临床检验基本技能-细菌接种技术（临床检验技术课件）

细菌接种技术根据培养基的性状可以分为液体、半固体、固体培养基三种。液体培养基固体培养基半固体培养基(动力试验)液体培养基如肉汤培养基是常用的。主要用于增菌培养，也用于接种纯种观察细菌生长表现。半固体培养基多用于观察细菌的动力、保存菌种等。

动力阴性

动力阳性对照固体培养基一般制成平板，用于微生物分离纯化、鉴定以入药敏试验等。固体培养基在试管中可制成斜面用于菌种的短期保存。一、平板划线接种技术（分区划线法）（目的是将混有多种细菌的临床标本，经划线分离使其单个分散生长形成单个菌落。）【器材及试剂的准备】1.接种环2.酒精灯3.普通培养基（普通平板）4.含菌标本5.试管架【操作过程】1.准备工作（1）将需要的器材及标本放置相应的位置（2）在普通平板的背部做上相应的记号（3）将酒精灯点着2.接种细菌（1）右手持接种环手柄，将接种环的白金耳在酒精灯火焰上烧灼至红透（手柄下方4-6厘米处也须通过火焰灭菌），待白金耳冷却后，从标本上钩了一白金耳的混合菌液。（2）左手斜持平板，用手掌托着平板底部，五指固定平板边缘，在酒精灯旁以拇指、食指和中指将平板盖撑开大约30~45°角，尽量保持倾斜或直立姿势（可防止空气中细菌落入培养基），右手持接种环，先将白金耳上的标本涂布于平板培养基表面的一角，并以此为起点划出，划线时使白金耳与平板成30-40度倾斜，利用腕力使白金耳在平板表面轻快滑动划动，每次划线的线条应避免重复。划线范围约占平板的1/4面积作为第一区。（3）将白金耳置于火焰上再将烧灼，待冷却。转动平板90度，将环通过第一区3-4次（注意不能与起点相接触），一样连续划线，线与线之间尽量不要重叠。第二区的面积也约占平板的1/4。（4）依上法继续划出3、4区。【清理】1.将相关器材及试剂放回原位。2.用过的一次性物品丢弃至专用医疗垃圾桶内。二、琼脂斜面接种技术【器材及试剂的准备】1.接种环2.酒精灯3.普通琼脂斜面培养基4.含菌标本5.试管架【操作过程】1.准备工作（1）将需要的器材及标本放置相应的位置（2）在普通琼脂斜面培养基的管壁上做上相应的记号（3）将酒精灯点着2.接种细菌（1）以左手大拇指、食指和中指，竖持试管下端，斜面向上，转动棉塞，便于以后拔出。（2）右手持接种环手柄，将白金耳置于火焰中烧灼灭菌后（手柄下方4-6厘米处也须通过火焰灭菌）待冷，从标本上钩取菌液少取。（3）使用右手小指及手掌移去棉塞，管口通过火焰消毒后，将接种环伸入斜面管内，先从斜面底部到顶端划一条一线，再沿此线自下向上曲线划线。（4）取出接种环，将管口通过火焰，塞好棉塞，再将白金耳烧灼灭菌。3.送37度培养24小时后观察结果。【清理】1.将相关器材及试剂放回原位。2.用过的一次性物品丢弃至专用医疗垃圾桶内。

三、半固体培养基接种技术（穿刺培养法）分辨是否有动力四、液体培养基接种技术细菌在液体培养基中可出现混浊、沉淀及菌膜三种生长现象。思考题在细菌接种过程中，如何做好生物安全防护？各种接种技术的适用范围？细菌接种培养器材

接种环接种针酒精灯或红外接种环灭菌器培养皿培养箱生物安全柜

接种环(针)

是取菌、接种及分离细菌的工具。接种环用于平皿的划线分离培养、纯菌挑取转种和制备菌涂片，接种针主要用于挑取单个菌落进行穿刺接种或者斜面接种。5-8cm14.5cm7.5cm2-4mm酒精灯红外接种环灭菌酒精灯

采用灼烧进行灭菌。

酒精灯使用①酒精灯使用前，先要检查灯芯，如果灯芯顶端不平或已烧焦，需要剪去少使其平整，然后检查灯里有无酒精，灯里酒精的体积应大于酒精灯容积的1／4，少于2／3  。②取下灯帽，提起灯芯管一下，再放下。③应用火柴或打火机点火，绝对禁止用酒精灯引烧另一盏酒精灯。④在给接种环或接种针加热时,应用外焰加热,因为外焰温度最高。⑤使用完酒精灯，从侧面盖上盖子，火灭后，将盖子取下一次，待盖子冷却后，再将盖子就位。

注意事项

①不要碰倒酒精灯，万一洒出的酒精在桌上燃烧起来，不要惊慌，应立即用湿抹布扑盖。②不能在燃着酒灯时添加酒精，酒精量不超其容积的2/3，也不能过少。③严禁用燃着的酒精灯去点燃，用酒精灯的外焰加热物质。④熄灭时用灯帽盖灭，灯要斜着盖住，否则有危险。⑤不可用嘴去吹灭，否则可能将火焰沿灯颈压入灯内，引起着火或爆炸。⑥不用时盖好灯帽，以免灯芯留水难燃。红外接种环灭菌器

采用红外线热能进行灭菌。使用方便、操作简单、无明火、不怕风、使用安全。可广泛使用于生物安全柜和厌氧培养箱等环境中。加热区域加热孔电源开关底座红外接种环灭菌器

操作：插上插头，打开电源开关，加热，接种环加热灭菌，使用完毕后，关掉电源开关、拔下插头。加热区域加热孔电源开关底座培养皿培养箱培养皿

制备固体琼脂平板常用的器皿。常用的规有：50mm×10mm、75mm×10mm、90mm×10mm、100mm×10mm等；

皿盖与皿底大小要吻合，使用时开盖应自如。培养箱

提供细菌生长繁殖所需适宜温度和气体成分的装置。

普通生物培养箱：用于普通细菌培