检验仪器操作技能-分光光度计的操作（临床检验技术课件）

光谱分析技术--分光光度计一、光谱分析技术的基础理论朗伯-比尔定律1.透光度：2.吸光度：一、光谱分析技术的基础理论I0：入射光强度C:溶液浓度b:液层厚度I:透射光强度T:透光度A:吸光度k:吸光系数一、光谱分析技术的基础理论3.吸光系数

Lambert-Beer定律中的比例系数“K”的物理意义是：吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸光度，称为吸光系数。（1）摩尔吸光系数（）：当c用mol/L、b用cm为单位时，用摩尔吸光系数

表示，单位为L/mol·cm

A=·b·c（2）比吸光系数当c

用g/L，b

用cm为单位时，K用吸光系数a

表示，单位为L/g·cmA=a·b·c

一、光谱分析技术的基础理论朗伯比尔定律适用条件：1.入射光为单色光。波长范围越大，单色光纯度越低，对朗伯比尔定律的偏离越大。2.溶液中邻近分子的存在并不改变每一给定分子的特性，即分子间不干扰。当溶液浓度很大时，由于溶液分子的相互干扰，该定律不再成立。二、可见分光光度计分光光度计:能从含有各种波长的混合光中将一单色光分离出来并测量其强度的仪器。分析精密度高分析速度快样品用量少二、可见分光光度计

根据使用的波长范围不同分为紫外光区、可见光区、红外光区以及万用（全波段）分光光度计等。射线x射线紫外光红外光微波无线电波10-2nm10nm102nm104nm0.1cm10cm103cm105cm可见光二、可见分光光度计可见分光光度计：工作波段在400nm～800nm的分光光度计。

其中：

200nm～400nm为紫外光区。

400nm～800nm为可见光区。（一）可见分光光度计的基本结构和工作原理0.208单色器吸收池光源检测器显示系统（一）可见分光光度计的基本结构和工作原理光源：提供入射光的装置。

要求:

1.能在所需波长范围的光谱区域内发射连续光谱；

2.有足够的辐射强度并能长时间稳定。

常用的光源有：热辐射灯（钨灯、卤钨灯等），气体放电灯（氢灯、氘灯及氙灯等），金属弧灯（各种汞灯）等。（一）可见分光光度计的基本结构和工作原理单色器：是将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的装置。

入射狭缝：限制杂散光进入。

色散元件：将复合光分解为单色光，有棱镜和光栅两种。

准直镜：将来自色散元件的平行光束聚集在出射狭缝上。

出射狭缝：将固定波长范围的光射出单色器，可以限制通带宽度。（一）可见分光光度计的基本结构和工作原理吸收池：是用来盛放被测溶液的器件。在可见光区常用无色光学玻璃或塑料制作；在紫外区需用能透紫外线的石英或熔凝石英制作。（一）可见分光光度计的基本结构和工作原理检测器：把光信号转换为电信号的装置。

对检测器的要求：

1.产生的电信号与照射到它上面的光强有恒定的函数关系

2.波长响应范围大

3.灵敏度高；

4.响应速度快，一般要求小于10-8s；

5.产生的电信号易于检测、放大，噪声低。（一）可见分光光度计的基本结构和工作原理信号显示系统:

是把放大的信号以适当的方式显示或记录下来的装置。信号显示装置直读检流计电位调节指零装置自动记录和数字显示装置（一）可见分光光度计的基本结构和工作原理仪器结构1.样品室用于放置参比样品和待测品2.波长调节旋钮，波长显示窗

：转动波长调节旋钮，从波长显示窗观察，调整至需要的测试波长。3.控制面板用于操作和控制仪器。4.样品架拉杆推拉拉杆可变换样品架位置。（一）可见分光光度计的基本结构和工作原理1.显示屏：

可显示透射比、吸光度和浓度。2.模式显示：四个圆点分别指示当前的测试方式（721型仅有A、T）3.模式转换键：

按动此键便可切换测试模式。A吸光度T透射比C浓度F斜率5.调100%键（▲）6.调0%键（▼）（二）可见分光光度计的类型按其光学系统分可分为：单波长分光光度计单光束单波长分光光度计双光束单波长分光光度计双波长分光光度计

（三）可见分光光度计操作预热仪器：将选择开关置于“T”，打开电源开关，使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开或将黑体放置在光路上，使光路切断。准备硫酸铜溶液、蒸馏水、比色皿（1cm)、擦镜纸。调节波长：旋动波长旋钮，调节所需波长为500nm。调透光度“0”：按“MODE"按钮，选择到“T”钮，打开试样室盖或将黑体放置在光路上盖上试样室盖，按住“0%”按钮，使数字显示为“0.00”。（三）可见分光光度计操作调节透光度“100%”：将蒸馏水作为空白试剂，用一个比色皿装上（装液量大约为比色皿的2/3高度），同时也将硫酸铜溶液装上比色皿，两者同时放置在比色皿架中。合上试样室盖，推动试样架拉手，使空白试剂比色皿置于光路上，按住“100%”按钮，使数字显示为“100.00”。测定吸光度A：按“MODE”按钮，选择“A”，推动试样架拉手，将硫酸铜溶液置于光路上，数字显示器上即显示出溶液的吸光度“A”重复三次上面操作，分别测出硫酸铜溶液A1、A2、A3值，取平均值。(四)注意事项预热仪器是保证测定准确稳定的重要步骤。比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此，特别要将比色皿清洗干净。先用自来水将用过的比色皿反复冲洗，然后用蒸馏水淋洗，倒立于滤纸上，待干后再收回比色皿盒中。比色皿与分光光度计是配套使用。比色皿内盛液量应为其容量的2/3，过少会影响实验结果，过多易在测量过程中外溢，污染仪器。拿放比色皿时，应持其毛面，杜绝接触光滑面。如比色皿外表面有液体，应用绸丝拭干，以保证光路通过时不受影响。（五）可见分光光度计常见故障及排除方法

分光光度计常见故障包括光路、电路故障。根据故障不同应采取不同的排除措施。接通电源后