雌二醇测定标准操作规程

雌二醇测定标准操作规程1.1检验原理：采用延迟一步法免疫检测，运用化学发光微粒子免疫检测（CMIA）技术与灵活的检测模式的结合，测定人血清和血浆中的雌二醇。1.1将样本、样本稀释液、项目稀释液＆雌二醇抗体（兔、单克隆）包被的顺磁微粒子混合。样本中的雌二醇与雌二醇抗体包被的微粒子结合。1.2孵育后，将娅啶酯标记的雌二醇结合物加入混合物中。1.3进一步孵育和冲洗后，向反应混合物中加入预激发液和激发液。1.4测量产生的化学发光反应，用相对发光单位（RLUs）表示。样本中的孕酮含量和ARCHITECTi光学系统检测到的RLUs值成反比。2.试剂主要组成部分：2.1试剂盒微粒子：雌二醇抗体（兔、单克隆）包被的微粒子，储存于含有蛋白（兔）稳定剂的三羟甲基氨基甲烷/双（2-羟乙基）亚氨基三（羟甲基）甲烷（TRIS/BIS-TRIS）缓冲液中。最低浓度：0.0657%固体物质。防腐剂：ProClin.结合物：吖啶酯标记的雌二醇抗体结合物，储存于含有表面活性剂柠檬酸盐缓冲液中。最低浓度：63.36ng/mL.防腐剂：ProClin.项目稀释液：雌二醇项目稀释液含有表面活性剂，储存于柠檬酸盐缓冲液中。防腐剂：ProClin。样本稀释液：雌二醇样本稀释液中，含有蛋白（牛）稳定剂的三羟基氨基甲烷（TRIS）缓冲液。防腐剂：叠氮钠。2.2需要但未提供的试剂预激发液：预激发液含有1.32%（W/V）过氧化氢激发液：激发液含有0.35N氢氧化钠浓缩清洗缓冲液：浓缩清洗缓冲液含有磷酸盐缓冲液。防腐剂：抗菌剂。3.样本要求：样本类型采集管玻璃塑料血清血清血清血清分离管血清分离管血浆肝素锂肝素锂血浆分离管血浆分离管EDTA钾EDTA血清和血浆样本中应不含纤维蛋白、红细胞或其他颗粒物质。2-8℃可保存7天；如果不能在七天内检测，应将样本冻存在-20℃以下。样本应避免反复冻融。4.检验方法：仪器法（详见雅培i1000标准操作规程）5.参考范围样本参考范围（pg/ml）血清、血浆男性11-14女性卵泡期：21-251排卵期：38-649黄体期：21-312绝经期不在HRT:＜10-28绝经期在HRT:＜10-1446.检验结果的解释雌二醇项目通过四参数Logistic曲线拟合数据约简法（4PLC,Y加权）生成一条校准曲线7.检验方法的局限性7.1将检测结果用于诊断时，应与其他数据：如症状、其他检查结果、临床表现等结合使用。7.2雌二醇检测结果与临床症状不符时，需要通过附加试验来验证检测结果。7.3人血清中的异嗜性抗体可与试剂中的免疫球蛋白发生反应，干扰体外免疫测定。经常与动物或动物血清产品接触的患者，其样本可能容易受到此干扰，并使检测结果出现异常值。可能需要其他信息用于诊断。8.产品性能指标8.1精密度：雅培雌二醇检测低值质控品（45pg/mL）时的精度≦5pg/mL（总SD），检测中值质控品（190pg/mL）和高值质控品（600pg/mL）时的精密度为总CV≤7%8.2分析灵敏度：ARCHITECT雌二醇项目的分析灵敏度≦10pg/mL。8.3功能灵敏度：ARCHITECT雌二醇项目的功能灵敏度≦25pg/mL。8.4特异性：ARCHITECT雌二醇检测中，存在以下浓度的化合物时，其回收率为100±10%（详见试剂盒说明书）干扰物雌二醇浓度干扰物浓度回收率（%）雌酮750pg/mL300pg/mL93.9雌酮4000pg/mL1500pg/mL92.8雌三醇4000pg/mL1500pg/mL98.4雌三醇150pg/mL2500pg/mL92.18.5干扰性项目浓度干扰率血红蛋白500mg/dL＜10%胆红素20mg/dL＜10%甘油三酯1000mg/dL＜10%蛋白质4g/dL和12g/dL＜10%胆固醇240mg/dL＜10%8.6方法比较：将ARCHITECT雌二醇项目与同位素稀释一气相色谱/质谱分析进行比较，检测浓度在10-1000pg/mL时斜率为1.00±0.10，检测浓度在10-5000pg/mL时，斜率为1.00±0.15，两个范围的相关系数（r）均≧0.959.临床意义：雌二醇是人体内作用最强的天然雌激素。它负责调节女性的生殖功能，并和孕酮一起维持妊娠。虽然大部分雌二醇由卵巢分泌（非妊娠女性），但睾丸（男性）和肾上腺皮质（男性和女性）也分泌少量雌二醇。妊娠期间血液中的大部分雌二醇都是由胎盘产生的。雌二醇和雌酮在体内相互转化。在正常非妊娠女性中，由卵巢所合成的雌二醇是雌酮和雌三醇的主要来源。血液中几乎所有的雌二醇都以蛋白结合形式存在。据报道，雌二醇与性激素结合球蛋白及人血白蛋白的结合常数分别为6.8x108和6x104。1因此，所有血清雌二醇的检测都必须把雌二醇从其结合蛋白上定量释放出来。与蛋白结合的雌二醇和游离雌二醇的含量及比例会因性别、妊娠和月经周期而异。正常雌二醇水平在月经期间以及卵泡发育早期（25-75pg/mL）时最低，到了卵泡发育晚期，促黄体生成素（LH）激增之前上升至峰值200-600pg/mL，正常情况下，LH激增后便开始排卵。LH到达峰值后，雌二醇水平开始下降，直至黄体期再次升高(100-300pg/mL)。如果没有受孕，雌二醇将进一步下降至最低水平，随后进入月经期。如果此时受孕，雌二醇水平将继续升高，在妊娠前3个月达到1,000-5,000pg/mL，在妊娠中3个月时达到5,000-15,000pg/mL，到妊娠后3个月时达10,000-40,000pg/mL。绝经后，雌二醇会维持在低值。由于在正常女性中，大部分雌二醇由卵巢产生，所以对此种激素浓度的测定结果有时可以用来评估卵巢功能。此