第章基因重组和基因工程本科

基因重组和基因工程

GeneticRecombinationandGeneticEngineering第14章第二节

重组DNA技术

又称DNA克隆或分子克隆

DNARecombinationTechniqueisalsoCalledDNACloningorMolecularClone重组DNA技术的发展史1865年G.J.Mendel的豌豆杂交试验。1944年O.T.Avery的肺炎球菌转化实验。1973年美国斯坦福大学的科学家构建第一个重组DNA分子。1977年美国南旧金山由博耶和斯旺森建立世界上第一家遗传工程公司，专门应用重组DNA技术制造医学上重要的药物。1980年开始建造第一家应用重组DNA技术生产胰岛素的工厂。1997年英国罗林研究所成功的克隆了多莉。1躺4仍8矛天克欣隆刃是俊人浴类济在泼生厌物晒科议学味领那域域取童得驼的亦一失项芒重愁大致技咸术夜突驰破率，兰反筒映瓣了签细过胞柏核框分则化纳技咏术冠、膨细奶胞言培贴养镜和出控逗制壳技隔术拣的喜进岸步沟。捡原点是抚英创文卧c撑l污o休n各e疗的卷音愧译觉，姜意寸为光生类物约体辞通拥过沃细标胞扒进稍行离的缠无骨性鉴繁多殖易形屈成英的枯基略因驴型宽完听全性相鹅同岸的壮后肥代铺个焰体愚组粉成型的核种核群甲，势简边称签为什“士无托性炕繁盲殖烂”组。一辩、踩重踢组冠D挤N庭A际技躁术浩相锣关栗概宋念克打隆祖(析c忌l编o济n吧e星)桨:来雀自鹊同市一抄始边祖业的阶相剃同姿副店本释或配拷杰贝我的繁集眠合垫。（或）获馆取征同端一垂拷责贝词的揪过则程强称率为新克乔隆倦化误(隔c扫l扒o樱n稠i迎n膨g眨)肤，往即霜无韵性拴繁妇殖江。（柏一庙）吧D添N肚A湾克映隆技卸术扬水译平勇：分嘴子茂克贤隆驰(谎m想o镜l业e还c拦u喇l酸a该r插c倒l紧o违n汤e士)（跑即信D座N未A早克驻隆肆）将勒某团一怜特腾定袋D稿N马A近片没段爹通捕过罚重甩组碎D湿N仅A家技欢术晨插探入惠到派一酷个免载将体附中重，想然碍后吉在攻宿胳主咳细模胞款中礼进朋行铁自榨我半复场制众所素得误到布的福大赔量犯完户全挖相浊同后的灿该转D劈燕N休A花片吐段征的宗“点群传体废”企。细扑胞眯克龄隆炕：咬由脑单司一创的诸共旺同殊祖届先友细灵胞厘分哥裂耗形射成暑的傅细煮胞群矛体岸。个袜体畏克漠隆万（乱动荣物术或槽植血物代）赔：怪基话因刻完窃全意相随同带的妻两荷个乘或更箱多浙的勉个坝体恩组泡成签的摘群毕体笼。应齐用技酶企学岗的艳方杯法每，跌在与体缎外相将伴各赵种伯来搏源张的饺遗饥传禁物稿质枝（炉同誓源拌的尖或衰异稼源绣的命、拔原围核由的细或辛真黎核食的迟、册天参然番的殿或谢人赛工棚的贴D丈N健A粒）吉与蛮载肤体伯D面N段A改接搂合译成遍一民具鼻有侄自耻我询复探制贿能佩力尊的华D层N到A工分话子恳—仆—户复拜制厘子权(愧r划e尸p抖l结i娃c裹o鞠n倾)竭，凝继兴而坛通查过霞转俘化茶或苦转妹染利宿充主辽细旨胞研，拴筛喜选然出熟含栗有孟目挠的程基玩因伞的丈转薪化蔽子朱细马胞酬，谎再倍进逮行意扩问增奴提至取袄获终得旬大翅量彩同末一远D播N够A膛分院子葬，硬也领称基从因印克胀隆列或居重用组启D高N笨A求(乖r若e畅c益o稼m镰b绒i析n衔a佳n衡t圆D教N脊A帝)。D卧N僻A硬克封隆（栽）D欠N酬A蒙克率隆各种来源DNA＋载体DNA复痰制梯子仁(卵r锦e爬p诉l吵i是c质o枝n膀)酶仍学狼方浊法宿蚕主香细寨胞转除染转首化转喂化网子徒细员胞筛塑选扩电增提剥取获券得弦大赏量烤同惹一驴D盖N玩A秒分助子生雨物标技饮术者工威程贪:基帅因游工只程芦、聚蛋播白抹质腹工客程但、柜酶挠工节程杀、些细什胞慨工挂程塘等目芒的菌：①搁分年离斯获凶得膨某拥一凭感此兴法趣累的宋基贯因茅或典D戴N负A②皮获但得虏感形兴泛趣半基呜因毕的峡表紫达柜产膏物生（拘蛋汪白王质伸）基吹因何工降程胶(慢g庸e下n终e愈t颗i阶c茄e扎n葵g悦i叠n闯e义e主r超i朗n缠g淡)—事—狡实咏现糠基亡因娇克惜隆净所耍用竿的那方臣法陆及铃相删关巩的罩工蛇作株称杯基映因钻工企程字，协又代称短重极组腥D崖N校A付工榜艺宵学渣。（费）（草二秆）抢工兆具沉酶限唯制陈性殿核箭酸佣内被切圣酶K老l欠e河n响o饲w掏片殿段锹：逝D浩N引A机聚客合秩酶痒Ⅰ从大宰片合段逆粒转觉录您酶D洽N根A嫂连棉接忆酶碱浴性尝磷扑酸率酶末骄端缩慧转攀移嗽酶T腾a郊qD梁N弱A扇聚工合糟酶重悉组秘D皮N茧A抵技佳术遣中双常逮用帽的滨工跟具融酶工具酶功能限制性核酸内切酶识别特异序列，切割DNADNA连接酶催化DNA中相邻的5´磷酸基和3´羟基末端之间形成磷酸二酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接DNA聚合酶Ⅰ合成双链cDNA分子或片段连接缺口平移制作高比活探针DNA序列分析填补3´末端Klenow片段又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的53聚合、35外切活性，而无53外切活性。常用于cDNA第二链合成，双链DNA3末端标记等反转录酶合成cDNA替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5´羟基末端磷酸化，或标记探针末端转移酶在3´羟基末端进行同质多聚物加尾碱性磷酸酶切除末端磷酸基限翅制土性凳核费酸腊内捧切运酶(r咳e捡s渠t透r模i太c沙t雅i棕o洗n责e跨n匹d盲o君n冒u权c加l李e纺a侮s柜e窜)限帆制麻性砌核捧酸除内蒙切惧酶(领r绣e批s齐t狭r碧i味c贪t煮i藏o命n诵e居n键d深o遭n奖u哑c摘l联e峡a渣s酷e革,擦R到E瘦)是仰识赠别饭D馒N办A倾的米特厅异寒序啦列业,懒并墨在疤识曲别莲位巾点摆或与其伟周肆围垄切够割粮双仆链闭D陈N挨A亭的齐一汪类誓内名切败酶紫。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+B钻a弹mH赞Ⅰ定紧义俗：（皱）此捐酶悼存喂在司于链细酱菌斜体觉内屿，掀与朱甲裕基鞭化胸酶漂共赠同拣构遍成吊细辽菌魔的参限奇制洒-踏修版饰喜系陕统霸，齐限笋制滨外慢源侧D法N节A拉，案保在护违自拦身厅D挪N增A赖。Ⅰ五、罚Ⅱ虹、罩Ⅲ借（遍基展因视工梁程路技茧术其中仔常讯用饭Ⅱ向型门）分和类泼：作魂用外：第恶一周个县字螺母次取故自举产应生驳该环酶否的妻细棵菌悦属俗名柔，捎用赛大判写型；第顾二甘、持第则三像个才字炕母锁是甩该竭细纲菌吐的涝种厉名恒，校用凝小亚写粗；第贞四透个激字乒母纸代梦表陶株恨；用插罗虏马湖数铁字渗表躺示乒发载现献的色先侧后将次默序载。命篇名和：Hi确ndⅢ属

系

株序Ha避e匆m泻o枕p姑h岁i员l桂u街si坊nf店l鸭u肿e曲n戴z偏a杜ed株流滋感姓嗜它血禾杆巡寿菌d株料的箱第任三杨种昂酶双骗链桃D世N庙A郊中枯含未有阶两财个改结咸构热相剖同管、止方拿向徒相惜反蚕的好序盟列岔，鉴称猪为帐反治向弟重搂复转序苗列蓄，脊也凯叫壮回箱文颈结物构藏。然即企每桐条款单辟链馒以煎任征一草方膊向镜阅柏读典时亏与贵另美一牺条桐链铜以枕相吐同鞠方杂向完阅缓读需时挠的舒序走列战是膛一删致伯的疾。限境制怜酶暂（叮Ⅱ征型哗）毅识蜻别耀及预切校割纯位强点Ⅱ帝类步酶或识派别欧序歌列煌特亡点—炕—回毫文查结打构（央）B赶a悟mH据ⅠGTCCAGGCCTAGGATCCG+GGATCCCCTAGGH告i伐nd度ⅡGTCGACCAGCTGGACCTG+平筐端庙切抽口（努切属割拔点皇是歼识诵别有序迈列稍的稿对述称危轴快）粘指端司切便口切吐口佣：平劣端夏切态口煮、则粘炉端跨切竟口5ˊ－粘性末端3ˊ－粘性末端3暖’窑突矛出烛粘门性关末躺端GATCCG+5伪’励突轮出阅粘辫性挽末妥端GATCCG+GCCTAG5’GCCTAG3’来荒源差不恒同陆的木限爸制质酶里，没但户能在识旧别茫和飞切浓割鸭同植一孟位膛点为，夸这史些竭酶情称同屡功易异委源哥酶。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+B谦a疤mH卫ⅠGGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+B每s饰tⅠ同拍功泄异爸源妄酶悬：有孙些翠限鲜制句性酿内翅切权酶亦虽坚然看识明别肾序抓列军不掌完概全前相规同说，侦但福切费割艺D救N村A章后工，斯产折生盯相挽同鹊的叛粘梦性水末库端抵，亦称劳为税同设尾克酶当。菌这齿两愧个尚相正同循的隙粘黄性创末猛端佳称弓为瓶配酸伍更未槐端米(栗c尚o黎m蠢p境a修t馋i施b传l亮e客e肯n禾d痕)问。B枣a燥mH稳ⅠB惜gl称ⅡGGATCCCCTAGGAGATCTTCTAGAGCCTAGGATCCG++ATCTAG

GATCTA同灶尾瓶酶名称识别序列及切割位点名称识别序列及切割点切割后产生５’突出末端:BamHⅠ5’…G▼GATCC...3’BglⅡ

5’…A▼GATCT...3’EcoRⅠ

5’…G▼AATTC...3’HindⅢ

5’…A▼AGCTT...3’HpaⅡ

5’…C▼CGG...3’MboⅠ

5’…▼GATC...3’NdeⅠ

5’…GA▼TATG...3’切割后产生3’突出末端:ApaⅠ

5’…GGGCC▼C...3’HaeⅡ

5’…PuGCGC▼Py...3’KpnⅠ

5’…GGTAC▼C...3’PstⅠ

5’…CTGCA▼G...3’SphⅠ

5’…GCATG▼C...3’切割后产生平末端:AluⅠ

5’…AG▼CT...3’EcoRⅤ

5’…GAT▼ATC...3’HaeⅢ

5’…GG▼CC...3’PvuⅡ

5’…CAG▼CTG...3’SmaⅠ

5’…CCC▼GGG...3’限趣制萄性吐内胡切丘核吵酸衰酶（计三堆）淹目男的押基板因(烈t动a收r琴g炉e本t虎g深e笑n喊e仆)（姻）c悔D谅N久A敢(骂c硬o绳m趁p亏l勺e民m昆e涂n秀t粉a树r师y烈D恢N奏A胸)指迈经摄反旷转净录妥合踪蝶成辨的块、杀与来R寻N笨A葬(凝通答常拳指详m掩R横N悠A斥或牌病坝毒纽奉R步N拿A超)柱互跑补违的签单纺链淹D剪N恳A印。遣以灯单劝链戏c浪D刺N狂A导为霉模池板字、裂经华聚汗合概反槐应娇可耽合雷成顶双疲链馒c延D唐N军A阀。基摊因如组银D落N飘A涛(密g壶e滑n例o酸m均i跌c嫁D出N检A饶)指伟代泳表命一驶个巷细宏胞缴或慢生天物船体恨整读套构遗练传译信颠息掏(蚊染识色率体躲及正线省粒仁体店)电的涂所张有叨D宫N鬼A敞序躺列斯。（嫁四片）值基亚因傅载描体定秒义为店携窄带滨目境的望基姥因赴，权实奖现辱其切无阿性详繁呆殖傍或寸表饼达倦有够意骄义诱的世蛋及白归质区所连采能用娘的纱一鬼些定D赶N棚A宫分馆子传。常春用临载总体（倡）质勺粒还D均N固A呼、诵噬章菌绳体键D坐N块A追、降病感毒礼D仿N迎A这布些披载均体垃均桶需衣经羞人柔工室构榨建强，鄙除地去田致句病分基梦因辽，汗并牛赋等予才一倍些趋新印的州功更能凯，址如楚有熄利跨于理进岩行短筛闹选债的臂标线志鼓基桑因穗、小单如一屿的暮限嘱制嫁酶父切合点纲等巴。载语体轧的灶选童择文标沉准俯：能录自躺主并复谈制驰；具甚有扇两泼个枕以患上翁的快遗驼传奇标级记动物激，涛便妹于宁重转组昨体容的造筛虎选丽和帖鉴沫定叶；有涂克掘隆禾位住点茎（槽外台源委D固N赴A尚插巨入阀点雅）追，汉常辰具谜有昼多细个哑单抗一匙酶阀切熄位覆点赚，裂称浸为顷多刮克伐隆舅位虚点浓；分眯子拼量秧小见，皇以驾容私纳钢较休大嚼的俘外鄙源切D冶N汁A胃。克烂隆释载嘉体揪(慌c怠l弓o损n拆i辽n举g舌v蚕e孙c斩t恭o胸r施)为位使检插持入侄的紫外甲源无D功N忍A散序棚列倘被芦扩膊增秩而中特盗意拼设乒计射的蹄载化体厘称火为克耕隆杠载志体。表叫达撑载粪体辽(本e乓x畏p更r灰e检s氏s辉i扶o芳n控v蜡e肉c影t查o吼r固)为芳使芳插挥入界的巴外吐源保D翻N硬A吵序沸列壤可钻转吓录微翻晶译帮成旺多销肽续链表而慰特肌意添设位计坛的丹载便体委称收为表姑达纵载绞体。质棚粒(个p封l与a浊s况m暗i冈d态)特属点葛:能倡在童宿杜主帝细纤胞胳内睁独检立邪自爹主酬复脂制棕；种带置有诊某掌些甲遗浅传织信框息秀,揉会虫赋盈予自宿悦主检细伤胞粪一筒些眨遗角传补性踩状帅。概烘念魂：是青存胳在索于殊细云菌刃染慈色坛体谅外抚的进小旷型规环煎状淹双捞链惊D舱N锯A偶分朱子享，参大碰小害为沾1豆-狡2精0监0粒k故b朽。耐四环素基因耐氨苄青霉素基因λ洞噬尿菌孟体丽D如N灭A序改跑造单系镜统λ睬g稍t喊系牲列搂（刚插倦入惹型峡，庸适客用很c速D督N册A和克信隆茶）E情M堂B删L俯系舅列队（界置箩换众型舍，触适霉用哪基巡寿因盲组个克刑隆名）噬到菌袋体(米p唇h件a闯g异e蒜)M嚼1负3舌噬酿菌矿体睁D桂N扯A揉改辞造吗系闹统铜（磁含锣l奸a此c塞Z塞基泪因逝）M某1桂3姓m丧p丢系愤列线隆性局双翻链厦D盘N收A欺分谁子斥，另大怕小海约在5炎0滋k菜b笨。酵胀母涛人谈工书染宿色敲体(究y裹e神a旨s正t冲a矩r勇t绣i蚕f挎i山c撒i剖a悼l乓c吉h战r始o剥m嘉o每s权o抄m毛e糖,俱Y挨A薪C湾)柯摸斯疼质冻粒竟载粒体(斯c疗o彩s泰m肤i脱d肢v闲e喇c零t驰o掩r话)动父物略病贿毒纲D疗N池A夫改柱造弟的点载典体（尾如俘腺丹病死毒掏，范腺已病份毒融相程关鼻病剖毒只，满逆斯转厉录肚病怨毒荒）3述.糖其狐他以质粒为载体的D芬N阵A克隆过程二撕、扑重闹组佩D瞧N槽A健技置术阀基咽本独原夹理（饰）目律的好基挂因抓的透获点取D好N孙A继导绩入唱受逗体亲菌外庙源吧基跃因傲与隔载周体折的潮连温接克矛隆俘载砌体述的两选丑择福和屯构旧建重膛组跃体衡的河筛贝选克糖隆摧基魄因家的列表欢达（体一酒）鉴目恰的神基梁因傅的模获薯取化葱学肃合渠成叫法要丑求扩：辱已胡知掉目脏的术基盐因迅的途核殃苷棉酸泛序畏列联或娱其艰产互物临的拍氨犁基瓜酸扛序蛛列诸。基膝因与组确D确N奶A镇文野库(荒g软e剑n拦o闻m垂i秧c慈D浊N仅A获l聋i缩慧b胀r漠a痒r堆y搂)c刊D壮N剂A乞文和库(该c盆D晒N锋A未l竿i溪b殖r末a下r仪y魄)聚站合抵酶水链涛反请应(这p菌o庆l旱y趁m炉e普r钢a券s搞e陆c简h弯a助i笛n佳r拣e趣a枯c居t描i计o冷n堤,裳P顶C裳R风)泳(旬见叔第哭2好2螺章且)已属知肃目贴的泡基牙因罩的央核驱苷该酸骨序列列已娘知姐基邪因纯产药物沿的际氨蚁基赔酸管序霸列沉。化潜学泡合置成闲法推宾导境出浆编赌码风基败因立核夜苷屋酸帮序松列化坐学逢合限成属仪合敬成毁目脂的困基魄因一犯般块用鉴于周小使分立子湿活绳性扬多翅肽拣基萝因刻的型合拾成早。挑如桑胰撕岛答素牲原旗、干梨扰限素满基丝式因早等材。化倍学协合决成舍法慎获稍取过目才的雾基知因由戏已店知办氨隙基分酸轨序漆列枕推针测醉可肝能部的狮D智N秘A揪序矛列岛。组草织潜或射细抄胞觉染济色岗体度D晒N斜A基给因房诚片礼断克仆隆晴载凭体重喊组拥D培N乡丰A投分浆子含骑重麦组恢分夸子谎的洽转萄化私菌限淋制筑性值内邮切蚂酶受舍体莲菌基油因支组阻D贞N斯A有文侵库存谁在丈于擦转桐化满细鱼胞罩内肝由逝克嚼隆亮载酷体丘所风携而带愧的药所纱有恰基避因皂组聋D杂N硬A旱的也集赵合从键基播因届组耻D锈N页A浓文涉库紧获樱取酒目话的门基滩因限制酶切位点限制酶消化除去中间片段cosLRcoscosL左臂Rcos右臂真核生物染色体DNA限制酶部分消化外源DNA与载体DNA混合连接反应体外包装用重组噬菌体感染大肠杆菌~20KbDNA片段cosLRcos~20Kb外源DNA片段基因文库用务随音机喉切哑割沙的寺真杠核敢生部物枝染狗色夹体狸D毯N崭A据片孤段很构阳建厅基辅因刻文景库以田m裹R息N美A聋为得模飘版偏，肯反秃转顷录盒合淹成顶c盏D页N城A粮，苦与堂载锈体周拼突接挪后篇导外入仓受当体孝菌蜘，猫即轰获折得载c馒D腥N命A谁文贡库宵。止由廉总堪m闸R极N尸A垒制驶作师的单c埋D还N坛A发文施库菊包忽含庄了络细唤胞通表鹅达须的陕各美种士m狭R冲N昏A通信惯息插，捷自课然恳也誓含射有当我折们聪感恼兴笋趣才的筋基具因科。夹目汁前勿发坚现侵的巡寿多议数敌蛋鞠白志质忽的卖编暗码村基叙因贪都斤是残如烧此蛙分架离宪的拴。从傍c凡D铸N犬A栋文宁库疼获测取号目茄的哨基烘因mRNAcDNA

双链cDNA重组DNA分子cDNA文库

反转录酶载体受体菌复制从唯c斥D鸭N铲A缝文独库脆获恋取台目悉的益基孕因逆转录酶AAAA

TTTTAAAASI核酸酶

DNA聚合酶Ⅰ碱水解

TTTT（年二宅）浸克同隆数载佳体时的寸选瘦择亚和若构但建外番源术D据N增A桌片僵断津离臂开遵染冤色漠体耀是纯不逼能病复蛛制筋的冬，必躬须索借弟助装载外体年，图随碍载度体啊的祸复侍制婚而庆复卸制羊，烈重败组马D僻N摸A酒技里术舱中充克报隆股载通体恶的价选胜择凡和厚改苹进间是梁一恩种邻极矩富姐技浆术傅型循的圾专忧门肯工义作渐，徐目暖的欠不缩慧同术、填操送作劈燕基态因害的兼性睡质斑不著同汽载典体外的淘选嫁择组和酱改盖建莲方幸法鄙也原不茂同午。（岔三退）宽外乡丰源筒基诵因此与鞠载期体再的剃连始接粘吃性罢末引端串连谈接即他D迫N愿A进的滋体棉外罗重挤组享，箩靠烦D摆N京A瓶连动接饺酶伏将未外奏源胳基姜因哑与充载购体智共缘瑞价衫连缸接使，参其肝连雕接叉方宁式蜡主叛要斧有汗：1纺）否同扰一剥限朋制由酶乱切热位努点苦连脾接2遭）自配锐伍枪末抄端乱连呢接2盐、免平瘦端冷连加接妇：非顺配蹦伍敌粘派性触末枣端饭经声特炕殊昏酶绳处吵理声，潜使京单偶链晃突缸出蝴处缴被矮补桶齐邪或壳削赛平剥，厌变孔为堵平泥端缩慧，鹿也吩可局实酷行条平桶端涝连绢接膜。目的基因载体限制性内切酶限制性内切酶T4DNA连接酶15ºC重组体载体自连目的基因自连3训、窜同煎聚插物扣加话尾纯连允接在友末酬端匹转雪移程酶逆作刻用笨下乡丰，毛在态D坡N碗A杰片污断兰末朱端膜加常上移同躲聚明物纳序路列表，角制黎造硬出智粘害性役末锁端斯，厦而叶后镜进雷行丙粘纱性愈末叠端态接玻。4悠、掀人越工拦接尿头挎连旧接对惊平敲端凭D伯N母A高片愉断书或乎载钞体瓜D泉N望A缘瑞可雄在饶连盲接摆前拜将胞磷训酸裙化甜的走接看头浸或任适黎当辽分影子膜连意到西平挠末润端骨，妻使陕产浙生职新树的往酶戴切降位哄点轨，车再磁用马识护别誓新鬼位双点性的最限辟制抗酶华切揭割咸，界产蛾生蕉粘死性盈末阳端供，尾这阳也妨是企粘醒性纪末遗端风连象接幕的忧一粗种贤特颂殊步形蜜式微。（糟四颤）棉重局组目D淘N虚A投导央入浴受称体脾菌外炉源孤D别N精A曲(堪含淡目厌的税D壤N浇A融)缘瑞与恰载脏体办在厉体焰外董连港接沿成咏重奶组钥D竹N栋A胜分吗子锤后窜，含需叮将跨其泥导球入杠受凯体舅细雁胞怎(膀形话成家转装化眼子恶)暮。翠随抛受裙体胁细膨胞毁生蹦长炒、父增青殖绸，椅重职组作D鸭N听A薯分象子茫也外复括制鹊、郑扩检增米，反这忧一滚过糟程爽即灶为葵无捆性举繁耕殖貌。受结体拍菌邻条叨件读：1愤）送容活易答接太纳值重葬组慌分扬子2苹）搏对羽载僚体庸的捉复漂制土扩王增钻无馅严修格顶要愿求3蔬）级不稼存腔在基特斤异谷的污限呢制冈-调修删饰树酶偶体里系砖降智解袋或顶修任饰外耗源疯D慌N轧A4威）族符楼合夕“案重响组抢D督N绩A韵操肯作叛规矛则挨”锁的真安熊全蛙标拜准师。1屋.直造接欧选弓择悔法(叶1穷)开抗赔药饿性晚标盖记须选钻择(田2圣)碎标叔志质补妇救膝(虹m化a香r幼k波e但r街r鲜e父s羽c征u雷e大)(挠3货)誉分煌子造杂她交题法原饺位爹杂蹦交S近o厨u竹t幅h医e街r临n兴印倡迹2镰.功免某疫姿学艺方悟法如忠免萍疫爱化摔学选方弟法杏及握酶剖免小检键测延分粪析叨等（艇五执）可重驾组蜓体追的棒筛抓选对劝于誓带似有枣抗纱药泳基姜因越的宿质规粒丙重尺组嘉体久，躺可烂采落用狂插悔入题灭捉活架法未进照行溉筛沿选薪。抗源药封性佛标工记档选痛择系(予插抹入员失逮活徐法萍)概浪念攀：某若泻克来隆纳的林基薯因摸能葛够袄在欣宿悲主蔽菌刘表震达慢，填且瓣表孔达葡产盏物津与炎宿哈主撇菌黎的熔营喇养臂缺育陷山互记补汗，静那匙么难就传可隆以擦利加用刚营刃养撞突为变盒菌共株刻进熊行珠筛抹选很，臭这逆就等是仙标柳志从补算救披。例粉如垒：标际志龟补创救组肆氨拢酸贝缺糊陷型连大贤肠洪杆同菌无斧组探氨凤酸的姑培辣养昨基酵母咪唑甘油磷酸脱水酶基因促进组氨酸合成λ噬菌体DNA重组体标烦志浪补死救α生互辨补田(杠a劲l饲p敲h哄a篮c敏o垮m璃p悠l境e肤m析e辛n浪t监a菜t碑i伸o强n仁)LacZβ-半乳糖苷酶N端146个氨基酸残基C端2顷个予片装段页组爪合滑后举有可活陈性血，普可贯使篇X若-抗g巧a躲l锤水音解才成累深拍蓝行色便产牙物痛。X茎-宁g坝a忙l（斤5总-冒溴柴-舅4腰-岗氯航-耕3粉-框吲更哚先-件b厌-骂D辨-场半律乳抚糖袄）→形腔成稠蓝两色旺菌肠落蓝麻－浙白摄筛辩选宿示绍意近图α用互封补利潜用仅α附互除补肺原呜理识筛争选骆重茫组嘱体驻p临U银C轧1北8重睬组浊D霜N芽A衔技觉术狭操初作涂过般程贞可言形纳象庭归刻纳栽为密：小妨结（益）分分离目的基因切限制酶切目的基因与载体接拼接重组体

转转入受体细胞筛筛选重组体

重自组吸D匠N始A去技挣术咏操电作组的闷主两要旷步焦骤（腐）载体质粒噬菌体病毒目的基因（外源基因）基因组DNA

cDNA人工合成PCR产物限制酶消化开环载体DNA目的基因连接酶重组体转化体外包装，转染带重组体的宿主筛选表型筛选酶切电泳鉴定菌落原位杂交蛋优白素质政表辨达印体竖系锄的鬼建抹立袍：表滴达叨载幻玉体伴的背构伪建受供体岔细窄胞踪蝶的晓建付立表乔达肤产渔物坚的絮分很离末纯偿化（枣六嚼）张克牛隆圈基阵因吗的债表还达表钻达碰体慌系绍包杜括揭原阿核咏表肯达从体蚕系筑和股真挤核级表成达纲体蔽系汉两缓类衫。1协.谱原胀核柄表授达成体窄系（E误.籍c体o蔽l粮i硬表逐达推体凤系的最谁为孔常忍用）标循准病：选欲择傍标到志秆强冶启唯动范子翻谦译数调哑控肃序昆列蓄多裹接摔头做克集隆栽位忽点E诉.嗽c已o甩l决i觉表词达钉体闸系攀的胜不非足不巡寿宜屈表新达娃真词核纹基拾因轿组散D胶N句A不条能趁加系工指表平达婆的猪真破核许蛋罢白皂质表蜘达享的尾蛋循白堡质悉常滤形危成猴不俊溶忙性元包谋涵既体(浙i黑n防c腰l植u挣s雾i奇o腊n奸b倡o国d减y云)很灾难裙表哑达左大严量根可腐溶狼性压蛋拴白（畜）优饶点蛋：可累表观达服克席隆原的护c警D篮N嚷A裙及卫真捧核普基景因喇组关D咏N狮A可烫适秒当布修墙饰失表排达镇的坛蛋呜白司质表磁达赖产槐物叫分悦区票域霞积系累缺丧点适：操卖作秀技恩术敲难全、傅费册时芒、夏经泼济2桂.侨真醉核运表赖达毅体碎系酵申母苗、毯昆详虫坊、怠哺亿乳项类剥动酒物情细桐胞应奔用附较忠多捷的迁哺暖乳路类户细垦胞烤是（勺）C韵O畅S翼细勺胞霜（舰猿储猴写肾穗细熟胞器）C基H陶O遵细题胞刻（问中姐国滚仓怀鼠页卵名巢腔细绞胞涂）第掀三在节重芒组悼D嗓N怜A虑技搏术焰与梅医延学的汉关姨系互非购常角密筐切贞并拣前引景东远线大D烛N遗A似R雨e敌c吵o严m联b墓i蚕n怎a骆t锤i叉o推n咸T科e莫c帜h宽n喷i保q茫u轿e留i堆s尚C饲l守o半s友l贼y饥R姐e牲l度a腿t毫e牌d扶w悟i晒t准h姻M肆e悲d雨i胞c挥i相n嘱e承a郊n急d唇h朱a到s赶a跃G僚o痰o渴d翅P随e恢r矮s厚p栋e炼c杀t盏i婶v续e一先、身疾兄病启基药因希的裂发判现瓶与耐克确隆根光据序基渗因耽定载位哲克邮隆手之您并景研哗究引其设性占质乳，防而咽认迁识骆疾渐病盯的着分回子挡机遗制冲。疾驱病葬基店因科发浓现满的在两眼个煎典炕型半例姓子所:脆传性男X睡综辱合议征K厚a亮l晒l溜m衫a庙n禁n吧综寄合挎征二店、奴生物沾制帽药利肉用痛基谊因筝工置程著生衔产倚有攻药乐用傻价鬼值暴的铸蛋召白赏质云、灿多队肽娇产挡品串已桑成寇为杜当皂今斯世竭界甩一拴项眠重海大汗产肥业给，悟并项将耻有村望台成融为梦2篮1胜世弯纪殖的草支籍柱培产给业耀。美穷国E赔l成i恒L臂i披l傅l筋y公嘱司摩于膀1木9习8苦2痰年毯首权先锤利散用木重叛组富D谦N短A扑技烦术妄合遣成异人砍胰