细胞遗传学技术

细胞遗传学技术第1页，课件共25页，创作于2023年2月2、绒毛、羊水细胞培养基配置胎牛血清20%1640、HamF10培养基原液80%第2页，课件共25页，创作于2023年2月二、细胞培养方法1、人外周血淋巴细胞染色体制备1）方法静脉血0.3/5ml培养基37℃培养72小时收细胞前2-3小时加秋水仙素制片，染色第3页，课件共25页，创作于2023年2月2）特点取材方便、方法稳定、易掌握和推广3）意义检查该个体体细胞核型2、羊水细胞染色体制备羊水细胞主要来自胎儿皮肤、胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道的粘膜上皮。1）方法：培养15天左右第4页，课件共25页，创作于2023年2月2）特点：（1）孕期为16-20周取材，B超监测取材，专人操作。（2）培养15天左右（3）方法复杂、设备较昂贵、成功率较低。3）安全性：流产率约1%左右4)意义：检测胎儿核型第5页，课件共25页，创作于2023年2月3、绒毛细胞染色体制备绒毛为受精卵经有丝分裂衍生出来的胎儿附属结构1）方法：直接法培养法：短期和长期培养2）特点：（1）孕8-10周取材，B超检测，严格无菌，专人操作。（2）培养15天左右或直接制片（3）直接法较为简单，可避免母体污染，但染色体形态较差，分裂期细胞少。第6页，课件共25页，创作于2023年2月3）安全性：流产率约2-4%4）意义：检测胎儿核型，进行早期诊断。4、骨髓细胞染色体制备技术直接法或培养法意义：（1）血液病的染色体异常检测（2）骨髓细胞染色体畸变作为遗传物质受损检测指标较为灵敏。第7页，课件共25页，创作于2023年2月三、染色体显带技术1、Q显带1）特点：荧光染料染色

1、9、16号染色体着丝粒区和Y染色体长臂部分区域荧光明显2）优点：带纹清晰3)缺点:试剂仪器价高,带纹易退色第8页，课件共25页，创作于2023年2月2、G显带1）特点：胰酶处理、Giemsa染色、带纹与Q带相似2）优点：制作方便、费用低廉、标本易保存3）缺点：带纹不及Q显带清晰第9页，课件共25页，创作于2023年2月3、C显带着丝粒区深染确定着丝粒数目和位置

1、9、16着丝粒区深染而大

Y染色体长臂部分深染第10页，课件共25页，创作于2023年2月第11页，课件共25页，创作于2023年2月四、荧光原位杂交技术

fluorescencein-situhybridization,FISH

1、基本原理

指利用已进行荧光标记的探针与细胞、组织切片上的核酸进行杂交，检测特异序列的DNA或RNA。

它是在细胞遗传学、分子遗传学和免疫学相结合的基础上发展起来的一项技术。第12页，课件共25页，创作于2023年2月2、探针标记的方法

直接法进行标记第13页，课件共25页，创作于2023年2月

间接法进行标记第14页，课件共25页，创作于2023年2月3、FISH技术的特点

①操作操作简便,探针标记后稳定,一次标记后可使用二年.②方法敏感,能迅速得到结果.③在同一标本上,可同时检测几种不同探针.④不仅可用于分裂期细胞染色体数量或结构变化的研究,而且还可用于间期细胞的染色体数量及基因改变的研究.第15页，课件共25页，创作于2023年2月4、FISH在细胞遗传学中的应用（1）重复序列的探针（卫星(satellite)探针）

α卫星DNA探针主要检测人染色体的着丝粒

β卫星DNA位于端着丝粒染色体及各号染色体的异染色体质周围

经典卫星DNA(classic-saielliteDNA)位于染色体1、9、15、16和Y染色体长臂异染色质周围临床应用：羊水细胞可不培养直接筛查21三体Down氏综合片）18三体（Edward综合征），13体（Patau综合征），45、XO(Torner氏综合征)和47XXY（Klinfelter综合征）。

第16页，课件共25页，创作于2023年2月（2）单一序列探针

确定碱基突变、基因缺失、基因定位

第17页，课件共25页，创作于2023年2月第18页，课件共25页，创作于2023年2月第19页，课件共25页，创作于2023年2月（3）全染色体探针(wholechromosomepaintingprobe,WCP)又称染色体涂染探针确定染色体结构畸变

第20页，课件共25页，创作于2023年2月第21页，课件共25页，创作于2023年2月染色体分析技术一、选择分散程度较好、形态规整的分裂相。

能区分染色体的大小和着丝粒位置二、对20-30个分裂相进行染色体计数。

对不同染色体数目的分裂相进行记录辨别制片时染色体丢失还是核型异常第22页，课件共25页，创作于2023年2月三、选择分裂相进行核型分析。

外周血淋巴细胞计数分析20个分裂相，分析5个核型，骨髓细胞分析20个核型。染色体数目异常时，2个以上分裂相具有相同核型视为异常。第23页，课件共25页，创作于2023年2月四、染色体检测报告

报告单位姓名、性别、年龄主要临床症状、本人有害有毒射线等接触史、亲属中流产和遗传病史核型图结果、分