临床常见病原菌检验-需氧G+球菌检验（微生物检验课件）

第七章病原性球菌及检验病原性球菌:对人有致病性的球菌.主要引起化脓性炎症,又称化脓性球菌，主要有9属。G+C：葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属G-C：奈瑟菌属、卡他布兰汉菌属1.掌握葡萄球菌属生物学性状和微生物检验，尤其是鉴别要点。2.熟悉葡萄球菌属致病性和免疫性。3.葡萄球菌属所致疾病的防治原则。

学习目的与要求第一节葡萄球菌属

(Staphylococcus)45种，21个亚种，最常见、最重要的致病菌是金黄色葡萄球菌G+，球形，无鞭毛、无芽孢，

固体培养基：呈葡萄串状排列

液体培养基：成单、成双或短链状排列（链球菌）一、生物学性状（一）形态与染色金黄色葡萄球菌金黄色脂溶性色素（二）培养特性表皮葡萄球菌在普通琼脂平皿上的白色色素表皮葡萄球菌在血平板上的白色色素中等大小，圆形凸起，不透明、有色、S型菌落。葡萄球菌菌落形态（普通琼脂平板）

液体：均匀浑浊生长金黄色葡萄球菌有透明溶血环。表皮葡萄球菌无溶血环。

耐盐：

10-15%g/LNaCl培养基中生长选择性平板：高盐甘露醇平板，致病菌可分解甘露醇产酸使指示剂呈淡黄色。G-菌在此平板上不生长。

金黄色葡萄球菌在高盐甘露醇平板上的淡黄色菌落选择性平板：卵黄高盐平板，金葡菌可产生卵磷脂酶，分解卵黄在菌落周围形成白色沉淀环。金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌（三）生化反应葡萄糖（O/F）实验：发酵型，分解多种糖类产酸(如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇）、蛋白质、氨基酸F型O型-型（三）生化反应甘露醇发酵试验:金黄色葡萄球菌阳性,其他阴性.（三）生化反应血浆凝固酶试验:金黄色葡萄球菌阳性,其他阴性.

致病性葡萄球菌可产生2种血浆凝固酶：结合型（细菌凝集）游离型（血浆凝固）阳性反应阴性反应SlidexStaphPlus可快速鉴定金黄色葡萄球菌

此试验不仅可检测金黄色葡萄球菌凝固酶，还可检测葡萄球菌A蛋白（SPA）。

（三）生化反应乳胶凝集试验:（金葡菌阳性）（三）生化反应液体培养物煮沸15min

37℃3h甲苯胺蓝核酸琼脂耐热DNA酶试验:致病性葡萄球菌可产生耐热DNA酶分解DNA，使蓝色变为粉色。（金葡菌阳性）（四）抗原构造１、蛋白抗原（ＳＰＡ）：种属特异性，抗吞噬作用２、多糖抗原：型特异性

45个种及21亚种

1、按是否产生凝固酶分类：凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）

凝固酶阳性葡萄球菌：金葡菌

（五）分类:（六）抵抗力

无芽胞菌中最强，耐干燥，对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）院内感染常见菌。所致疾病侵袭性疾病（化脓性感染）（血浆凝固酶、耐热核酸酶）①金黄色葡萄球菌疖、痈、外科切口、创伤等局部化脓性感染。播散入血后可引起全身感染②表皮葡萄球菌医院感染的重要病原菌，尤其见于免疫抑制和中性粒细胞减少患者③腐生葡萄球菌尿路感染④溶血葡萄球菌医院感染。免疫功能低下者，易引起菌血症、外科术后感染等。从泌尿感染检测时数量多或成为优势菌应视为病原菌⑤人葡萄球菌多数为非致病菌，少数可致病，引起败血症毒素性疾病（肠毒素）食物中毒，皮肤烫伤综合征，毒性休克综合征假膜性肠炎长期使用抗生素所致的菌群失调症二、临床意义三、微生物学检验（一）标本采集（二）检验程序（三）检验方法三、微生物学检验（一）标本采集根据病情采集标本

种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。

注意：无菌操作，避免正常菌群污染。（二）葡萄球菌检验程序脓液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液脑脊液血液粪便、呕吐物直接涂片染色增菌培养分离培养（血平板）分离培养（高盐甘露醇平板）取可疑菌落鉴定试验药敏试验涂片染色、触酶试验血浆凝固酶耐热核酸酶甘露醇发酵试验其他鉴定试验报告初报（三）检验方法1、直接涂片适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液）伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等初步报告：“查见革兰阳性球菌,葡萄状排列，疑为葡萄球菌”2、分离培养

50ml葡萄糖肉汤（增菌）

浑浊无菌（7天）报告：无菌生长脑脊液、脓液、穿刺液、咽拭、尿液血平板血液标本5ml粪便、呕吐物高盐甘露醇平板血平板3、鉴定试验（1）触酶试验：葡萄球菌属（+）（2）葡萄糖氧化发酵（O/F）实验（发酵型）（3）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（4）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（+）（5）耐热DNA酶实验：蓝色变为粉色（6）凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定：新生霉素敏感试验金黄色葡萄球菌

表皮葡萄球菌

腐生葡萄球菌表3几种常见葡萄球菌的鉴别细菌菌落颜色溶血触酶凝固酶甘露醇新生霉素金黄色金黄色β+++S葡萄球菌表皮葡萄白色γ+--S球菌溶血葡萄白色β+--S/R球菌腐生葡萄柠檬黄γ+--R球菌形态学检验技术:G+、葡萄串状排列、球菌触酶试验：+葡萄球菌凝固酶试验凝固酶试验：+菌落特征：金黄色，β溶血金黄色葡萄球菌凝固酶试验：阴性新生霉素敏感试验

小结第三节肠球菌属是肠道中的正常菌群；条件致病如尿路感染、腹部和盆腔感染、败血症、脑膜炎；导致医院内感染；临床分离率为第二位阳性球菌。一、生物学特性（一）形态染色

G+球菌，单个、成双或短链状排列。无荚膜、芽胞，少数菌株有鞭毛。

营养要求较高。能在高盐（6.5%NaCl）、高胆汁（40%）、10~45℃生长。

菌落（BA）：中等大小、圆形、灰白色、不透明、S型，有γ、β或α溶血，易乳化。（二）培养特性能分解多种糖类产酸触酶（-）PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺）试验（+）胆汁七叶苷试验（+）--链球菌鉴别（三）生化反应

目前分21种。引起医院内感染常见的是粪肠球菌和屎肠球菌。

（四）分类（五）抵抗力

对理化因素抵抗力弱。但对大多数抗生素天然耐药。二、微生物学检验

（一）标本采集

尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等。（二）检验程序尿液、脓汁、穿刺液血液涂片染色分离培养（血平板、5%CO2）初报挑选可疑菌落增菌培养（葡萄糖肉汤、5%CO2）PYR试验胆汁七叶苷试验6.5%NaCl生长试验血清学试验（D群）报告（三）检验方法1、直接镜检适用于：痰、脓、脑脊液、穿刺液标本。2、分离培养

血平板：灰白色，圆形，中等大小，不透明，S型菌落，周围有α溶血或γ溶血。选择培养基：叠氮胆汁七叶苷琼脂平