第28章-临床生化专用自动分析课件

温州医学院陈筱菲第二十八章

临床生化专用自动化分析第1页第2页

浊度自动化分析电解质自动化分析电解质（自动化）分析血气（自动化）分析小结主要内容2以上分析技术均有专用分析仪浊度自动化分析仪：免疫比浊法，测定蛋白质抗原和抗体反应产生的细小混浊，生化检验指标包括血清PA、AAT、Hp、Cp、CRP、IgG等，及某些尿液蛋白等。电解质自动化分析仪：利用电化学原理中的离子选择电极法，测定K+、Na+、Cl-、Ca2+等。血气分析仪：利用电化学原理，测定血液气体和pH，包括PO2、PCO2、pH，再计算出其他血气和酸碱指标。3教学目标与要求

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熟悉浊度、电解质和血气测定的校准要求

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了解电解质测定和血气测定各电极的成分

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掌握浊度、电解质、血气（自动）分析仪检测的是什么常规生化指标；电解质和血气分析样品要求。4第5页第一节浊度自动化分析

浊度（turbidity）：是指溶液中悬浮物对光线透过时所发生的阻碍程度。浊度分析（Turbidityanalysis）：通过检测光线的反射或折射强度，或检测透过光强度来对物质进行定量分析。5第6页（一）浊度分析的基础理论粒子对光具有反射、折射、散射和吸收等作用。1.胶体溶液2.光透射理论朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律：3.光散射理论雷莱（Rayleigh）公式：散射光强度一、浊度分析的基本原理和方法6第7页

一定条件下，抗原与抗体在液相中特异结合，形成有一定大小的抗原-抗体免疫复合物颗粒，反应液出现混浊。测量透射光或散射光信号强弱，可推算出被测物的量。4.免疫浊度分析临床浊度分析中基本都是7

第8页（二）浊度分析的基本方法5o～90o角：0o角：8

第9页浊度法的分类2.终点散射浊度法检测反应终点与起始点之间信号变化的方法。3.速率散射浊度法在抗原与抗体反应的最高峰测定其复合物形成的量。速率指抗原抗体结合反应过程中，单位时间内两者结合成复合物的量。

1.透射浊度法9第10页由大小适中、均匀一致的胶乳颗粒吸附或交联抗体，遇到相应抗原时发生聚集。敏感度较高。单个胶乳颗粒大小在入射光波长之内，光线可透过。当两个或更多胶乳颗粒凝聚时，透过光减少，光减少的程度与胶乳凝集量成正比。粒子强化免疫浊度法10

第11页（一）浊度分析仪分类1.分光光度计可做透射比浊法。2.自动生化分析仪可做透射比浊法。3.散射浊度分析仪能做散射比浊法，临床上又称为特定蛋白分析仪。二、浊度分析仪的分类和基本结构11

第12页（二）特定蛋白分析仪的结构分析系统：类似于自动生化分析仪（较简单）用于加样、稀释、保温和测试等包括散射测浊仪、加液系统、试剂转盘、样品转盘等计算机系统用于输入病人数据、选择程序菜单、计算参考曲线和储存测试结果12

（一）一般操作步骤

1．开机前准备2．开机3．校准：采用多点校准的方式进行校准。4.测定质控5.测定样品

三、特定蛋白分析仪的使用13

第14页1.日保养2.周保养3.月保养4.半年保养（二）常规保养14

第15页1.抗原过剩校正免疫浊度分析的基本要求：始终保持反应体系中抗体适量过剩。抗原过剩的检测方法：①连续监测抗原抗体反应曲线是否呈现异常。②反应体系中追加抗体，浊度增大提示抗原过剩。③待测标本用两种稀释度测定，浓度高的样本浊度反而降低则提示抗原过剩。（三）注意事项15第16页（二）减少伪浊度伪浊度：由待测抗原抗体免疫复合物产生的浊度外，其它可引起透射光或散射光发生变化的信号。减少产生伪浊度的方法：1.标本：采用新鲜、合格标本。脂浊标本影响浊度。2.检测体系：保持比色杯和稀释杯清洁。3.试剂：使用合格的抗体试剂。4.增浊剂浓度：严格控制。16第17页特定蛋白临床常规项目四、特定蛋白浊度分析的临床应用17

第18页第二节电解质自动化分析电解质在溶液中能解离成带电离子而具有导电性的一类物质主要指体液中最常测定的Na+、K+、Cl-、Ca2+、Mg2+、HCO3-和无机磷等。电解质分析仪（electrolyteanalyzer）离子选择电极法（ISE）测量溶液中离子浓度的仪器。Na+、K+、Cl-、Ca2+常规采用ISE法18第19页（一）电解质分析仪的原理离子选择性电极（ISE）由特殊敏感膜制成，对溶液中某种特定离子具有选择性响应的电化学传感器。通常由电极管、内电极、电极内充溶液和电极膜（或称敏感膜）四个部分组成。一、电解质分析仪的原理和方法19第20页电极电位产生大多数电极膜电位的产生是基于膜材料与溶液界面发生的离子交换反应。电极电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系Nernst方程式：

±：阴离子时为－，阳离子时为＋

20第21页电极电位测量ISE的EISE值的测定将ISE与参比电极共同浸入待测样品中组成一个原电池，通过测量E电池来测定EISE值。在一定条件下，原电池的电动势与被测离子活度的对数呈线性关系。21SampleSolution参比电极HalfCell测量电极HalfCell测量电动势EMF离子选择膜

参比液渗透膜参比电极电极内液电极芯电极芯22第23页湿式电解质分析仪结构框图

二、电解质分析仪的基本结构和分类（一）电解质分析仪的基本结构组成ISE组液路系统电路系统程序控制模块显示操作系统23测量室,电极,电极支撑ISEBG24第25页电极

液路系统由标本盘、溶液瓶、驱动电机、采样针、电极管路系统、蠕动泵、三通阀、管道等组成。Na+

电压测定法(Na+选择玻璃)

K+电压测定法(生物离子选择膜)

Cl-电压测定法(PVC离子选择膜)

Ca++

电压测定法(PVC离子选择膜)25第26页（二）电解质分析仪的分类1.按自动化程度分类分为半自动和全自动电解质分析仪。2.按工作方式分类分为湿式和干式电解质分析仪。3.按仪器的功能分类可分为电解质分析仪、含电解质分析的血气分析仪、含电解质分析的自动生化分析仪等。26

（一）一般操作步骤

1．开机前准备2．开机3．校准：应使用两水平的校准液

4.测定质控三、电解质分析仪的使用27第28页（1）样品要求：若使用抗凝血浆，不能采用含钠钾的抗凝剂建议使用肝素或肝素锂

血浆钾比血清低0.2mmol/L～0.5mmol/L因血液凝固时血小板破裂会释放出一部分K＋。应避免溶血，否则K＋由细胞释出增多血清或血浆样品应及时分离，久置血细胞中钾释放。

5.样品分析28

第29页*（2）样品分析方法直接法指样本不经稀释直接由电极测量离子活度；优点是可采用全血测定，它迅速方便，结果准确，不会因血清中水体积所占比例改变而影响结果。29

第30页间接法：多用指样本经一定离子强度缓冲溶液稀释后测量优点：样品用量少，电极使用寿命长缺点：高脂样品可造成假性低钠血症因脂蛋白分子体积大，稀释后脂质占据体积比减小。而细胞外液以钠和氯为主，因此表现为假性低钠血症和假性低氯血症，钾离子影响小。30

第31页1.日保养2.周保养3.月保养6.分析后保养31

第32页血气分析仪

(bloodgasanalyzer)应用电化学分析技术和原理，采用电极对血液中的pH值、PCO2和PO2进行测定的分析仪器。第三节血气自动化分析32一、血气分析电极pH电压测定法(H+

离子选择玻璃)

pCO2电压测定法(CO2树脂选择膜)

pO2

电流测定法(极化电极法，O2选择膜）33氧电极34第35页由电极系统、管路系统和电路系统三大部分组成。二、血气分析仪的基本结构35第36页管路系统1.气路系统提供PO2和PCO2电极定标时所需的两种标准气体。高标气10%CO2(不含O2)；低标气5%CO2和20%O2

2.液路系统（1）为pH电极定标提供两种标准缓冲液。

pH6.841和7.383（2）管道冲洗液36液体定标系统 Roche专利的液体定标系统用于标定以下参数：

血气: pH,PCO2

电解质: Na+,K+,Ca++,Cl-

PO2:用仪器内部的氧零点液和室内空气定标20%O2

Cobasb221

–定标原理37

SolutionA酸性液体= H+ CaCl2 = Ca2++2Cl-

Solution

B

Na2CO3(NaHCO3)

= Na+

+HCO3-+CO32-

NaCl = Na++Cl-

KCl = K++Cl-Cobasb221

–定标原理H+,CO2,Na+,K+,Ca2+,Cl-H++HCO3-

=H2O+CO2A、B混合比例1:2和3:238

三、血气分析的指标（一）pH：血液中[H+]浓度的负对数。正常人7.35-7.45（二）PCO2：正常人PO2

80-100mmHg（三）PO2：正常人PCO2

35-45mmHg（四）氧饱和度（SO2）：指血液在一定的PO2下，氧合血红蛋白（HbO2）占全部Hb的百分比。39

（五）实际碳酸氢盐（AB）与标准碳酸氢盐（SB）AB：血浆中HCO3－的实际浓度，代谢性酸碱中毒的重要指标，也受呼吸因素影响。

AB=0.0031×pCO2×10(pH－6.1)SB：37℃时用PCO2为40mmHg及PO2为100mmHg的混合气体平衡后测定的血浆HCO3－浓度，反映代谢性酸碱中毒。

SB=[40×10（pH－7.608）]

（六）缓冲碱(BB)：具有缓冲作用的阴离子总和包括HCO3－、Hb、血浆蛋白及少量有机酸盐和无机磷酸盐。

BB=BE+41.7+0.42×Hb40

（七）碱剩余（BE）在37℃和PCO2为40mmHg时，将1L全血pH调整到7.40所需强酸或强碱的mmol数，是代谢性酸碱中毒的客观指标

BE=HCO3--24.8+16.2×(pH–7.4)（八）阴离子隙（AG）未测定阴离子（UA）与未测定阳离子（UC）之差。AG=（UA-UC）=NA+-（Cl-+HCO2-）（九）肺泡-动脉氧分压差（A-aDO2）

是判断肺换气功能的一个指标

A-aDO2=[FiO2×(BP–47)－

PCO2]－PO2