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文档简介

浙江大学细胞培养-基本技术细胞培养基本技术培养技术细胞系的建立和鉴定培养物的固定、染色显微镜观察1、细胞培养技术细胞原代培养细胞传代培养细胞冻存和复苏细胞的运输1.1细胞的原代培养是将机体内的某组织取出,分散成单细胞,在人工条件下培养使其生存并不断生长繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、细胞的衰老、死亡等生命现象。幼稚状态的组织和细胞,如动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养义原代培养的最大优点是细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,具有二倍体的遗传性,而且大多数细胞表现出原来组织的特性。利用原代培养做各种实验(药物测试、细胞分化及病毒学方面)效果很好。原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过的阶段。原代细胞培养的实验目的和要求°掌握无菌操作技术°了解小鼠解剖操作技术了解原代细胞培养的一般方法与步骤了解培养细胞的消化分散°了解倒置显微镜的使用实验材料实验动物:孕鼠或新生小鼠液体:细胞生长液(内含20%小牛血清)0.25%胰蛋白酶平衡盐溶液70%乙醇器材:灭菌镊子、剪刀、灭菌培养皿、细胞培养瓶、小瓶、烧杯、吸管、酒精灯原代细胞培养方法冷消化°胰酶消化法温消化组织块直接培养法消化法:采用无菌操作的方法,把组织(或器官)从动物体内取出,经酶消化处理,使分散成单个细胞然后在人工条件下培养,使其不断地生长和繁殖。切取意欲培养的动物器官或大組织块洗去血污原易多余成分培贴块法消化法养切成约mm,大小的植块将所取组织剪方用于块培养法蛋白酶许诮化机被方法吹打組织块类不锈钢网筛过对滤过液离亡(<』0or/min,<10min)用培养液悬浮成细胞悬液计数并调节细胞密度用于分离细胞培养消化法的分类切成2·3mm”小块加胰蛋白37℃加蛋白配4C消化温消化冷消化加新消优液分次消(2030分钟)包2静沉去种培养化初代培荠法華本步骤粗切细切冲洗,自然沉降留少许BSS继续培养翻转干涸法erA(置37℃温箱中)移入培养瓶中并吸净BSs细胞生长培养24小时后薄层营养补液液培养法外植块培养步骤图解36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙

37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科

38、我这个人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯

39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做

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