子宫内膜异位症中的表达及意义

1ActivinA、InhibinA在子宫内膜异位症中的表达及意义

专业：妇产科学研究生：导师：2主要内容第二章材料与方法第三章结果第四章附图第五章讨论第一章前言第六章结论3第一章前言

前言

4研究背景

前言

5子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)，简称內异症，是指具有活性的子宫内膜组织（腺体和间质）出现在子宫内膜以外部位。

前言

6內异症是育龄期妇女的多发病、常见病

不孕月经异常、盆腔包块痛经、慢性盆腔疼痛影响生活质量前言

7其发病机制至今尚未阐明，且复发率高，治疗棘手，国内外妇产科学者一直在努力探索其发病机制，以利于这一疾病的治疗而成为妇产科医学研究的热点和难点。

前言

8

內异症发病机制现有学说內异症诱导学说免疫学说

子宫内膜种植学说

其他学说体腔上皮化生学说3A模式学说

淋巴及静脉播散学说前言

9“3A模式学说”：月经期返流的子宫内膜需要黏附（Attachment）、侵袭（Aggression），并诱导新生血管形成（Angiogenesis），最终发展成为有临床症状的疾病。

前言

生根生病生长內异症10前言

“免疫学说”认为：内异症是一种自身免疫性疾病，机体免疫功能逐渐减退，子宫内膜细胞如同肿瘤细胞一样可能发生免疫逃逸，对异位内膜细胞的特异性免疫减弱，免疫监视、清除异位细胞能力下降，使异位内膜得以存活、增殖并导致局部纤维增生、粘连。11前列腺生殖组织非生殖组织脑胎盘子宫内膜胰腺肾脏骨髓睾丸垂体肝脏肾上腺ActivinA(激活素A)是一种主要由性腺分泌的大分子糖蛋白，属于转化生长因子β（TGF-β）超家族球蛋白成员。ActivinA存在于前言

卵巢12粘附性↑ActivinA纤维连接蛋白,结缔组织生长因子↑侵袭性↑ActivinA上皮型钙粘蛋白↓，MMP-2、3、7、9和白血病抑制因子↑ActivinA促进增殖促进血管形成前言

13

内异症是具有类似恶性肿瘤的生物学行为的良性病变,子宫内膜细胞的粘附、侵袭、增殖能力及血管形成对內异症的发病具有极其重要的作用，ActivinA虽具有以上生物学作用,但是目前国内外关于ActivinA的研究主要集中在PCOS、子痫前期、卵巢肿瘤等妇产科疾病和内科的纤维增生性疾病,而其在內异症方面的研究并不多,仅国外少数学者有研究,国内尚无內异症方面的研究。前言

14前言

InhibinA（抑制素A）与ActivinA一样，同是大分子糖蛋白，也属于转化生长因子β（TGF-β）超家族球蛋白成员。15最初对其生物学作用的认识是反馈性抑制垂体FSH的分泌并影响卵泡的生长发育，后来发现其也具有生长因子样作用，在组织再生中调控组织细胞的生长和分化,而且InhibinA在细胞免疫中也起作用。而InhibinA在内异症方面的研究，虽国外已有报道，但国内尚处于空白阶段。前言

16二者在內异症的表达如何？是否对內异症的发生发展起作用？二者是否存在相互关系？都值得我们研究和探讨。？前言

17研究目的

前言

18

免疫组化SP法

检测ActivinA和InhibinA蛋白在內异症组异位内膜、在位内膜及对照组正常子宫内膜中的表达。

探讨ActivinA和InhibinA在內异症发病中的作用及相互关系。

前言

19第二章材料与方法

材料与方法20各组患者年龄无统计学差异，月经周期规则，无其他内分泌、免疫及代谢性疾病，术前6个月内未接受激素治疗。异位内膜（32例）在位内膜（32例）增生期16例分泌期16例增生期18例分泌期16例增生期16例分泌期16例输卵管吻合术、不孕症（输卵管因素）、卵巢囊肿。正常内膜（34例）研究对象Ⅰ～Ⅱ期11例，Ⅲ～Ⅳ期21例

材料与方法对照组实验组21主要仪器

普通光学显微镜TGW16高速微型离心机DR28429精密可调微量移液器微波炉BL-220H电子天平4℃冰箱LGE-10-400H超纯水机盖玻片载玻片移液器管咀塑料修复盒

材料与方法22主要试剂

即用型封闭用兔血清即用型封闭用羊血清浓缩型羊抗人ActivinA多克隆抗体即用型兔抗人InhibinA多克隆抗体浓缩型兔抗羊IgG-HRP

即用型羊抗兔IgG-HRP

辣根酶标记链霉卵白素工作液AEC显色试剂盒苏木素甘油明胶30%过氧化氢柠檬酸缓冲液EDTA抗原修复液二甲苯无水乙醇松节油无水磷酸氢二钠氯化钾磷酸二氢钾氯化钠

材料与方法23

组织切片切片常规脱蜡至水化

滴加3%H2O2室温10分钟

滴加封闭用血清工作液,室温10-15分钟,倾去,勿洗

高压抗原修复

滴加一抗工作液，4℃过夜

滴加二抗工作液,室温10-15分钟

AEC显色剂显色,苏木素复染封片

镜检

滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温10～15分钟

实验步骤

材料与方法24

染色强度无着色0浅着色1中等着色2强着色3

阳性细胞数<5%05-10%111-50%2>50%3免疫组化积分

+免疫组化结果判定

=ActivinA和InhibinA蛋白的阳性信号均为细胞浆内出现红色颗粒,用已知阳性片作阳性对照,PBS代替一抗作阴性对照。材料与方法25统计分析材料与方法实验数据运用SPSS17.0统计软件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差表示，先进行正态性检验符合正态分布的两组间的均数比较采用两样本t检验，多组间的均数比较采用单因素方差分析（One-wayANOVA），两测量指标的相关性采用pearson相关分析检验水准α=0.05(双尾)，P<0.05表示有显著性差异。26第三章结果结果27ActivinA蛋白的表达

结果28ActivinA蛋白的表达

结果29ActivinA蛋白的表达

结果30ActivinA蛋白的表达

结果31ActivinA蛋白的表达

结果32InhibinA蛋白的表达

结果33InhibinA蛋白的表达

结果34InhibinA蛋白的表达

结果35InhibinA蛋白的表达

结果36InhibinA蛋白的表达

结果37ActivinA与InhibinA相关关系

图3-11ActivinA蛋白和InhibinA蛋白在异位内膜中表达的相关性分析图3-11ActivinA蛋白和InhibinA蛋白在在位内膜中表达的相关性分析图3-11ActivinA蛋白和InhibinA蛋白在正常内膜中表达的相关性分析r=0.925，P＜0.05r=0.924，P＜0.05r=0.893，P＜0.05呈正相关关系结果38第四章附图附图39图5正常子宫内膜增生期

以下图片为HE染色，×200图6正常子宫内膜分泌期

图3內异症在位内膜增生期

图4內异症在位内膜分泌期

图1內异症异位内膜增生期

图2內异症异位内膜分泌期附图40以下图片为免疫组化AEC染色，×200附图图7ActivinA蛋白在前列腺增生症组织中的阳性表达（阳性对照）图8ActivinA蛋白在子宫内膜组织中的阴性表达（阴性对照）图11ActivinA蛋白在內异症在位内膜增生期呈阳性表达图12ActivinA蛋白在內异症在位内膜分泌期呈阳性表达图9ActivinA蛋白在內异症异位内膜增生期呈强阳性表达图10ActivinA蛋白在內异症异位内膜分泌期呈强阳性表达41以下图片为免疫组化AEC染色，×200附图图15InhibinA蛋白在肾上腺皮质腺瘤组织中的阳性表达（阳性对照）图16InhibinA蛋白在子宫内膜组织中的阴性表达（阴性对照）图13ActivinA蛋白在正常子宫内膜组织增生期呈弱阳性表达图14ActivinA蛋白在正常子宫内膜组织分泌期呈弱阳性表达图17InhibinA蛋白在內异症异位内膜增生期呈强阳性表达图18InhibinA蛋白在內异症异位内膜分泌期呈强阳性表达42以下图片为免疫组化AEC染色，×200附图图19InhibinA蛋白在內异症在位内膜增生期呈阳性表达图20InhibinA蛋白在內异症在位内膜分泌期呈阳性表达图21InhibinA蛋白在正常子宫内膜组织增生期呈弱阳性表达图22InhibinA蛋白在正常子宫内膜组织分泌期呈弱阳性表达43第五章讨论讨论44

ActivinA、InhibinA均为转化生长因子β(TGF-β)超家族球蛋白成员。

InhibinαInhibinβAInhibinβAInhibinβA-S-S-

-S-S-

ActivinA

InhibinA

讨论ActivinA和InhibinA的结构45细胞粘附性细胞侵袭性细胞增殖血管形成ActivinAActivinA的作用讨论纤维连接蛋白、结缔组织生长因子↑VEGF和VEGF受体↑，作为自分泌因子增强VEGF的作用上皮型钙粘蛋白↓MMP-2、3、7、9和白血病抑制因子↑旁分泌作用46异位在位正常ActivinA在各组内膜的表达各组内膜都能产生ActivinA,与国外学者Reis和Mabuchi的研究结果相似。內异症组异位和在位内膜较正常内膜能产生更多的ActivinA,说明其在內异症的发病中可能起作用,与Rombauts的研究结果一致。讨论ActivinA在异位内膜高表达可能通过增加细胞粘附性、侵袭性、增殖能力，并促进血管形成而促进內异症发生。佐证了“3A发病模式”。47

ActivinA蛋白在正常内膜:分泌期＞增生期,与Ciarmela的研究结果一致,提示分泌期的子宫内膜细胞较增生期子宫内膜细胞能产生更多的ActivinA。我们还发现：ActivinA蛋白在內异症组异位内膜和在位内膜：分泌期＞增生期，提示ActivinA蛋白在腺上皮细胞中的周期性表达似与卵巢激素的周期性分泌相关,可能与雌、孕激素的调节有关。ActivinA在月经周期的表达讨论48推测与病情严重程度相关Ⅲ～Ⅳ期＞Ⅰ～Ⅱ期随着內异症病变的发展，异位病灶与周围组织器官形成过度纤维化，可导致瘢痕形成、慢性盆腔疼痛以及受累的组织器官功能减弱甚至散失，为卵巢异位囊肿的临床特征之一。研究表明ActivinA能通过促进Ⅰ型胶原的表达促进肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化的发生和发展。已有研究证实Ⅰ型胶原是內异症纤维化最主要的因子。ActivinA在不同临床分期的表达

ActivinA也可能通过增加Ⅰ型胶原的表达促进內异症纤维化进展，从而加重病情,是內异症发展中的一个重要因素。讨论49Findlay研究发现Inhibin与Activin、TGF-β、巨噬细胞游走抑制因子等都是转化生长因子β超家族成员,具有自分泌、旁分泌生长因子活性，参与垂体、性腺、胎盘等多种组织细胞的生长和分化。InhibinA可减少Ⅱ型主要组织相容性复合物(MHCⅡ)的表达,MHCⅡ是抗原呈现和T细胞通过T细胞受体活化所必需的,其表达减少则导致T细胞反应降低,从而降低免疫反应,而且InhibinA还可抑制免疫活性细胞(如巨噬细胞)的补充和活化InhibinA的作用讨论50

不仅如此，我们的结果还表明內异症组异位内膜较在位内膜和正常内膜能产生更多的InhibinA，在位内膜较正常内膜也能产生更多的InhibinA，可能是內异症发生发展的原因之一。

表明各组内膜都能产生InhibinA,与国外学者Reis、Akande的研究结果一致。InhibinA在各组内膜的表达异位在位正常讨论51生长因子样作用降低免疫反应InhibinA异位内膜高表达内异症的发生讨论52

本研究发现InhibinA蛋白在各组内膜的表达：分泌期＞增生期,与Anderson和Klein的研究结果一致，提示InhibinA分泌高峰在黄体期。InhibinA在月经周期中的表达讨论53

本研究结果还显示InhibinA蛋白在內异症Ⅲ～Ⅳ期的表达强于Ⅰ～Ⅱ期。提示內异症患者InhibinA蛋白表达水平与內异症的进展有关。

InhibinA在不同临床分期的表达讨论54ActivinA与InhibinA的相互关系我们的实验：二者在各组内膜均存在正相关关系（P<0.05）ActivinAInhibinA

ActivinA和InhibinA在內异症发病中可

能存在协同作用，但具体作用机制值得进一步研究探讨。

讨论55第六章结论结论561

ActivinA和InhibinA在內异症表达增强，提示ActivinA和InhibinA可能参与內异症发病；2ActivinA和InhibinA在各组子宫内膜组织中的表达与月经周期有关