孕酮测定标准操作规程

孕酮测定标准操作规程1检验原理：采用一步法免疫检测，运用化学发光微粒子免疫检测（CMIA）技术与灵活的检测模式的结合，测定人血清和血浆中的孕酮。混合样本，荧光素抗体（鼠、单克隆）荧光素-孕酮复合物包被的顺磁微粒子和吖啶酯标记的孕酮抗体（羊，单克隆）结合物，制成反应混合物。样本中的孕酮与荧光素抗体（鼠、单克隆）荧光素-孕酮复合物包被的微粒子通过竞争与吖啶酯标记的孕酮抗体（羊，单克隆）结合物相结合，形成抗体－抗原－抗体复合物。冲洗后，将预激发液和激发液加入反应混合物中；然后测量产生的化学发光反应，用相对发光单位（RLUs）表示。样本中的孕酮含量和ARCHITECTi光学系统检测到的RLUs值成反比。2.试剂主要组成部分：2.1试剂盒微粒子：荧光素抗体（鼠、单克隆）荧光素－孕酮复合物包被的微粒子，储存于含有蛋白（牛和鼠）和表面活性剂的三羟甲基氨基甲烷（TRIS）缓冲液中。浓度：0.1%固体物质。防腐剂：叠氮钠和ProClin.结合物：吖啶酯标记的孕酮抗体（绵羊、单克隆）结合物，储存于含有蛋白（牛和羊）稳定剂的2-（N-吗啡啉）乙磺酸（MES）缓冲液中。最低浓度：7ng/mL.防腐剂：叠氮钠和ProClin.项目稀释液：孕酮项目稀释液含有添加了化学稳定剂的三羟甲基氨基甲烷（TRIS）缓冲液中。防腐剂：叠氮钠。2.2需要但未提供的试剂预激发液：预激发液含有1.32%（W/V）过氧化氢激发液：激发液含有0.35N氢氧化钠浓缩清洗缓冲液：浓缩清洗缓冲液含有磷酸盐缓冲液。防腐剂：抗菌剂。3.样本要求：人血清（包括采集于血清分离管中的血清）或采集于肝素、肝素锂或EDTA钾抗凝管中的血浆。血清和血浆样本中应不含纤维蛋白、红细胞或其他颗粒物质。2-8℃可保存10天；-10℃以下可保存6个月。样本应避免反复冻融。4.检验方法：仪器法（详见雅培i1000标准操作规程）5.参考范围样本参考范围（ng/mL）血清或血浆男性＜0.1-0.2正常女性卵泡期：＜0.1-0.3黄体期：1.2-15.9绝经期：＜0.1-0.2怀孕3个月：2.8-147.33—6个月：22.5-95.36—9个月：27.9-242.56.检验结果的解释6.1孕酮项目通过四参数Logistic曲线拟合数据约简法（4PLC,Y加权）生成一条校准曲线6.2结果单位转换：浓度（uIU/ml）×1=浓度（mIU/ml）7.检验方法的局限性7.1将检测结果用于诊断时，应与其他数据：如症状、其他检查结果、临床表现等结合使用。7.2孕酮检测结果与临床症状不符时，需要通过附加试验来验证检测结果。7.3接受小鼠单克隆抗体制剂诊断或治疗的患者，其样本中可能含有人小鼠抗体（HAMA）。使用含有小鼠单克隆抗体的试剂盒检测此样本时，检测值可能会假性升高或降低。7.4人血清中的异嗜性抗体可与试剂中的免疫球蛋白发生反应，干扰体外免疫测定。经常与动物或动物血清产品接触的患者，其样本可能容易受到此干扰，并使检测结果出现异常值。可能需要其他信息用于诊断。8.产品性能指标8.1精密度：孕酮素项目的精密度为总CV≤10%8.2回收率：通过检测已知孕酮浓度的样本得出孕酮项目的平均回收率为100±10%8.3分析灵敏度：孕酮项目的分析灵敏度≦0.1ng/mL。8.4特异性：通过检测化合物交叉反应，得出孕酮项目的交叉反应率来＜5%（详见试剂盒说明书）8.5干扰性项目浓度干扰率血红蛋白≤500mg/dL＜10%胆红素≤20mg/dL＜10%甘油三酯≤1000mg/dL＜10%蛋白质4g/dL和12g/dL＜10%8.6准确度（相关性）：孕酮项目与商用检测试剂相比，项目比较的斜率为0.8-1.2，相关系数（r）≧0.959.临床意义：在月经正常的女性中，孕酮主要由卵巢的黄体分泌，少部分经肾上腺皮质分泌。大约在妊娠第6周时，胎盘成为孕酮的主要来源。孕酮的主要功能是为受精卵着床做好准备并维持妊娠。孕酮在卵泡期维持在较低水平（0.2-1.5ng/mL）。黄体生成激素（LH）分泌量激增以及排卵以后，破裂卵泡中的黄体细胞在LH作用下，产生孕酮。孕酮在黄体期急速上升，排卵后第5至7天，最多上升到10-20ng/mL。如果没有受孕，孕酮则会由于黄体的退化在周期的最后4天下降。如果发生受孕，那么黄体会使孕酮维持在黄体中期的浓度，直到妊娠的第6周为止。到那时，胎盘便成为孕酮的主要来源，且浓度会从妊娠前3个月的10-50ng/mL左右上升至妊娠后3个月的50-280ng/mL左右。血清孕酮在排卵期迅速上升，因此可以作为自然或诱导排卵的可靠指标。排卵异常，包括无排卵，相对比较常见，并且可导致大约15%-20%的患者不孕。黄体中期，这些患者的孕酮出现异常低的水平。黄体功能不全是一种与不孕和自发性流产有关的生殖疾病，在10%的不孕女性中可以见到。一般认为与这种疾病有关的不孕和流产是由子宫内膜发育不成熟所致。黄体产生的孕酮不足被认为是导致子宫内膜发育不全的主要原因。患有黄体功能不全的女性，其黄体期孕酮浓度低于正常水平。现已证实，在妊娠的前10周检测孕酮可以作为对先兆流产