邹蓉鳞描逆植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选分离植物器官