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文档简介

选修三现代生物科技专题基因工程[最新考纲]1基因工程的诞生(I)2基因工程的原理及技术(含PCR技术Ⅱ)。3基因工程的应用(I)4蛋白质工程(I)。5实验:DNA的粗提取与鉴定。考点一基因工程的基本工具及操作过程考点自主梳理夯基固本提精华1基因工程的基本工具(1)限制性核酸内切酶(限制酶)①来源:主要从原核生物中分离纯化而来。②作用:识别_特定的核苷酸序列并切开特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键③结果:产生黏性末端或平末端。如下图所示,EcoRI限制酶识别的碱基序列是GAATTO,切割位点在G和A之间;SmaI限制酶识别的碱基序列是CCCGGG,切割位点在G和C之间;说明限制酶具有专一性。切点GAAFTTCEcoRIAATTCCTTIAAGCTTAA中轴线切点黏性末端CCCIGGGSmaIGGGGGGCCC中轴线(切点)平末端(2DNA连接酶①作用:将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子②类型常用类型Ecolidna连接酶T4DNA连接酶来源大肠杆菌T噬菌体功能只“缝合”劲性末端“缝合”黏性末端和平_末端结果{恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键(3)载体化学本质:双链环状DNA分子能自我复制①常用载体一质m特点1割位点有一个至多个限制酶切有特殊的标记基因②其他载体:λ噬菌体衍生物、动植物病毒等③载体的作用:携带外源DNA片段进入受体细胞深度思考?(1)基因工程2种工具酶的化学本质分别是什么?运载体的种类有哪些?提示限制酶、DNA连接酶其化学本质均为蛋白质。运载体的种类有质粒(常用)、λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。(2)限制酶为何不切割自身DNA?提示限制酶具有特异性,即一种限制酶只能识别特定的碱基序列,并在特定的位点上进行切割;限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。(3)限制性核酸内切酶MwnI和限制性核酸内切酶EcoR的识别序列及切割位点分别是和如图CAATTG—GAATTO表示四种质粒和目的基因,其中箭头所指部位为限制性核酸内切酶的识别位点,质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体的质粒是哪一种?并指明理由目的基因CTTAAGCTTAAGGAATTCGAATTC含目的基因的DNA片段MunEcoRIEcoRI提示适合的质敉是①。由图可知,质粒②上无标记基因,不适合作为载体;质粒③和④的标记基因上都有限制性核酸内切酶的识别位点,使用该酶后将会导致标记基因遭破坏,故均不宜选作载体2基因工程的基本操作程序(1)目的基因的获取①目的基因:主要指编码蛋白质的基因,也可以是一些具调控_作用的因子

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