土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)

土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)

土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法〔熏蒸提取仪器分析法〕***仿熏蒸后〔24〕,土壤微生物死亡细胞发生裂解,释放出微生物生物量碳,,借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。

依据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数〔〕,从而计算土壤微生物生物量碳。

〔〕分析仪〔—500,〕、真空枯燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

〕无乙醇***仿〔3〕;2〕:称取8724溶于1蒸馏水中3〕工作曲线的配制:、30、50、70、100系列标准碳溶液。

〔其实一般状况下,仪器会自带的标曲,一般不用自己做的〕〔过筛和水分调整略〕〔,这个可以依据自己土样的状况而定〕3份分别放入25小烧杯中。

将烧杯放入真空枯燥器中,并放置盛有无乙醇***仿〔约23〕的15烧杯2或3只,烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠,同时放入一盛有溶液的小烧杯,以汲取熏蒸过程中释放出来的2,枯燥器底部参与少量水以保持容器湿度。

盖上真空枯燥器盖子,用真空泵抽真空,使***仿沸腾5分钟。

关闭真空枯燥器阀门,于25℃黑暗条件下培育24小时。

,翻开真空枯燥器阀门〔应听到空气进入的声音,否那么熏蒸不完全,重做〕,取出盛有***仿〔可重复利用〕和稀溶液的小烧杯,清洁枯燥器,反复抽真空〔5或6次,每次3,每次抽真空后最好完全翻开枯燥器盖子〕,直到土壤无***仿味道为止。

同时,另称等量的3份土壤,置于另一枯燥器中为不熏蒸对比处理。

〔留意:熏蒸后不行久放,应当快速浸提〕※,将土样完全转移到80聚乙烯离心管中,〔土水比为1:4,考虑到土样的缘由,此局部熏蒸和不熏蒸土均为4,即,4土:16的硫酸钾溶液,当然这个参与量要依据仪器的进入量打算〕300振荡30,用中速定量滤纸过滤。

同时作3个无土壤基质空白。

土壤提取液最好马上分析,或—20℃冷冻保存〔但使用前需解冻摇匀〕〔留意这局部很重要,有讨论结果说明:提取液假如不马上分析,请保存在—20℃,否那么将影响浸提液的效果,其次,过滤时不要用一般的定性或定量滤纸,以免长期杂质会堵塞仪器的管路,建议使用那种一次性塑料注射器,,一个才1元〕。

〔这个要依据仪器自己的性能打算,但是一般状况下,在测定土壤滤液时候,要对其进行稀释,假如不稀释,一方面超过原来仪器的标曲,另一方面可能堵塞仪器。

〕注入自动总有机碳〔〕分析仪上,测定提取液有机碳含量。

由于总有机碳分析仪型号较多,不同的型号那么操作程序存在较大差异,这里以本试验室使用的有机碳分析仪〔500,〕为例。

=3—*仪器的稀释倍数*原来的水土比〔茚三***比色法〕土壤微生物生物氮一般占土壤全氮的2%—7%,是土壤中有机—无机态氮转化的一个重要环节,关于土壤微生物氮的测定常见的熏蒸浸提法有两种,一是全氮测定法,另一个是茚三***比色法,〔茚三***比色法〕和〔1988〕讨论说明新奇土样熏蒸过程所释放出的氮,主要成分为α-氨基酸态氮和铵态氮,这两种氮形态可以用茚三***反响定量测定,并发觉熏蒸与未熏蒸土壤提取的茚三***反响态氮的增量,与其土壤微生物生物量碳之间存在显著的相关性。

因此,人们采纳熏蒸提取茚三***比色法来测定土壤微生物生物量氮〔-〕。

、硬质试管、水浴锅、真空枯燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯塑料管、离心管、〕无乙醇***仿〔3〕;2〕24溶液:称取硫酸钾〔24〕87,溶于去离子水中,稀释至1000;3〕〔2〕溶液:称取氢氧化锂〔2〕168,加入冰乙酸〔优级纯〕279,加水稀释到1000,用浓盐酸或50%。

4〕茚三***溶液:取150二***亚砜〔26〕和乙酸锂溶液50参与4***合茚三***〔9432〕***〔1810622〕搅拌至完全溶解;5〕50%乙醇水溶液:吸取5099%乙醇于100容量瓶中,用蒸馏水定容;6〕1的硫酸铵[424]标准储存液:〔称前105℃烘2〕,并用硫酸钾溶液定容至1000,摇匀,于4℃冰箱中保存。

7〕[424]标准液:吸取101的硫酸铵标准储存液于100容量瓶中,,摇匀。

此溶液最好现配现用。

8〕工作曲线的制备:、、、、、、,,摇匀,其浓度分别为0、、、、、、。

〔〕〔〕〔〕,将土样完全转移到80聚乙烯离心管中,〔土水比为1:4,考虑到土样的缘由,此局部熏蒸和不熏蒸土均为2,即,2土:8的硫酸钾溶液〕300振荡30,用中速定量滤纸过滤。

同时作3个无土壤基质空白。

土壤提取液最好马上分析,或—20℃冷冻保存〔但使用前需解冻摇匀〕〔留意这局部很重要,有讨论结果说明:提取液假如不马上分析,请保存在—20℃※,否那么将影响浸提液的效果,,其次,过滤时不要用一般的定性或定量滤纸,以免长期杂质会堵塞仪器的管路,建议使用那种一次性塑料注射器,,一个才1元〕。

〔此处沸水浴不好掌握※〕,分别置于10的塑料离心管中,参与2茚三***显色剂,涡旋搅拌充分混匀,置于试管架上,在沸水中水浴15,快速冷却〔冰浴约2〕,参与5稀释液〔50%乙醇水溶液〕,摇匀于570下比色。

=3—*稀释倍数*原来的水土比*5土壤微生物生物量氮的测定〔全氮测定法,建议使用此法〕留意:所配的试剂和全自动凯氏定氮仪的试剂一样,〔〕〔〕〔〕,将土样完全转移到80聚乙烯离心管中,〔土水比为1:4,考虑到土样的缘由,此局部熏蒸和不熏蒸土均为4,即,2土:16的硫酸钾溶液〕300振荡30,用中速定量滤纸过滤。

同时作3个无土壤基质空白。

土壤提取液最好马上分析,或—20℃冷冻保存〔但使用前需解冻摇匀〕〔留意这局部很重要,有讨论结果说明:提取液假如不马上分析,请保存在—20℃※,否那么将影响浸提液的效果,,其次,过滤时不要用一般的定性或定量滤纸,以免长期杂质会堵塞仪器的管路,建议使用那种一次性塑料注射器,,一个才1元〕。

,参与24—4—,参与4浓硫酸;同时设置2—3空白〔,参与24—4—,参与4浓硫酸〕;在高温消化〔340℃消煮3个小时〕至澄清后放置2-3。

然后用全自动凯氏定氮仪测定浸提液中的全氮含量。

=-*24*14*1000*1610式中:为全氮,为滴定空白对比所消耗的标准硫酸体积〔留意:消煮一批土样至少需要3个对比※〕,为滴定土样所消耗的标准硫酸体积,24为硫酸浓度〔这个浓度要进行标定的,详细见农化分析课本〕,14为氮的摩尔质量,1000为千克转化成克,1610为从16的提取液中吸取10,为干土重所以:土壤微生物生物量氮=3—0,54见土壤微生物讨论原理与方法,主编:林先贵中科院南京土壤讨论所3土壤微生物生物量磷〔无机磷测定法〕等〔1982〕报道土壤熏蒸处理所释放出来的磷大局部为无机磷酸盐,,而且熏蒸和未熏蒸土壤之间无机磷的差异,能够反映土壤微生物生物量磷的上下。

于是,等建立了土壤微生物生物量磷的熏蒸提取无机磷测定法。

***仿熏蒸后〔24〕,,在锑钼抗混合试剂作用下提取液中正磷酸与钼酸络合形成磷钼杂多酸〔在肯定酸度条件下〕,可用磷钼比色法测定提取液最好全磷含量。

依据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机磷量的差值和转换系数〔,这个系数很重要,由于假如没有这个系数,所测定的结果就是土壤的速效磷,但是土壤微生物熏蒸后释放的磷大多数是无机磷,而速效磷包括全部水溶性磷、局部吸附态磷及有机态磷,有的土壤中还包括某些沉淀态磷,因此速效磷和无机磷的范畴不一样,不要搞混※〕以及外加无机磷的回收率〔〕作为校正系数,从而估算土壤微生物生物量磷。

、硬质试管、水浴锅、真空枯燥器、离心机、烧杯、三角瓶、聚乙烯塑料管、离心管、〕无乙醇***仿〔3〕;2〕〔3〕浸提液:,,再用蒸馏水稀释至1000。

此溶液曝于空气中可因失去2而使增高,可于液面加一层矿物油保存。

此溶液储存于塑料瓶中比在玻璃瓶中简单保存,假设储存超过一个月,应检查是否转变;3〕磷酸二氢钾溶液【〔24〕=250】:〔称量前105℃烘2~3※〕,溶于去离子水并定容至1000;4〕钼锑抗试剂:〔间鲍士旦的土壤农化分析课本〕5〕磷标准液:精确     称取在105℃烘箱中烘干的24〔分析纯〕,溶解在400水中,加浓硫酸5〔加硫酸放置霉菌,可是溶液长期保存〕,转入1000容量瓶中,加水定容至刻度。

此溶液为50磷标准液。

吸取上述磷标准液25,定容至250,即得5磷标准液〔此溶液不行久存※〕6〕工作曲线:精确     吸取5磷标准液0、、1、2、3、4、5分别放入25容量瓶中,加水至约20,然后加钼锑抗试剂4,最终用水定容至25。

30后开头进行比色。

各瓶比色液磷的浓度分别为0、、、、、、。

〔〕〔〕〔〕,将土样完全转移到250聚乙烯提取瓶中,〔土水比为1:20,考虑到土样的缺乏,这个局部称取2土,比值为2土:403〕,300振荡30,用慢速定量滤纸过滤。

同时作3个无土壤基质空白。

土壤提取液最好马上分析,或—20℃冷冻保存〔但使用前需解冻摇匀〕。

〔很重要※〕,分别放入三个50聚乙烯提取瓶,,〔3〕浸提液,同上进行提取。

用于测定外加正磷酸盐态无机磷的回收率〔〕,以校正土壤对熏蒸处理所释放出来的微生物生物量磷的吸附和固定。

土壤提取液也马上分析,或—20℃冷冻保存〔但使用前需解冻摇匀〕。

〔依样品的含磷而定〕于25容量瓶中,,溶液的参与量通常为提取液体积的