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文档简介

基因工程与基因体外表达GeneticEngineeringandgeneexpressioninvitro第13章重组DNA技术的发展史1865年G.J.Mendel的豌豆杂交试验。1944年O.T.Avery的肺炎球菌转化实验。1973年美国斯坦福大学的科学家构建第一个重组DNA分子。1977年美国南旧金山由博耶和斯旺森建立世界上第一家遗传工程公司,专门应用重组DNA技术制造医学上重要的药物。1980年开始建造第一家应用重组DNA技术生产胰岛素的工厂。1997年英国罗林研究所成功的克隆了多莉。1972年,P.Berg:构建第一个DNA重组分子1997年,动物克隆:克隆羊多莉1977年,基因工程产品的出现

H.W.Boyer,第一个基因工程产品(SS)1973年,S.S.Cohen:第一个基因克隆实验2001年,人类基因组计划一视、面重途组饲D蚊N巡寿A骂技夜术爽相亏关并概黑念克栏隆湖(亲c踢l笑o售n拖e研)描:来叨自忘同绞一诸始冻祖贝的伸相安同秃副讲本骆或呈拷杀贝窄的隔集萄合充。获姓取屈同脏一县拷赌贝朽的案过浴程蒜称币为轨克熔隆眯化盖(戴c慌l米o碎n坏i筒n叠g箱)义,贿即弦无评性拒繁您殖器。(狼一雷)促D筛N孔A孤克荣隆技州术健水餐平购:分呆子冈克真隆板(播m叶o匠l忙e叼c据u猜l眉a蒜r租c漫l笼o晌n榆e宋)(遮即围D筐N熔A免克捐隆达)细京胞州克花隆个扬体学克菜隆绵(容动融物垮或短植极物存)应留用崇酶告学句的鲁方肆法狭,迈在哪体峡外笔将冲各谱种漂来摔源箩的剑遗势传套物妨质哪(培同济源引的主或纹异岩源抢的条、久原倚核齐的肆或定真眠核肃的址、株天且然林的廊或逃人哪工街的塔D途N法A腊)判与种载吹体得D级N冶A撇接趣合亦成收一爆具将有秒自证我感复映制感能封力势的炼D事N复A犁分弊子吨—作—盐复邀制级子梨(宋r冒e福p浓l膏i敬c婶o新n蹄)捏,很继消而旷通女过逗转统化窜或括转疲染久宿震主茂细附胞跳,罚筛确选葬出抬含虾有凳目唯的遮基添因厚的群转阀化缺子瞒细鸣胞失,银再薯进砍行惕扩木增探提别取副获枝得排大衫量过同或一导D颈N稻A肌分车子火,团也才称基过因依克限隆督或抹重距组两D奶N热A肿(抚r暮e广c唯o编m件b谨i鹊n桨a勤n岭t窃D谢N订A金)。D袜N脱A由克彩隆生舅物塌技他术拌工换程岂:基灿因嘱工悠程爪、忽蛋躁白鞋质帆工怨程手、遇酶僵工脊程亡、绕细贺胞药工跳程蛛等煎。目呈的舒:①似分筝离鲁获慰得锈某州一蓄感哲兴民趣赤的妹基旨因迷或福D联N晚A②男获事得武感躁兴匪趣去基隙因控的勺表犁达蔑产幅物城(敞蛋如白鄙质从)基智因贺工柜程结(这g皆e寇n雄e皮t较i罚c轿e火n弃g山i报n裕e类e急r萄i声n禁g妹)—撑—压实笨现叼基盘因傻克纯隆比所治用凯的桑方贷法箩及幅相刚关窑的霸工燥作衣称贞基谈因插工紧程水,洲又带称亲重用组妖D茫N裂A我工裤艺件学剃。重因组斥D页N过A丛技狂术余基腥本唤原买理基雄本波原燃理目的基因的获取DNA导入受体细胞外源基因与载体的连接克隆载体的选择和构建重组体的筛选克隆基因的表达

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回文结构(palindrome)

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2、靶向性 3、有效性细胞毒性染色体毒性免疫毒性转导靶向性转录靶向性转导效率靶向性基因表达水平和持续时间表达的可调控性常娃用悦的朽病呢毒锣载愧体蕉的发特爸点搬:酵即母膝人栗工动染弱色往体(番y疗e龟a嗽s胆t望a挠r颗t疮i河f偏i周c既i纷a白l着c描h桃r愚o罗m爆o略s蚂o闻m我e贯,欲Y拥A贵C忆)细流菌吩人玩工躲染跌色躬体(蒜b不a贞c樱t攻e秧r醉i劲a适l季a禾r做t抄i屯f渗i萌c课i习a剂l芒c稀h朗r就o糟m明o驰s青o咬m给e启,煌B双A归C糟)动绩物搭病苏毒畅D逝N年A忘改插造西的组载桶体(奏如技腺宝病鸽毒修,养腺利病茫毒讨相激关慌病息毒蠢,表逆坚转肌录币病欠毒淹)5喷.劳其晌他表浆达魔载琴体指绣用标来松在隙受筐体翅细辜胞析中烧表昨达律外叉源母基影因伶的止载晕体置称泥为表还达丝式载泛体。倘表错达茧载岗体飘除隔具锤有泽克咸隆指载惰体庸所律具劣备挑的垦性帝质宽外择,倾还缘瑞带污有转抗录陵和英翻肿译黑所汉必贯需戏的堆D灶N奇A馅序拨列。然根泳据登受贫体亿细矮胞恒不室同柏,裳表终达耻载篮体瓶多餐种档多恋样限,拴如哈原覆核愉表裳达韵载裹体性、悦真绵核犯表营达胡载设体现。原抚核浴表冬达宁载早体在滑原差核餐表庄达托载罢体泄中盘除享含师有拼复上制慈起躁始夫点盏、滥抗览性椅基茶因恋、姓多项克芦隆皆位套点悦等星与谣克捏隆称载湾体冲一党样筋之桂处丽外蚂,篮还俗必族需胳含袜有启看动博子革、姨核锄糖惊体裕结嫂合爷位初点帮、歉转贸录开终哲止读序呼列等钉表榨达抄元冶件勿。原昨核寻表炎达惹系岂统卷中垂通致常葱使惊用霜的游可似调盐控齐的需启倦动翁子午有效:L样a城c拴(诉乳甲糖旬启麦动袄子杂)止、T剧r国p乏(浇色寇氨油酸迫启钟动兵子容)罗、T膊a岩c赌(恒乳怀糖或和趋色沿氨筝酸伤的尸双话启般动完子萌)就、λPL(λ噬滥菌妇体轮的凝左处向设启裤动班子迫)兽、T领7资噬誓菌怒体得启习动影子热等灰。真承核嚼表鲁达跨载陆体邮至括少猛要茶含棋两肢类侍序孩列膊:①原浴核英质萄粒臣的疲序付列,包地括周在闻大普肠娃杆惠菌员中判起赴作荣用逮的株复陆制恢起向始驼序舍列透、障能店用仆在肤细强菌溪中孝筛缘瑞选是克货隆柏的叹抗皂药棉性饰基万因远标妙志钱等锋,济以乡丰便骨插若入灵真谎核孩基傍因旧后唇能格先所在厅很堵方驰便畅操牺作率的宪大候肠秩杆辅菌拢系睡统猴中昌筛军选劈燕获设得灵目苗的蓝重猾组捏D申N催A叠克唯隆禾、斥并虎复放制揉繁罩殖裂得且到劝足桂够恶使牛用店的临数绳量霞。②在炮真拿核灰宿城主喂细纱胞胁中坟表洽达膨重标组狠基洁因嘱所茅需扒要群的残元虏件谣,包私括嗽启恢动两子将、饱增涨强睡子础、抗转隔录氧终磁止心和统加译p互o改l肥y杂-榆A鼻信幼号跑序杯列北、敬m摊R积N荐A据剪焦接涌信惊号过序拢列冒、扩能炎在谎宿年主敏细覆胞导中驴复兔制可或左增今殖挺的钓序唤列趴,讲能党用择在销宿旋主滤细政胞积中践筛低选光的浊标巨志樱基创因管、吵以禽及嫁供煎外逢源王基吸因精插裳入缸的熊单小一蛇限筐制杂性叼内另切奋酶点识竹别蜓位狮点廊等扭。选陡用瞒质木粒塘(铁最吸常晴用演)讯做工载赴体答的奸4溜点底要普求岸:①奶选向分贼子运量软小塞的适质腐粒煎,奸即惠小烟载别体山(饥1脉-呆1反.套5皇k主b隶)巾→遭不仗易矛损坏接,考在李细送菌争里帆面扰拷腔贝泽数南也结多爷(丧也替有生大沈载社体孩)太;②局一百般距使叙用势松咳弛槽型鱼质路粒香在消细乒菌免里姐扩剪增挪不滑受百约迫束夫,康一蛇般丹1绸0个街以雨上础的只拷熊贝澡,误而受严掏谨瓦型越质输粒匀<拿1拴0口个法。③燥必刊需科具招备守一饥个兽以赚上壤的奥酶双切耻位六点旧,饮有朝选回择效的亲余场地氏;④窃必腰需费有搁易石检让测押的冰标成记孤,击多匪是堆抗响生察素淡的糖抗仰性正基弱因漆,帮不侄特托指多楼位孟A记m疫pr。第牧三烧节决基研因交克写隆恭的冠过授程1往、绵制词备俗目加的耐基夕因洽和竹相澡关音载粒体2屑、口将赶目丑的探基喂因副和锡有贿关背载申体陷进状行求连蹄接3镜、横将授重关组甚本畜D铸N它A碍导甲入郑受通体谱细筝胞4惯、籍D认N伴A润重舌组勉体骨的冒筛桑选匆和渴鉴柜定5絮、退D轿N农A堡重虫组雁体蚀的蓄扩前增绞、倦表椒达迟和霞其厕他厕研载究目血的剑基肯因基阅因狗载败体重言组村体分切接转筛表总瓦体球技纷术芽路桂线以质粒为载体的D阶N愈A克隆过程化贫学互合印成打法要搅求哄:事已跨知猛目虽的订基泻因忠的礼核巷苷脉酸没序充列兄或捆其阻产雾物黄的顷氨虏基鹊酸榨序岔列研。基慕因姨组右D宜N会A祥文崇库(诵g悔e港n翻o息m谨i残c倚D迅N赞A县l辱i偿b谷r点a拨r葵y腐)c乌D疮N怠A犬文嫁库(俘c业D蚕N诸A门l均i帖b悲r畜a别r静y盆)聚袭合杀酶眯链换反捎应(籍p研o华l却y乖m淹e因r阻a纺s便e腿c煎h垄a月i弱n弯r昆e笛a易c熊t叫i巡寿o鲜n请,贤P还C芦R虚)一垫、这目在的仍基勾因违序狐列迷的光来齐源移和挎分扇离化越学吸合壮成尼法桃获皂取仁目爱的常基角因由来已叮知骄氨恭基钥酸朴序景列尖推枕测播可灾能牲的闲D准N垦A稀序咐列商。人蛮工点化轻学县合坝成诊法渴使春用感于竹:较除短不的完基图因枝(纸6施0任-还8赏0趁b旬p野)用栏途塌:突P窄C狂R神引丙物测清序败引湿物定烛点叔突谁变核嗽酸茄杂是交听探屈针组愁织并或弱细肠胞晌染挖色扔体喜D阁N添A基渴因伟片逃断克坑隆驱载毯体重将组抗D债N标A牵分拦子含猴重脏组急分呈子阁的婶转同化称菌限荣制迹性辣内耕切父酶受刷体翠菌基充因溉组耍D看N迫A矛文涝库存约在沉于劝转编化管细识胞巴内啦由烤克馋隆与载磨体团所滤携现带贪的进所挥有舱基占因貌组肆D天N预A狂的努集扶合从躬基禾因址组政D夺N孝A泰文局库增获钥取燃目皂的坑基璃因限制酶切位点限制酶消化除去中间片段cosLRcoscosL左臂Rcos右臂真核生物染色体DNA限制酶部分消化外源DNA与载体DNA混合连接反应体外包装用重组噬菌体感染大肠杆菌~20KbDNA片段cosLRcos~20Kb外源DNA片段基因文库用泊随誓机议切让割潜的零真材核准生则物序染鸽色闲体瓦D为N秒A默片茂段容构俊建萍基辟因隐文祝库c些D绕N侧A阔文烘库将某甘一代时情间焦某范一总种眯类初细星胞中标所薄有豪的珍c播D壳N泄A桃的盯混手合扎体绳与骄载倒体奸进虫行醒连犹接锻,胶使躁每逮一贯个腔c锋D旧N槐A妻分追子允都疤与严一茄个墓载初体强分盲子乎拼屠接灭成术重蓄组转D童N疯A遮,罢将门所司有少重旦组凑D阶N讨A杏分副子恼引记入拿宿龄主固细允胞只并妄进度行量扩驶增袭,拉得虏到淘分错子饺克摄隆络的成混沸合峰体劲称盟为哄c缘瑞D励N省A澡文惑库比。mRNAcDNA

双链cDNA重组DNA分子cDNA文库

反转录酶载体受体菌复制从调c潜D辆N当A箩文图库访获况取唯目途的布基廊因逆转录酶AAAA

TTTTAAAASI核酸酶

DNA聚合酶Ⅰ碱水解

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